人体显微形态学实验教学大纲

1人体显微形态学实验教学大纲(供临床医学等专业本科生用)重庆医科大学基础医学实验教学中心二零零八年三月2前言人体显微形态学实验是医学基础教学的重要组成部分，相关课程涉及：细胞生物学、遗传学、组织学、胚胎学、病理学等。人体显微形态学实验技术涉及光镜和电镜下观察人体正常细胞、组织微细结构和病理改变所用的多种研究方法，如组织切片制作、组织细胞化学、免疫细胞化学、原位杂交、组织细胞培养、显微摄像等，不仅临床医学专业和其它医学相关专业学生应该了解，更是基础医学专业学生的学习课程之一。本课程的主要内容有：①常用仪器及基本使用方法：主要学习形态学常用仪器的基本结构、原理、特点和使用方法。②经典验证性实验：为传统形态学实验部分，基本按原有经典实验的编写方式。但在各节增加内容提要，将相关理论作简要概述，并加入适当的图片，增强形态学的可视性特点。每张切片或者标本观察后，留出空位，让学生自己总结形态特征或者诊断依据。不出理论复习思考题，而是在实验指导中增强培养学生的观察、分析能力。③综合性实验：包括综合性形态学的研究方法和病案综合讨论等。主要介绍研究方法的基本原理、实验步骤和应用方面。病案综合讨论主要引导学生综合分析，培养学生科学思维能力。④创新性实验：学生自己发现问题，设计研究自己观察、提出的问题。或者由教师提出问题，由学生查阅文献，提出实验设计，并与老师共同探讨实验方案及方法。实验完成后，进行数据分析、论文写作。通过这些实验来培养学生创新思维能力和基本的医学科研能力。人体显微形态学实验（上）Ⅰ实验一显微镜的使用及细胞形态观察（综合实验）一、目的要求：1、掌握显微镜的结构、熟练使用和维护方法，几种组织细胞的形态结构2、熟悉组织细胞的镜下特点3、了解生物制图的基本要求二、实验原理：一切有机体的生命活动都是在细胞内或由细胞与细胞协同完成的。对细胞结构完整性的任何破坏，都会导致细胞生命活动有序性与自控性的失调，从而引起整个生物体的失常。细胞有圆球形、多边形、柱形和纺锤形等多种形态，细胞的3形态与其功能是紧密相关的，如红细胞和淋巴球是圆的，有利于在血管内循环；肌细胞按照收缩方向呈细长的纤维结构，适合细胞的收缩运动；精细胞较小，具有一条能运动的鞭毛；神经细胞有很多突起，适于传递冲动；游离的血细胞为圆形、椭圆形或圆饼形。不论细胞的形状如何，细胞的结构一般分为三大部分：细胞膜、细胞质和细胞核。但也有例外。例如：哺乳类红细胞成熟时细胞核消失。细胞的形态是多种多样的，但其基本结构是一致的。三、主要内容和教学方法：1、低倍镜、高倍镜、油镜的熟练使用（多媒体讲解、演示图形、操作指导）2、人精子细胞、骨骼肌细胞、脊髓神经细胞、蟾蜍肝脏细胞、蟾蜍血红细胞的形态与分布（多媒体讲解、演示图形、操作指导）教学重点和难点3、重点：显微镜的熟练使用，细胞形态的观察4、难点：油镜的使用及维护5、作业：人精子细胞、骨骼肌细胞、脊髓神经细胞、蛙血红细胞的形态结构图实验二细胞器形态观察一、目的要求：1、掌握高尔基复合体、线粒体、中心体的显微结构2、熟悉上述细胞器在组织细胞中的分布3、了解细胞器光镜、电镜结构的区别二、实验原理：不同的细胞器常常含有一些特别染色特性的物质，因而可以通过细胞特异染色，把各种细胞分隔区别开来。同时每种细胞器在不同细胞、不同发育时期和不同生理状态下的形态、大小也会有所差异，所以细胞器的观察可以用来判断细胞的生理状态和发育情况。三、主要内容和教学方法:1、高尔基复合体、线粒体、中心体的观察（多媒体讲解、演示图形、操作指导）2、显微镜使用的继续训练（操作指导）教学重点和难点3、重点：高尔基复合体、线粒体、中心体的的形态结构特点4、难点：线粒体的镜下观察。5、作业：绘图示高尔基复合体、线粒体、中心体实验三细胞化学（综合实验）一、目的要求：41、掌握细胞中DNA、RNA、过氧化物酶原位显示的机理、方法及镜下特点2、熟悉血液涂片、骨髓涂片的制备3、了解各实验的操作原理二、实验原理：细胞经甲基绿一呱咯宁混合液处理后，其中的DNA和RNA出现不同的呈色反应，一般认为这是由于带有负电荷的核酸对碱性染料呱咯宁和甲基绿具有亲和力，且这两种染料的作用有选择性，甲基绿染高聚分子的DNA呈蓝绿色，呱咯宁染低聚分子的RNA呈红色。由此对细胞中的DNA和RNA进行定位、定性、和定量分析。过氧化物酶能将联苯胺氧化为蓝色或棕色产物，由此显示细胞内过氧化物酶的存在和分布。三、主要内容和教学方法：1、蛙血涂片、兔骨髓涂片的制备（多媒体讲解、演示图形、操作指导）2、细胞中DNA、RNA、过氧化物酶的原位显示（多媒体讲解、演示图形、操作指导）3、重点：DNA、RNA、过氧化物酶的原位显示4、难点：细胞中DNA、RNA的显示5、作业：DNA、RNA、过氧化物酶的原位显示图实验四细胞膜通透性及细胞骨架的观察观察一、目的要求:1、掌握细胞膜半通透性的特征2、熟悉细胞膜对醇类、钠盐、铵盐、葡萄糖等的通透作用。3、掌握细胞骨架的显示方法4、了解光镜下细胞骨架的基本形态结构二、实验原理：当红细胞置于不同等渗溶液中时，由于对各种溶质的通透性不同，因此有的溶质分子可透入，有的溶质分子则不能透入，能透人的溶质分子的速度也不同。当溶质分子进入红细胞使细胞内溶质浓度增加时，导致水的摄人。红细胞膨胀到一定程度时，细胞膜破裂，血红素溢出即红细胞发生溶血.溶液由不透明的红色变为红色透明，使光线容易通过。由于溶质透人速度不同，溶血时间也不同。细胞骨架是指细胞质中纵横交错的纤维网络结构，按组成成分和形态结构的不同可分为微管、微丝和中间纤维。它们对细胞形态的维持、细胞的生长、运动、分裂、分化和物质运输等起重要作用。当用适当浓度的TritonX—100处理细胞后，可破坏细胞膜和细胞内的蛋白质，但细胞骨架系统的蛋白质却保护完好，经戊二醛固定，蛋白质的特异性染料考马斯亮蓝R250染色后，用光学显微镜观察，可以见到细胞内一种以微丝为主的网状结构，即是细胞骨架。5三、主要内容和教学方法:1、观察兔红细胞对上述不同物质的通透性（多媒体讲解、操作指导）2、掌握细胞骨架的显示方法3、重点：兔红细胞膜对醇类、钠盐、铵盐、葡萄糖等的通透性观察及细胞骨架的制作4、难点：实验物质影响细胞膜通透性的原理讨论5、作业：1.列表记录细胞溶血时间并分析其原因2.绘一洋葱表皮细胞骨架图人体显微形态学实验（上）Ⅱ实验一绪论一、目的要求l.掌握光学显微镜的结构与使用2.了解H.E染色石蜡切片的制作3.了解切面与立体的关系4.了解组织化学与免疫组化等常用研究方法5.掌握完成实验报告的基本原则和方法二、实验内容1.录像1）H.E染色石蜡切片制作2）切面与立体的关系2.小课讲解1）介绍组织学特点与学习方法2）介绍实验室规则和要求3）光学显微镜的结构与使用4）介绍形态学互动多媒体系统的组成与使用3.学生操作：光学显微镜的结构与使用多媒体形态学互动系统的使用三、实验报告用多媒体形态学互动系统将显微镜下观察的图象传输给老师。四、考核重点1.光学显微镜的结构与使用2.多媒体形态学互动系统的使用3.用显微互动系统提交实验报告64.组织与细胞在H.E染色石蜡切片中的光学显微镜下着色特点实验二上皮组织一、目的要求1.理解被覆上皮的共性和分类原则。2.掌握几种常见被覆上皮的形态特点及分布。3.理解切面与立体的关系，形态结构与功能的关系。4.掌握纤毛、微绒毛、各种细胞连接的超微结构。二、实验内容l.录像片：上皮组织2.光镜观察切片：1）单层柱状上皮：小肠黏膜单层柱状上皮的形态特点，理解被覆上皮的共性，以及切面与立体的关系。2）复层扁平上皮：不角化的复层扁平上皮的形态特点，理解上皮的的更新、形态结构与功能的关系。3）假复层纤毛柱状上皮：气管的假复层纤毛柱状上皮的形态特点，理解形态结构与功能的关系。3.观察电镜图片：1）纤毛：观察纤毛的超微结构，侧重横断面上9组双联微管和中央的一对微管的特点。2）微绒毛：观察微绒毛的超微结构，侧重横断面上中央有微丝的特点。3）细胞连接：侧面重紧密连接、桥粒、缝隙连接的超微结构特点。三、实验报告1.单层柱状上皮2.复层扁平上皮3.假复层纤毛柱状上皮四、考核重点1.单层柱状上皮、复层扁平上皮、假复层纤毛柱状上皮的形态特点。2.纹状缘及基膜3.纤毛、微绒毛的超微结构特点。实验三固有结缔组织一、目的要求1.掌握疏松结缔组织的几种细胞的光、电镜形态特点。2.巨噬细胞、浆细胞、肥大细胞的超微结构特点与光镜形态和细胞功能的关系。73.掌握疏松结缔组织的几种纤维的光、电镜形态特点。4.比较疏松结缔组织、致密结缔组织、脂肪组织和网状组织的结构和形态异同。5.了解间充质的形态特点。二、实验内容l.录像：固有结缔组织2.光镜观察切片：1）疏松结缔组织：小肠切片中粘膜下层的疏松结缔组织的结构及镜下形态特点。2）致密结缔组织：人皮肤真皮的致密结缔组织，组织结构及镜下形态特点。3）脂肪组织：人皮下组织的脂肪组织，组织结构及镜下形态特点。4）浆细胞：人静止期乳腺中的浆细胞的光镜形态。5）巨噬细胞：肠系膜铺片或切片(活体腹腔注射墨汁或卡红)，观察细胞的吞噬功能。6）肥大细胞：皮下结缔组织铺片，特殊染色显示细胞内颗粒。3.示教：1）间充质：组织结构2）网状纤维：网状纤维的嗜银性4.电镜图片：1）浆细胞：浆细胞超微结构，理解分泌蛋白质细胞的光镜形态与其超微结构的关系。2）胶原原纤维：胶原原纤维的周期性横纹三、实验报告1.巨噬细胞2.浆细胞3.肥大细胞四、考核重点1.镜下能区分疏松结缔组织、致密结缔组织、脂肪组织。2.巨噬细胞、浆细胞、肥大细胞的光镜形态特点实验四血液与血细胞发生一、目的要求1.掌握周围血中各种有形成分的形态特点。2.了解血涂片的制作方法和血细胞分类计数方法。3.了解骨髓中各系统不同发育阶段的血细胞形态特点及其形态变化规律。4.掌握油镜的使用。二、实验内容81.录像：血液与血细胞发生2.讲解：1）油镜的使用2）血涂片的制作和使用3.光镜观察：血涂片：观察红细胞、血小板、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜硷性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞的形态特点。4.示教：几种幼稚血细胞的形态特点1）早幼红细胞2）晚幼红细胞3）巨核细胞5.电镜图片：几种有粒白细胞的超微结构特点1）中性粒细胞：2）嗜酸性粒细胞：3）嗜硷性粒细胞：三、实验报告：各种血细胞及血小板四、考核重点1.能在光镜下识别各种血细胞，特别是5种白细胞。实验五软骨、骨组织及骨发生一、目的要求1.掌握透明软骨的组织结构。2.比较弹性软骨和纤维软骨的组织结构。3.掌握骨组织的结构特点。4.掌握骨细胞、成骨细胞和破骨细胞的光镜形态特点。5.通过对长骨发生切片的观察，比较两种成骨方式。理解骨的生长特点及其形态结构基础。二、实验内容1.录像：软骨组织、骨组织与骨的发生2.光镜观察切片：1）透明软骨：软骨基质、软骨细胞、软骨陷窝、软骨囊、同源细胞群、软骨膜。2）弹性软骨：弹性纤维、软骨细胞、软骨陷窝、软骨囊、同源细胞群。3）骨切片：内环骨板、外环骨板、骨单位(哈氏系统)、间骨板、骨陷窝、骨小管、中央管、穿通管。94）长骨发生：骨髓腔、红骨髓、骨领、骨外膜、静止软骨区、软骨增生区、软骨基质钙化区、骨化区的分布及形态特点。骨细胞、成骨细胞、破骨细胞的分布及形态特点。三、实验报告1.骨单位2.成骨细胞3.破骨细胞四、考核重点1.区分透明软骨和弹性软骨2.骨组织的结构3.成骨细胞、破骨细胞实验六肌肉组织一、目的要求l.掌握骨骼肌纤维光镜下纵、横断面的形态结构特点。2.掌握心肌纤维光镜下纵、横断面的形态结构特点。3.掌握平滑肌纤维光镜下纵、横断面的形态结构特点。4.掌握骨骼肌肌原纤维以及心肌的电镜结构特点。二、实验内容l.录像：肌肉组织2.小课讲授：骨骼肌的肌肉结构3.光镜观察切片：1）骨骼肌：纵、横断面的形态特点，横纹。2）心肌：纵、横断面的形态特点，闰盘。3）平滑肌：纵、横断面的形态特点。4.电镜图片：骨骼肌的肌原纤维，肌节的组成和结构特点。三、实验报告1.骨骼肌纤维光镜下纵、横断面。2.心肌纤维光镜下纵、横断面。3.平滑肌纤维光镜下纵、横断面。四、考核