定性实验方法学验证

定性实验的方法学验证Methodvalidationofthequalitativetest李慧源临床免疫学实验室KingmedclinicalimmunologyLabMethodvalidationofthequalitativetest验证目的:1.评价和验证各定性检测项目的准确度、精密度、灵敏度、特异性、等各项参数，满足临床检测和认可组织的要求.2.验证厂家提供的试剂参数能在本实验室得到重现.Methodvalidationofthequalitativetest验证的内容:准确度(Accuracy)精密度(Precision)诊断敏感性（sensitivityofdiagnosis）特异性（specificity）:同一项目不同检测方法或仪器的比对CUTOFF值验证Methodvalidationofthequalitativetest实施验证的时机:•引进新检测项目及方法。•已确立的检测方法的更新。•原有的检测方法应用扩大到新的检测范畴。•质控指标表明已确立的检测方法性能正随时间而改变。Methodvalidationofthequalitativetest几个重要概念及计算公式的回顾:1.诊断敏感性:将实际患病者正确诊断为阳性的百分率。计算公式为：真阳性/（真阳性+假阴性）X100%.2.特异性:指将实际无病者检测为阴性的百分率。计算公式为：真阴性/(真阴性+假阳性）X100%.Methodvalidationofthequalitativetest3.Kappa检验:用与两组定性结果一致性比较.用公式计算得到一个kappa值.kappa值位于〔-1,1〕,Kappa≥075时两组结果一致性较好；0.75Kappa≥0.4两者一致性一般；Kappa0.4表示两者一致性很差.•观察一致率P0=（A+D）/N•机遇一致率Pc=(R1C1/N+R2C2/N)/N•实际观察一致率=P0—Pc•非机遇一致率=1-Pc•Kappa=（P0—Pc）/（1-Pc）方法A方法B阳性阴性合计阳性ABR1阴性CDR2合计C1C2NMethodvalidationofthequalitativetest一.准确度验证:1.检测已知值的参考物质•室间质评材料(卫生部或者CAP)•厂商提供的已赋值的参考材料•分析用参考方法或决定方法定值的材料。(如dsDNA检测)2.方法比较试验：样本数为10-20个，两种方法同时测定同样的样品，用KAPPA检验方法分析两种方法检测结果一致性.(比如HBV酶免法和发光法比对)Methodvalidationofthequalitativetest二.精密度验证:1.批内精密度:同一份样本在同一批次内平行重复检测10次.然后计算均值,SD和CV.2.批间精密度:同一份样本连续检测10天,每天平行检测双孔.然后计算均值,SD和CV.Note:1.用S/CO比值进行统计计算.2.最好选择临界值,或弱阳性样本.判断标准:批内CV小于15%,批间CV小于25%.Methodvalidationofthequalitativetest三.诊断敏感性:1.验证方法:取10-20份已知真阳性的样本（样本来源困难时可以酌情减少）。用常规检测方法检测，计算检测阳性的样本占样本总数的比例。2.样本来源:临床上明确诊断的阳性病人血清；厂家提供的明确为阳性的样本；PT中的阳性样本；决定性参考方法检测阳性的样本；以上阳性样本来源紧张时，可以进行稀释（如2：3，3：4这样稀释）Methodvalidationofthequalitativetest四.特异性:1.验证方法：选取20份正常健康人血清（一般取自健康体检者），计算其检测阴性结果所占百分率。2.样本来源:体检样本,体检者本人填写健康调查表确认符合要求后即可.NOTE:部分项目在健康体检人群中阳性率也很高,此类项目特异性验证很难执行,建议引用厂家说明书.比如麻疹病毒IgG,CP-IgG,MP-IgG等一系列病毒抗体IgG.因为很难确认体检者既往是否有过感染史,而IgG抗体在体内存留时间长.因此很难收集到真正意义上的阴性样本.Methodvalidationofthequalitativetest补充1:同一项目不同检测方法或仪器的比对适用范围:一个项目有两种以上的方法或者两台以上的仪器(包括同一型号的仪器)同时检测,需要进行一致性比对.定量检测中,报告单位不同的不需要比对首次比对选取40份(20)样本,最好阴阳性各半↓随机每8份分成一组↓两种方法(或两台仪器)每天平行检测一组样本↓将所有检测结果汇总↓Kappa检验,评价一致性Methodvalidationofthequalitativetest补充说明:关于CUTOFF值验证定量实验但是报告定性结果的才需要做CUTOFF值验证.(比如PCR室的乙肝DNA定性).Methodvalidationofthequalitativetest验证方法1:找临界浓度的标准品(可要求厂家提供),连续检测20次,95%的结果落在临界范围即可.验证方法2:连续统计一段时间的检测结果,处于临界范围的结果比例小于5%即可.Methodvalidationofthequalitativetest甲肝IgM定性项目方法学验证.doc2008年3月优生仪器比对.docMethodvalidationofthequalitativetest参考资料:1.《定性实验方法学验证管理程序》KM-MP0301.202.UserProtocalnforEvaluationofQualitativeTestPerformancePerformance;ApprovedGuideline，NCCLS-EP12-A