植物的茎尖培养脱毒技术

植物的茎尖培养脱毒技术植物茎尖脱毒技术利用植物茎尖组织培养，结合血清病毒检测技术，在防蚜传毒条件下，将影响植物正常生长的植物病毒脱除的高新农业生物技术。茎尖脱毒主要包括表面灭菌、茎尖剥离、茎尖培养等步骤。原理及依据•病毒在植物体内分布不均，茎尖处含量最少•在一个植物体内，病毒易于通过维管系统而移动，但在分生组织中不存在维管系统。病毒在细胞间移动只能通过胞间连丝，速度很慢，难以赶上活跃生长的茎尖；•在旺盛分裂的分生细胞中，代谢活性高，竞争抑制了病毒的复制；•在茎尖存在高水平内源生长素，也可能抑制病毒的增殖。主要方法步骤•（1）茎尖的剥离：此步是技术关键，一般在解剖镜下操作。2-3cm的茎段，剥去大叶，水冲洗1h左右，酒精快速消毒，无菌条件下5%漂白粉溶液（或其他消毒剂）消毒7-10min，无菌水清洗，解剖镜下剥取茎尖。•（2）切取茎尖的大小虽然切取茎尖越小，带有病毒的可能性就越小，但组织培养中，切取的茎尖太小，则不易成活。不同种类的植物和不同病毒，切取的最适茎尖大小也不同。•（3）组织培养常用基本培养基是MS培养基，它有较高浓度的无机盐，对促进组织分化和愈伤组织生长有利；植物生长调节的种类和配比依培养种类和生长时期来调整。酒精擦拭手外植体消毒浸泡5-7min器械消毒酒精灯灼烧酒精擦拭培养皿酒精擦拭旋转灼烧显微镜下获取茎尖接种盖好瓶塞几种方法的配合使用是提高植物脱毒效果：•(1)高温热处理与微茎尖脱毒培养技术•(2)高温热处理与微（体）茎尖嫁接培养技术•(3)化学处理与茎尖脱毒培养技术香石竹脱毒的具体操作过和如下：（1）热处理将盆栽植株或离体瓶苗，在36～38℃下处理2周，或每天在36℃16小时和38℃8小时处理共30天，光照为3000lx。（2）表面消毒选取盆栽香石竹植株叶腋间生出的侧芽为外植体，先用自来水冲洗半小时，用75%的酒精消毒30秒，再用2.5%次氯酸钙或次氯酸钠溶液处理15分钟,取出后用无菌蒸馏水清洗4次,用无菌滤纸吸去多余水分备用。（3）茎尖剥离在双筒解剖镜下。切除叶片使芽体暴露，用解剖针剥掉幼叶，直到只剩下2个最幼小的叶原基。（4）茎尖培养用小刀片切下茎尖放入培养基。培养条件为25℃，光照16小时，光照强度为2000lx，平均两周进行一次转接，5～7周可获得单个小植株。（1）热处理将盆栽植株或离体瓶苗，在36～38℃下处理2周，或每天在36℃16小时和38℃8小时处理共30天，光照为3000lx。植物的茎尖培养脱毒技术优缺点：•茎尖生长点的培养成了去除植物病毒，使植物复壮的重要方法。茎尖培养还可以去除其他病原体，如细菌、真菌等。•茎尖越小，去病毒机会越大，脱毒效果就越好，但同时因为其含营养及水量太低，故培养时对培养基的要求就越高，对剥离技术要求也越高。植物的茎尖培养脱毒技术应用•茎尖脱毒培养对植物病毒的脱除效果好，后代遗传性稳定，是目前生产上最常用的脱毒措施，已在马铃薯、花卉、水果、蔬菜等作物脱毒快繁上得到了广泛应用。