药物分析 第六章 芳酸及其酯类

中国药科大学药物分析教研室⊙Aromaticcarboxylicacids水杨酸类COOHOR水杨酸SAsalicylicacidCOOHOH阿司匹林aspirinCOOHOCOCH3对氨基水杨酸钠PAS-NaCOONaOHNH2贝诺酯benorilateOCOCH3COONHCOCH3双水杨酯salsalateCOOHOCOOH中国药科大学药物分析教研室COOHRR'⊙苯甲酸类HOCOOC2H5羟苯乙酯ethylparobenCOOH(CH3CH2CH2)2NSO2丙磺舒probenecidCOOH苯甲酸benzoicacid甲芬那酸mefenamicacidCOOHNHHCH3CH3COONasodiumbenzoate中国药科大学药物分析教研室COOHR'R''R⊙其他芳酸类ClOCCH3CH3COOC2H5氯贝丁酯clofibrate布洛芬ibuprofenCHCH2CHCH3CH3COOHCH3中国药科大学药物分析教研室⊙特点均有苯环、羧酸或其酯水杨酸类和苯甲酸类结构中的羧基直接与苯环相连除了酸性基团外，各自具有本身的官能团分子中苯环、羧酸和取代基的相互影响，使芳酸的酸性强度各有不同中国药科大学药物分析教研室COO-COO-OHCOO-SO2N(C3H7)2OCOO23FeFe紫堇色COOOOCFe3(OH)26赭色↓COO(C3H7)2NSO23Fe米黄色↓pH5.0~6.0T.S.FeCl3pH4~6中性溶液鉴别三氯化铁反应中国药科大学药物分析教研室COONa73FeCl32OH-中性溶液COO6Fe3(OH)2OOC7NaCl2Cl-碱式苯甲酸铁盐（赭色沉淀）加稀HCl，沉淀分解，生成游离COOH白色中国药科大学药物分析教研室RCNOOHFe/3Fe3+紫色RCNOOHHH2NOHNNNHOCHNCNN(DCC)RCOHORCOOCNNNNH布洛芬NHCNOCRO中国药科大学药物分析教研室⊙重氮化偶合反应具体方法见芳香胺类药物的鉴别⊙氧化反应⊙异羟肟酸铁反应甲芬那酸＋H2SO4深蓝色(O)K2Cr2O7△黄色并产生绿色荧光随即变为棕绿色中国药科大学药物分析教研室ClOCCH3CH3COOC2H5+NH2OHHCl+2KOHClOCCH3CH3CONHOK+C2H5OH+H2O+KClFe3+H+ClOCCH3CH3CONHOFe/3紫色中国药科大学药物分析教研室⊙水解产物的反应HOOCSO2N(CH2CH2CH3)2NaOHONa+CO2+Na2SO3+HNC3H7C3H7HNO3Na2SO4⊙分解产物的反应⊙UV特征吸收⊙IR吸收光谱中国药科大学药物分析教研室特殊杂质的由来与方法检查AcetylSalicylicAcidONaCO2加压，ONaCOONaOHCOOHH+OH-CO2副产物SACOOHOCOCH3(CH3CO)2OH2SO4,70~75C。ASA⊙Aspirin生产工艺中国药科大学药物分析教研室SA溶液的澄清度酚类和酯类升华精制时温度过高制备过程中未反应完全SASA产生脱羧副反应苯酚来源其他副反应产生酯类中国药科大学药物分析教研室易碳化物炽灼残渣重金属中国药科大学药物分析教研室⊙PAS-Na间氨基酚Ch.P样品3.0g用乙醚提取，加入H2O，用HCl滴定液（0.02mol/L)滴定，生成杂质·HCl（转溶入H2O相，甲基橙指示剂）。滴定液不得过0.30mlUSPHPLC法C18NaH2PO4(0.05mol/L)-Na2HPO4(0.05mol/L)-CH3OH(含氢氧化四丁基铵1.9g)(425：425：150)254nm检测内标：磺胺中国药科大学药物分析教研室⊙羟苯乙酯供试品自身对照法BP（1998）反相TLC高低浓度对比法取羟苯乙酯丙酮液1.0%和0.01%，2ul，254nm查荧光，前一个任何第二个斑点的大小和强度不应超过后一个。中国药科大学药物分析教研室a.杂质对照品法方法：供试品→供试品溶液杂质对照品→对照品溶液中国药科大学药物分析教研室供试品对照品中国药科大学药物分析教研室判断：供试品中所含杂质斑点不得超过相应的杂质对照斑点。优点：同一物质，同一Rf值比较，准确度高、直观性强。缺点：需要杂质对照品。中国药科大学药物分析教研室b.高低浓度对比法方法：对照溶液一定量供试品溶液供试品溶液稀释溶剂溶解S中国药科大学药物分析教研室供试品对照品中国药科大学药物分析教研室判断：②供试品溶液所显杂质斑点不得深于对照溶液的主斑点（或荧光强度）①控制杂质斑点个数，控制杂质种类中国药科大学药物分析教研室⊙氯贝丁酯对氯酚（0.0025%）挥发性杂质（0.5%）GC法5%SE-302m160℃，N2FID杂质以归一化法求得中国药科大学药物分析教研室含量测定⊙酸碱滴定法Acid-basetitrationmethod以ASA及其制剂为例苯甲酸pKa4.20水杨酸pKa2.98酸性较强COHOHO羧酸邻位-OH，吸电子基团，使酸性增加；并有氢键，更增加了其极性因此，可采取直接滴定法中国药科大学药物分析教研室直接滴定法pKa3~6的药物溶于中性醇,可直接用NaOH滴定pKa6~9的药物要用非水溶液滴定法中性乙醇COOHOCOCH3NaOH20℃以下COONaOCOCH3H2O中性乙醇：对指示剂(酚酞)而言为中性，可消除滴定误差乙醇作用：溶解ASA；防止ASA在水溶液中滴定过程易水解本法特点：简单注意点：若SA不合格，不宜采用本法Aspirin丙磺舒(Ch.P.BP.JP等)苯甲酸(Ch.P等)均采用本法中国药科大学药物分析教研室水解后剩余滴定法ResidualtitrationafterhydrolysisUSP23方法：取本品约1.5g，精密称定，准确加NaOH液(0.5mol/L)50.0ml，水浴上煮沸15min，放冷，以酚酞为指示剂，用H2SO4液(0.25mol/L)滴定剩余的NaOH，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml的NaOH液(0.5ml/L)相当于45.04mg的C9H9O4中国药科大学药物分析教研室剩余滴定时消耗酸量V(ml)同时做空白试验，消耗酸量V0(ml)Ch.P00羟苯乙酯的Assay亦采用OCOCH3COOH2NaOHH2OOHCOONaCH3COONabBaA2NaOHH2SO4Na2SO42H2O中国药科大学药物分析教研室反应物质之间的化学计量关系aA+bBcC+dD被测物滴定液毫摩尔数(g/mol)(g)毫摩尔质量BWnBB(g/mol)(g/mol)(g/mol)毫摩尔质量毫摩尔质量毫摩尔质量BVMabBnabBnWAAABBnbanBAMVnAABnabn中国药科大学药物分析教研室☆滴定度计算mg04.45g04504.020002.180MT0.51001)(%ASA0WMMV-VT规定测MVMTW100125.0)(04504.00WMV-V规定的硫酸浓度为0.25mol/L1000ASA21ASANaOHNaOHWVMTab毫摩尔质量中国药科大学药物分析教研室两步滴定法Two-steptitration用于Aspirin片测定片剂中有稳定剂水解产物水杨酸SAHAcHOCCOOHCH2COOHCH2COOH枸橼酸CitricacidHOCHCOOHCHCOOHHO酒石酸Trataricacid为了避免这些酸类的干扰，采用两步滴定法中国药科大学药物分析教研室Ch.P.阿司匹林片取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于阿司匹林0.3g)，置锥形瓶中，加中性乙醇(对酚酞指示剂显中性)20ml，振摇使ASA溶解，加酚酞指示液3滴，滴加NaOH液(0.1mol/L)至显粉红色，再精密加NaOH液(0.1mol/L)40ml，置水浴上加热15min，并时时振摇，迅速放冷至室温，用H2SO4液(0.05mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正每1ml的NaOH液(0.1mol/L)相当于18.02mg的C9H8O4中国药科大学药物分析教研室第一步：NaOH滴定所有的酸：ASA，CA，TA，SA，HAc第二步COONaOCOCH3NaOHCOONaOHNaAcH2O放冷后，用H2SO4滴定液滴定剩余的NaOHV；空白滴定消耗H2SO4V0；(V0-V)H2SO4则为用于中和水解ASA所需的NaOHmg02.1810002.1801.01000ASAMT2NaOHH2SO4Na2SO42H2O中国药科大学药物分析教研室☆计算：称取10片重1.8240gCNaOH0.1032mol/L片粉重0.5312gC0.05120mol/LH2SO4标示量0.1gV3.02mlV020.18ml%100)(%ASA0标示量为标示量称样片重WMWMV-VT%7.108%1001.05312.005.01824.005120.0)02.318.20(01802.0-中国药科大学药物分析教研室直接水解后两步滴定法剩余滴定法滴定法优点操作简便水杨酸干扰少结果准确，避免了游离SA以及片剂中稳定剂的干扰缺点游离水杨酸不能完全不合格时结排除干扰果偏高Ch.P氯贝丁酯的Assay采用两步滴定法中国药科大学药物分析教研室⊙双相滴定法TitrimetryintwophasesCh.P2005用于苯甲酸钠的测定苯甲酸钠为芳酸碱金属盐，易溶于水；苯甲酸不溶于水，不利于终点的正确判断因此，利用苯甲酸能溶于有机溶剂的性质，采用双相滴定法中国药科大学药物分析教研室HCl乙醚(苯甲酸)H2O(苯甲酸钠)0.5mol/L25ml1.5g50ml2d甲基橙橙红色分出H2O层，置具塞锥形瓶，乙醚层用H2O5ml洗涤，洗液并入锥形瓶，加乙醚20ml，继续用HCl滴定，至水层显持续的橙红色中国药科大学药物分析教研室⊙柱分配色谱-紫外分光光度法ColumnPartitionChromatogr.ASAcapsule等制剂除用上述两步滴定法外，最好用色谱法，可以分离酸性杂质和辅料以及稳定剂等，经分离后同时测定ASA与SA如USP用柱分配色谱-UV测定ASACapsule中国药科大学药物分析教研室ColumnPartitionChromatography,CPC担体：硅藻土(Celite545)固定相：一定pH的缓冲水溶液流动相：与水不相混溶的有机溶剂(洗脱前必须先用水饱和)200~300mm60mm4mm22mm层析柱玻棉压榨棒350mm21mm中国药科大学药物分析教研室CPC-UV法测定ASACapsuleSA测定供试液制备用CHCl350ml洗涤，弃去(洗去ASA)10ml冰HAc-水饱和乙醚液(1→10)(使紫色配位化合物被分解，SA析出)洗脱液收集于已盛有10ml甲醇和2滴HCl的50ml量瓶中，继用30mlCHCl3洗，并稀释至刻度SA对照品溶液：75µg/ml，取10ml50ml量瓶中盛有：10ml甲醇，2滴HCl和10ml冰HAc-水饱和乙醚液(1→10)，CHCl3至刻度中国药科大学药物分析教研室测定：306nm测定供试液和SA对照品液﹡SA与试剂生成紫色水杨酸铁配位化合物，在柱上移动慢，带窄，色泽较深﹡﹡若有Fe3+洗下，黄色影响测定结果消除干扰方法：迂底部拌有磷酸的硅藻土，生成不溶解的FePO4↓A供试液＜A对照品液L=75(µg/ml)×10m100mg×1000×100%＝0.75%中国药科大学药物分析教研室ASA+SA测定供试液制备洗脱5,25mlCHCl3，弃去CHCl3洗脱10ml冰HAc-CHCl3(1→10)**；85ml冰HAc-CHCl3(1→100)，并稀释至100ml对照品溶液50µg/ml冰HAc-CHCl3(1→100)CPC-UV法测定ASACapsule中国药科大学药物分析教研室测定：280nm空白：CHCl3﹡NaHCO3使ASA和SA成盐保留于柱上用CHCl3洗脱的目的：去除中性或碱性杂质﹡﹡冰