中药制剂分析鉴别

【目的要求】•掌握中药制剂的常用鉴别方法和鉴别依据•熟悉中药制剂鉴别工作的基本程序。•了解中药制剂鉴别的目的、意义以及在中药制剂质量控制与质量评价中的作用。思考题•中药制剂的性状应该如何描述？描述的内容有哪些？•中药制剂的显微鉴别与单味药材的粉末鉴别有何异同?下列哪些制剂可以使用显微鉴别法？各制剂相关药味显微鉴别特征是什么？六味地黄丸，口炎清颗粒，归芍地黄丸，牛黄解毒片，小建中合剂，七厘散思考题•中药制剂常用的鉴别方法有哪些？为什么对一个药品的鉴别试验常采用几种鉴别方法？•试阐述中药对照品、对照药材和对照提取物在中药制剂鉴别中的作用和意义。•影响中药成方薄层色谱行为的主要因素有哪些？如何考察薄层色谱方法的专属性、重现性和耐用性？基本概念•中药制剂定性鉴别利用中药制剂中各单味药材的形态、组织学特征及所含化学成分的结构特征、化学反应、光谱特征、色谱特征及某些物理化学常数来鉴别中药制剂各单味药材的真伪及存在与否的分析方法。第二节鉴别中药制剂的鉴别药味的选取原则如下单味制剂；复方制剂，按照君臣佐使依次选择药味药味较多时，应首选君、臣药、贵重药、毒药鉴别处方中每一药味均鉴别，选择尽量多的药味写入质量标准，不少于处方1/3药味。生物鉴别鉴别方法理化鉴别法显微鉴别法化学反应法微量升华法毛细管电泳法光谱法色谱分析法性状鉴别法颜色形态形状气味其他CyclenameAddYourText第一节性状鉴别（Description）一、基本内容主要中药剂型的性状要求大山楂丸－本品为棕红色或褐色的大蜜丸；味酸、甜。三黄片－本品为糖衣片，除去糖衣后显棕色，味苦，微涩。小儿化毒散－本品为杏黄色至棕黄色的粉末；味苦，有清凉感。正骨水－本品为棕红色的澄清液体，气芳香。金刚藤胶囊－本品为胶囊剂，内容物为棕黄色或棕褐色的颗粒，气微香，味苦、涩。第一节性状鉴别（Description）折光率旋光度比旋度熔点凝点相对密度反映药物的纯净程度二、物理常数第一节性状鉴别（Description）•折光率：20℃，用钠光谱的D线(589.3nm)测定供试品相对于空气的折光率。区分不同的油类或检查药品的纯杂程度•旋光度和比旋度：20℃，用钠光谱的D线(589.3nm)测定旋光度，除另有规定外，测定管长度为1dm。–比旋度α为测得的旋光度–L为测定管长度dm–d为液体的相对密度–区分或检查药品的纯杂程度，或测定含量ld][tD例：薄荷油“折光率应为1.456-1.466（附录VIIF）旋光度取本品，依法测定（附录VIIE），旋光度应为-17°至-24°”第一节性状鉴别（Description）相对密度：比重瓶法（液体）韦氏比重秤法（易挥发液体）熔点：毛细管测定法毛细管法测定熔点第一节性状鉴别（Description）•鉴别内容粉末组织、细胞或内含物等生物学特征•由药材粉末直接制成的制剂或添加有部分药材粉末的制剂•主要药味化学成分不清楚或尚无化学鉴别第二节显微鉴别(microscopicidentification)显微定性鉴别的特点—复杂、相互干扰。重现性差①根据制剂特点进行预处理。②原中药粉末的显微特征，不一定能作该制剂的鉴别特征。③选择各原料药中较具专属性的显微特征作为鉴别依据。第二节显微鉴别显微定性鉴别的方法1.了解制剂处方，制法及可进行显微鉴别的药材品种，对比分析其中各药味的粉末特征。2.排除交叉干扰，明确专属特征。要求：显微特征在处方中和处方外均具有专属性第二节显微鉴别牛黄解毒片中大黄的显微鉴别1.所用器材显微镜：光学显微镜、电子显微镜、扫描电镜等。1.注意事项①显微特征明显，易查见，否则可能做出假阴性的判定。②取样注意代表性。第二节显微鉴别第二节显微鉴别一、制片方法1．散剂、胶囊剂取粉末，直接加水或水合氯醛透化装片。2．片剂用刀片直接从药片断面刮取少量粉末或研碎后取少量样品透化装片。3．水丸、锭剂研成粉末后取少量直接透化装片。4．蜜丸由于蜂蜜粘结药材粉末的细胞核组织，难于观察，需去除粘结使解离，方法有：水洗后离心法。第二节显微鉴别一、制片方法5.解离组织制片（1）氢氧化钾法；（2）硝铬酸法；（3）氯酸钾法。样品中含有木化组织较多或集成较大群束，不易进行观察。第二节显微鉴别若观察细胞内含物形状，应选用不同试剂制片1.淀粉粒水或甘油醋酸试液；2.糊粉粒甘油；3.水溶性内含物乙醇或水合氯醛试液(不加热)第二节显微鉴别(一)根及根茎类1.原生木质部；2.皮层；3.维管束；4.石细胞；5.淀粉粒；6.草酸钙结晶。茎类皮类木类表皮细胞、垂周壁的形状，气孔，毛茸；导管；管胞；纤维；草酸钙结晶。薄壁组织碎片、石细胞。不应含有木质部组织，如导管、管胞等。纤维、石细胞、草酸钙簇晶细胞壁通常均木化。不应有木栓细胞及绿色组织等导管、管胞、木纤维、木射线及木薄壁细胞。第二节显微鉴别(二)茎木类第二节显微鉴别(三)叶类1．表皮2．气孔3．毛茸注意毛茸的种类。第二节显微鉴别(四)花类1．苞片及花萼构造类同叶片，表面上可见到气孔及毛茸2．花冠上表皮细胞常呈乳头状或绒毛状突起而无气孔，下表皮细胞常不呈乳头状，细胞壁微波状弯曲。维管束组织细小。第二节显微鉴别3．雄蕊1）花粉囊内壁细胞的壁不均匀地增厚，呈网状、螺旋状、环纹状及点状等；2）花粉粒具圆形、长圆形或多面形等多种形状。通常具内外两层壁，外壁多数具各种雕纹。4．雌蕊柱头的表皮细胞呈乳头状突起，或分化成绒毛状第二节显微鉴别(五)果实类1．果皮细胞的形状、大小。2．外果皮上可能有非腺毛及腺毛。3．中果皮内的分泌组织4．内果皮石细胞，大小、细胞壁的厚薄，如为镶嵌层，则应注意其排列形式。有无分泌组织及细胞的内含物。-细胞大小、形状、壁厚、色泽、细胞内含物-表皮毛的形状、细胞壁的厚薄、是否木化、有无纹理；石细胞形状、大小、色泽散布及细胞壁的增厚情况。栅状细胞及油细胞。-细胞形状、厚度、内含物。种皮内胚乳外胚乳子叶第二节显微鉴别(七)种子类第二节显微鉴别•应用实例1牛黄解毒丸显微鉴别处方：牛黄、雄黄、石膏、大黄、黄芩、桔梗、冰片、甘草。2.九分散显微鉴别处方：马钱子粉、麻黄、乳香（制）、没药（制）第二节显微鉴别作业：1.六味地黄丸的显微定性鉴别熟地黄；山茱萸；山药；牡丹皮；茯苓；泽泻。块根果实根茎皮类菌核根及根茎作业2.银翘解毒片：金银花、连翘、薄荷、荆芥、淡豆豉、牛蒡子（制）、桔梗、淡竹叶、甘草金银花、桔梗以生药粉投料，可显微鉴别3.蛇胆川贝散：蛇胆汁、川贝母。川贝母粉碎成细粉入药，可显微鉴别4.小儿惊风散：全蝎、僵蚕、雄黄、朱砂、甘草。五味药以生药粉投料，均可显微鉴别。显微化学鉴别法升华法（Sublimation）(一)原理利用某些成分的升华性，在一定温度下将其从制剂中升华分离出来，并以升华物所具有的某些理化性质作为制剂鉴别的依据。（二）特点升华法具有简便、实用等特点，由于升华性仅为少数中药化学成分所具有且升华物纯度较高，故该法专属性亦较好。升华法（Sublimation）对升华物可：1.在显微镜下观察其晶形。2.在可见或紫外光下观察其颜色或荧光。3.加入一定试剂处理后显出不同颜色或荧光。升华法-实例中药制剂中常见的具有升华性的成分有冰片、大黄中蒽醌类成分；牡丹皮中丹皮酚、薄荷中薄荷醇；斑蝥中斑蟊素等。•显微化学鉴别法实例升华法万应锭中冰片的鉴别：取制剂粉末，进行微量升华，收集冰片升华物，显微镜检升华物的结晶性状后，加入香草醛硫酸溶液，白色结晶发生化学反应呈现紫红色第二节显微鉴别显微化学鉴别法作业1.牛黄解毒丸中冰片、大黄微量升华鉴别。2.明目地黄丸的升华鉴别。3.养阴清肺膏的微量升华鉴别。第三节理化鉴别（PhysicochemicalIdentification）一、理化鉴别的概念和意义利用制剂所含化学成分的理化性质，通过化学反应法，光谱法和色谱法等分析方法和技术来判断真伪的分析方法。根据中药制剂配伍，首选君药、臣药、毒剧药和贵重药进行理化鉴别。关键：专属、灵敏、快速、准确第三节理化鉴别•目前中国药典收载的理化鉴别方法有：1.化学反应法（多为试管反应）2.色谱法：薄层色谱法、气相色谱法和高效液相色谱法3.毛细管电泳法4.光谱法：荧光鉴别法、分光光度法（紫外、红外）一、化学反应法（GeneralChemicalReaction）（一）原理：利用检测试剂与制剂中的所含化学成分（有效成分或指标性成分或成分群）发生化学反应，根据所产生的颜色、沉淀或气体等现象，来判断某些成分或某些药味的有无。一般化学反应法即通常所说的显色反应和沉淀反应等（试管反应）。一、化学反应法（GeneralChemicalReaction）•特点：专属性差，操作简单。适用对象：多用于中药制剂中矿物药的无机成分、动物的蛋白质类成分以及处方单一或组方简单的制剂中植物性药材成分类群的鉴别。马钱子散中生物碱的鉴别化学反应法常鉴别的成分•化学反应法主要用于鉴别制剂中的：1.生物碱类；2.黄酮类；3.蒽醌类；4.香豆素、内酯类；5.皂苷类；6.氨基酸、多糖类7.各种矿物类成分：砷、汞等。生物碱沉淀试剂Borntrager反应盐酸-镁粉反应Gibbs反应；异羟肟酸铁反应Liebermann-Burchard反应α-萘酚-浓硫酸反应（二）前处理提取酸性乙醇回流提取，检验酚类、有机酸、生物碱等。水室温浸泡提取，检验氨基酸、蛋白质等。60℃热水浸泡，检验单糖、多糖、皂苷、鞣质及其他苷类成分。乙醚提取，检验醌、内酯、苷元；药渣挥去乙醚后，用甲醇回流提取，检查各种苷类。升华法，用于提取和检查能升华的成分。水蒸气蒸馏法，用于提取和检查挥发性成分。1.生物碱1.碘化铋钾反应产生红棕色沉淀2.碘化汞钾反应产生类白色沉淀3.硅钨酸反应产生白色沉淀4.苦味酸反应产生黄色结晶性沉淀需在酸性条件下进行，注意事先排除其它成分的干扰。少数生物碱不与上述通用沉淀试剂反应，而具有专属性较强的其它反应。化学反应法常鉴别的成分2.黄酮类化合物盐酸-镁粉反应呈紫红色。大山楂丸（山楂）抗骨增生丸（淫羊藿）参茸保胎丸（黄芩）等。此外，黄芩提取物采用二氯氧锆-盐酸显色反应进行检识。3.蒽醌类化合物主要采用碱液反应（Borntrager反应），阳性反应呈红色，加酸红色褪去呈黄色。例如大黄流浸膏。化学反应法常鉴别的成分4.香豆素、内酯类和酚类常用的检识反应有：氯亚氨基-2,6-二氯醌-四硼酸钠反应（Gibbs反应），呈现蓝色。异羟肟酸铁反应呈红色应用品种有：养阴清肺膏（牡丹皮）、前列舒丸（牡丹皮）等。5.皂苷常用的定性鉴别反应有：泡沫反应样品水溶液振摇后，产生持久性泡沫。醋酐-浓硫酸反应（Liebermann-Burchard）甾体皂苷呈现污绿色，三萜皂苷呈现红、红紫色。浓硫酸反应呈现红、红紫色。地奥心血康胶囊（黄山药和穿山龙薯蓣的提取物）养心定悸膏（甘草、红参、麦冬）。7.矿物药朱砂、石膏、雄黄等为中成药中常见的矿药。1.朱砂（主含HgS）主要采用铜片反应天王补心丹等中成药中朱砂的鉴定2.石膏、牡蛎、海螵蛸此类药物均富含钙盐，主要采用草酸铵反应止咳桔红口服液（石膏）、安胃片（海螵蛸）龙牡壮骨颗粒（牡蛎、龙骨、乳酸钙、葡萄糖酸钙等）8.挥发性成分主要使用香草醛-浓硫酸反应检识此类成分，正反应呈红、红紫色。应用品种主要有：万应锭（冰片）、牛黄解毒片（冰片）、养心定悸膏（桂枝、生姜）等。牡荆油胶丸则采用溴-三氯甲烷反应鉴别之。化学反应鉴别实例1马钱子散中马钱子鉴定“取本品10g,加浓氨试液数滴及氯仿10ml,浸泡数小时,滤过,取滤液1ml蒸干,残渣加稀盐酸1ml使溶解,加碘化铋钾试液1-2滴,即生成黄棕色沉淀。”1.浓氨水的作用？2.稀盐酸的作用？3.地龙的排除？牛黄解毒片中大黄、黄芩的定性鉴别反应取本品6片(去包衣)，研细，加乙醇10ml，温热10分钟，过滤，滤液作如下反应：(1)取滤液5ml，加镁粉少量与盐酸0.5ml，加热，即显红色(2)另取滤液4ml，加氢氧化钠试液，显红色，再加30％过氧化氢溶液，加热，红色不消失，加酸或酸性时，红色变为黄色。化学反应鉴别实例2黄芩中有大量黄酮大黄中含有羟基蒽醌蟾蜍、朱砂、雄黄的