三角帆蚌供片蚌对珍珠质量的影响

上海海洋大学硕士学位论文题目：三角帆蚌供片蚌对珍珠质量的影响英文题目：TheeffectofdonorHyriopsiscumingiionthequalityofpearls专业：水产养殖研究方向：水产动物种质资源与种苗工程姓名：刘越指导教师：李家乐教授二O一三年六月学校代码：10264研究生学号：M100101030上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注王群华东师范大学教授主席邱高峰上海海洋大学教授委员汪桂玲上海海洋大学副教授委员沈玉邦上海海洋大学讲师秘书答辩地点上海海洋大学水产与生命学院C217答辩日期2013年5月31日上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士毕业论文I三角帆蚌供片蚌对珍珠质量的影响摘要三角帆蚌（Hyriopsiscumingii）是中国最主要淡水珍珠蚌，全世界85%以上的珍珠由三角帆蚌生产。研究三角帆蚌育珠蚌和供片蚌对所产珍珠质量的影响，是制定三角帆蚌育种规划、提高珍珠质量的重要内容。本研究定量分析了育珠蚌和供片蚌对珍珠质量的影响，基于供片蚌对珍珠质量的贡献，开发了三角帆蚌活体取供片蚌外套膜技术，利用组织学方法观察了外套膜活体切除后的愈合再生情况，探索了供片蚌对珍珠质量影响的分子生物学证据，为以提高淡水珍珠质量为目标的供片蚌和育珠蚌良种选育提供参考资料。1三角帆蚌供体和受体对所产珍珠质量的影响在插珠前，测量了供片蚌和育珠蚌各100个的生长性状和特定生长率（SGR）。插珠后18个月，测量了所产100个育珠蚌合计1746颗珍珠的大小、重量、圆度和颜色参数。育珠蚌SGR（壳长）、SGR（壳高）、SGR（壳宽）和SGR（体重）与珍珠珠重和大小均有极显著正相关，相关程度：SGR（体重）＞SGR（壳宽）＞SGR（壳长）＞SGR（壳高），与珍珠圆度及颜色参数a*、b*和C*相关性不显著。育珠蚌SGR（体重）与珍珠明度L*极显著正相关，与珍珠色差△E极显著负相关。珍珠珠重和大小与供片蚌壳高和壳长极显著正相关，圆度与供片蚌壳长、壳宽和体重极显著正相关，相关程度为壳宽＞体重＞壳长。珍珠颜色参数与供片蚌生长性状均无显著相关。珍珠珠重、大小、和颜色参数与育珠蚌内壳颜色参数L*、a*、b*、C*和△E均无显著相关，珍珠圆度与育珠蚌和供片蚌内壳各颜色参数均无显著相关。珍珠珠重和大小与供片蚌内壳L*极显著正相关。供片蚌内壳颜色对珍珠颜色有较大影响，其中珍珠L*与供片蚌内壳L*极显著正相关，与a*、C*和△E极显著负相关。珍珠a*与供片蚌内壳a*、b*、C*和△E极显著正相关。珍珠b*和C*与供片蚌内壳b*和C*极显著正相关，与△E显著正相关。珍珠△E与供片蚌内壳L*极显著负相关，与a*、C*和△E极显著正相关。供片蚌前部和后部外套膜小片所产珍珠珠重、大小、圆度和L*四个性状无显著差异，a*、b*、C*和△E四个性状存在极显著差异。后部外套膜所产珍珠在a*和b*平均值均显著偏大，饱和度C*和色差△E显著高于前部外套膜所产珍珠，表明供片蚌后部外套膜所产珍珠颜色更上海海洋大学硕士毕业论文II深更鲜艳，前部所产珍珠颜色较淡且偏白。2三角帆蚌供片蚌贡献外套膜小片后愈合与再生研究了切除外套膜组织后三角帆蚌的存活率、生长率及组织愈合再生过程。在三角帆蚌腹缘前部、中部和后部分别切除小规格（8～12mm×8～12mm）切口，并与对照组同时养殖三个月，成活率分别94.7%、92.0%、95.3%和94.7%，差异不显著。不同切口位置三角帆蚌的SGR（壳长）、SGR（壳宽）和SGR（体重）差异不显著，前部切口组的SGR（壳高）显著小于其它两组和对照组。在腹缘中部切除小规格、中规格（8～12mm×28～32mm）和大规格（8～12mm×48～52mm）外套膜组织后养殖三个月，三组和对照组成活率分别为92.0%、90.0%、90.7%和94.7%，大规格组成活率显著低于其它三组。SGR（壳长）、SGR（壳高）、SGR（壳宽）和SGR（体重）在四个组中趋势为：对照组小规格组＞中规格组＞大规格组。肉眼观察，组织切除后12d再生组织使伤口面积缩小。再生组织生长至与正常组织在同一水平线上在小规格组、中规格组和大规格组中分别需要40d、75d和90d。组织学观察伤口组织切除后血细胞立刻大量积聚在伤口位置，至12h完全封住伤口。72h上皮形成使伤口完全愈合，15d时3个突起开始形成，25d时再生突起与正常组织相比在形态上差异很小，90d时再生组织无论在形态结构上还是功能上都与无切割处理的正常组织无异。本研究表明在不杀死供片蚌情况下，可取其外套膜制作小片，评价所产珍珠质量，为良种供片蚌选育提供技术支持。3三角帆蚌供片蚌小片对珍珠生长过程起作用的分子证据将背角无齿蚌外套膜小片移植入三角帆蚌体内培育珍珠10个月。利用三角帆蚌和背角无齿蚌ITS1基因片段之间核苷酸序列多态性设计特异性引物。在珍珠囊组织总DNA中扩增出与Genebank中背角无齿蚌ITS-1片段匹配分值为517，覆盖率为99%，Evalue为3e-143，PCR产物匹配一致性达99%。说明三角帆蚌在接受背角无齿蚌小片养殖10个月后，背角无齿蚌DNA仍存在与珍珠囊细胞内。这表明随着珍珠生长，供体小片细胞并没有死亡溶解，而是在持续增殖。本研究为淡水无核珍珠生长时期，供体细胞一直存在与珍珠囊中提供了证据，为三角帆蚌良种供片蚌选育提供基础资料。关键词三角帆蚌，育珠蚌，供片蚌，珍珠质量，愈合再生上海海洋大学硕士毕业论文IIITheeffectofdonorHriopsiscumingiionthequalityofpearlsAbstractHyriopsiscumingiiisthemainfreshwaterpearlmusselinChina,whichproducesover85%pearlsoftheworld.Researchingonhowdonorandhostmusselsaffectthequalityofpearlsisimportanttomakebreedingschemeandimprovethequalityofpearls.Inthispaper,howdonorandhostH.cumingiiaffectpearls’qualitywasanalyzedquantitatively.Andonthebasisofthedonors’contributiontopearls’quality,anewtechniquetoobtainmantlepiecesfromdonormusselswithkeepingthedonorsalivewasexploited,andthenhealingandregenerationprocessofdonorsafterdonatingmantlepieceswashistologicallyobserved.Themolecularevidenceofdonormusselsaffectingpearls’qualitywasdiscovered.Thisstudyprovidesreferenceofselectivebreedingofdonorsandhostswhichaimtoenhancethequalityoffreshwaterpearls.1.TheeffectofhostanddonorH.cumingiionthequalityofpearls.Beforegraftingthesaibosintomantles,thegrowthtraitsandspecificgrowthrate(SGR)of100donormusselsand100hostmusselswererespectivelymeasured.Atth18thmonthaftergrafting,thesizes,weights,circularitiesandcolourparametersof1746pearlsmusselsproducedweremeasured.TheSGR(shelllength),SGR(shellheight),SGR(shellthickness)andSGR(weight)ofthehostshadhighlysignificantly(P0.01)positivecorrelationwithpearls’weightsandsizes,withthedegreeofcorrelation:SGR(weight)SGR(shellthickness)SGR(shelllength)SGR(shellheight),andhadnosignificantcorrelationwiththecircularitiesandcolourparametersa*,b*andC*ofpearls.TheSGR(weight)ofthehostshadahighlysignificantlypositivecorrelationwiththepearls’lightnessL,andahighlysignificantlynegativecorrelationwiththepearls’colourdifference△E.Theweightsandsizesofthepearlshighlysignificantlypositivelycorrelatedwiththeshellheightandshelllengthofthedonors,andthecircularitiesofthepearlshadhighlysignificantlypositivecorrelationswithshelllengths,shellthicknessesandbodyweightsofthedonors,withthedegreeofcorrelation:shellthicknessbodyweightshelllength.Thecolourparametersofthepearlshadnosignificantcorrelationwithgrowthratesofthedonors.Weights,sizesandcolourparametersofthepearlshadnosignificantcorrelationwithcolourparameters上海海洋大学硕士毕业论文IVL*、a*、b*、C*and△Eofinnershellsofthehosts,andcircularitiesofthepearlshadnosignificantcorrelationswithcolourparametersofinnershellofbothdonorsandhosts.WeightsandsizesofthepearlshadhighlysignificantlypositivecorrelationwithL*ofthedonors’innershells.Coloursoftheinnershellofdonorshadrelativ