实验五 激素对血糖浓度的影响

实验五激素对血糖浓度的影响一、实验目的1.掌握GOD-POD法测定血糖的原理及方法。2.观察胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响。3.了解家兔耳缘静脉取血的方法。二、实验原理1.血糖是指血液中的葡萄糖。人体生理血糖水平维持在3.89~6.11mol/l。2.血糖的来源与去路3.血糖的激素调节降低血糖：胰岛素升高血糖：肾上腺素、胰高血糖素、糖皮质激素和生长素等。胰岛素是唯一降低血糖的激素。胰岛素促进肝脏和肌肉将葡萄糖氧化合成糖原，又加强糖的氧化作用，故可以降低血糖。升高血糖的激素以肾上腺素作用迅速而明显。肾上腺素通过促进肝糖原分解而升高血糖。4.血糖测定的意义临床：血糖检测是目前诊断糖代谢异常相关疾病的主要依据。科研：在代谢疾病的研究中，常测定血糖。在某些药物的研究中，也涉及血糖的测定。测定方法无机化学法：Folin-Wu法有机化学法：邻甲苯胺法酶法：葡萄糖氧化酶法5.血糖测定的常用方法（1）葡萄糖＋O2＋H2O（2）4-氨基安替吡啉＋苯酚＋H2O2葡萄糖酸＋H2O2葡萄糖氧化酶（GOD）H2O＋红色醌类化合物过氧化物酶（POD）505nm光吸收法测定相对血糖浓度6.GOD-POD法原理7.朗伯-比尔定律当一束平行的单色光通过均匀、无散射的溶液时，在光强度、温度等条件不变的情况下，溶液吸光度与溶液的浓度及液层厚度的乘积成正比。Ａ=ＫＣＬ标准管法测定未知样品含量A标=KC标LA测=KC测LC测=A测A标×C标722G型分光光度计的使用1.接通电源，打开开关，调整波长。2.比色杯中加入空白及待测样品，并放入分光光度计中，注意：加入样品量不超过比色杯体积的3/4。3.调模式为“T（透射比）”，对空白对照进行调“0”（开盖）和调“100”（闭盖）。4.调模式为“A（吸光度）”，测定待测样品的吸光度值。三、主要仪器与试剂试剂：胰岛素，肾上腺素酒精，草酸钠，蛋白沉淀剂酶酚混合试剂，苯甲酸溶液葡萄糖标准贮存液（100mmol/L）葡萄糖标准应用液（5mmol/L）四、实验操作1.准备：正常家兔两只，实验前预先饥饿16h，称体重,并记录（kg）。兔子抓取方法：一手抓取颈背部皮肤，另一只手托臀部。2.制备抗凝管：在洁净、干燥的试管中放入一小勺抗凝剂（草酸钠）。3.注射前取血：一般以耳缘静脉取血，拔毛，用乙醇擦洗，使血管充血（弹动几下），在耳缘静脉外侧远心端用三棱针扎破放血，将血液滴入抗凝管中，约取1~2ml，边收集边混匀，以防血液凝固。取血后用干棉球压迫血管止血。4.注射激素：取血后，一只注射胰岛素，0.75U/kg，60min。另一只注射肾上腺素，0.5mg/kg，30min。注射方法：皮下注射。肚皮朝上，掂起皮肤，刺入皮下有落空感，回抽无血，缓慢注入激素。5.制去蛋白血滤液：这是注射前的血液。制备方法：蛋白沉淀剂4ml＋全血0.2ml，混匀，室温放置7分钟后，在漏斗上过滤，取滤液，标记为注射前的去蛋白血滤液。6.注射后取血并制备血滤液：方法同前，选择另一只耳朵，注意做好标记。注射胰岛素的家兔，取血后立即腹腔或皮下注射25%葡萄糖注射液10ml，以免家兔发生胰岛素性休克。7.GOD-POD法测血糖：按下表操作混匀，置37℃水浴15min，调节波长505nm，以空白管调零，分别读取A测、A标。读取6个A值并记录：A肾前、A肾后、A标A胰前、A胰后、A标加入物(ml)测定管(注射前)测定管(注射后)标准管空白管去蛋白血滤液0.50.5––葡萄糖标准应用液––0.5–蛋白沉淀剂–––0.5酶酚混合试剂3.03.03.03.0五、结果与分析按下式分别计算注射胰岛素或肾上腺素前、后血糖浓度：A测C测＝×C标（5mmol／L）A标5mmol／L为葡萄糖标准应用液的浓度值。通过计算比较一下家兔注射前后血糖浓度的变化情况。正常人空腹血糖值：3.89～6.11mmol／L六、注意事项1.采血时用耳缘静脉取血，注意安全，防止动物抓伤。采集时要边采集边混匀。2.准确吸取0.2ml的全血。3.采血后要立即制备去蛋白血滤液。4.测定管分胰岛素组和肾上腺素组，应同时测定，比较血糖的变化时才有可比性。比色测定应同时进行。