血型检查方法学评价及其质量控制

血型检查方法学评价及其质量控制血型概述血型是人类血液以血型抗原为表现型的遗传性状，ABO血型系统和Rh血型系统是红细胞的两大血型抗原抗体系统，在临床输血和血液遗传学研究上有重要意义。血型鉴定(bloodtyping)是临床输血的首要问题，正确的血型鉴定是保证输血安全的前提条件。主要内容ABO血型系统ABO血型系统抗原ABO血型系统抗体ABO血型系统亚型ABO血型鉴定检测原理鉴定方法方法学评价质量控制RH血型系统RH血型系统抗原RH血型系统抗体RH血型鉴定检测原理鉴定方法方法学评价质量控制ABO血型系统抗体分为天然抗体和免疫性抗体天然抗体主要为IgM型免疫球蛋白免疫性抗体则来自母婴血型不合的妊娠或血型不合的输血，通常是来自母体的IgG型免疫球蛋白。ABO血型系统抗体两种抗体的比较特性IgM型IgG型分子量（kD）1000160耐热性（70℃）破坏稳定与红细胞结合最适温度（℃）4-2537与红细胞反应介质生理盐水酶处理或清蛋白溶液被血型物质中和能不能通过胎盘不能能ABO血型系统亚型A抗原的主要亚型有A1和A2，均能与抗A血清发生直接凝集反应。AB血型中也存在相应的A1B和A2B亚型。B亚型较少见，且抗原性弱，故临床意义不大。ABO血型检测原理血型抗原与相应抗体在反应介质中形成红细胞和相应血型抗体结合的免疫复合物，出现肉眼可见的凝集现象。正向定型（directtyping）反向定型（indirecttyping）鉴定方法血凝试验•玻片法•试管法全自动微板法流式细胞技术酶联免疫吸附试验微柱凝胶试验鉴定方法盐水凝集法（saltmediumtest）鉴定方法正定型，玻片法鉴定方法玻片法评价它是目前临床常用的血型鉴定的初筛试验方法。具有操作简便，节省材料的优点。但弱凝集反应需要借助显微镜观察确定。鉴定方法反定型，试管法鉴定方法试管法评价——优点试管法是交叉配血试验中最基础的试验方法之一。与玻片法原理相同，但是借助试管更大的反应空间，并对待测红细胞予以一定的浓度的稀释或者加入更多的待测红细胞，通过低速离心后可根据有无肉眼可见凝集反应来判断结果。由于待测红细胞经过稀释，在一定程度上减少了血液中非特异性抗体的浓度，从而提高了试验的敏感性。比玻片法更具有准确可靠的优点。鉴定方法试管法评价——缺点只能检测出完全抗体（抗A、抗B）引起的血型不合，对免疫性抗体引起的血型不合不能检出，有输血史或不明输血史及妊娠史不能用该法。本实验中的生理盐水对血清（浆）中的抗体有稀释作用，易导致配血结果假阴性。易受冷凝集素的干扰。方法学评价盐水凝集法操作简便，无需特殊仪器。玻片法：无需离心，适用于血型普查。但反应时间长，灵敏度差，凝集较弱时易导致定型错误。不适于反向定型。试管法：用离心法加速反应，所需时间短，适于急诊定型。因离心增强红细胞凝集，可发现较弱的凝集现象，有助于检出亚型，故为常用血型鉴定方法。只能检测完全抗体易受冷凝集素干扰鉴定方法凝胶微柱法鉴定方法凝胶微柱法的结果方法学评价凝胶微柱法重复性好，特异性和灵敏度高，结果准确。试剂成本较高，需用离心设备。根据不同需要可选用中性凝胶、特异凝胶或抗球蛋白凝胶作为反应介质。结果既可肉眼观察，也可用血型分析仪分析。鉴定方法全自动微板法•标准化加样、孵育、离心、悬浮、静止•反应前后吸光度值增加数值的计算•对血型进行正定型与反定型方法学评价全自动微板法此法正反定型试验，准确率高，且能提高检测灵敏度，使弱凝集样本更加易显现。快速、准确、自动化程度高等优点，适合批量操作。血型微量化检测具有节约大量昂贵抗血清、缩短检测时间、操作程序简单等优点，目前在各大采供血机构已得到广泛应用。鉴定方法流式细胞技术•稀释：将待测血样的红细胞用生理盐水稀释成百分之五的红细胞悬液。•标记：分装各管分别等比加入荧光素标记抗体，避光放置15min待受检红细胞上的血型抗原与相应荧光标记抗体结合后，用生理盐水洗涤离心除去未结合抗体。•检测：重悬后立即用流式细胞仪检测与荧光标记抗体结合的红细胞，通过软件分析，从而得到待测样本的红细胞血型。方法学评价流式细胞术在细胞分型方面具有速度快、灵敏度高、特异性好，检测结果准确，重复性好。特别适合应用于ABO血型亚型的快速鉴定。目前有研究指出流式细胞技术亦可通过分离孕妇血液中的胎儿红细胞用于产前非侵入性胎儿血型检测。质量控制1.标准血清①要求：新鲜，在有效期内，效价高，凝集力强，严防污染②常用的抗血清有：•人血清ABO血型抗体：稳定性高，已灭活补体•人ABO血型单克隆抗体：稳定性较人血清抗体的稳定性差质量控制2.被检红细胞标本新鲜，严防污染。某些疾病出现假凝集，可加做自身血清和红细胞，自身红细胞和生理盐水对照试验及结合反定型结果进行鉴定。当疑有血浆成分干扰血型鉴定时可用生理盐水反复洗涤红细胞以除干扰。质量控制3.试验器材器材清洁、干燥、标记清楚。用试管法定型时，应同时进行正向和反向定型。须设置对照。红细胞浓度按要求配置，红细胞与相应抗体的比例适当。反应温度、反应时间、离心时间。弱A亚型和弱B亚型，肉眼判断必同时须用显微镜复查。Rh血型系统抗原及抗体Rh血型系统抗原目前已发现的Rh抗原有45种，其中与人类关系最为密切的是D、E、C、c、e五种。D抗原的抗原性最强。Rh血型系统抗体绝大多数Rh抗体由输血或妊娠刺激机体免疫系统产生的IgG型免疫性抗体。主要Rh血型系统抗体有抗D、抗E、抗C、抗c、抗e五种，其中抗D最为常见。Rh血型检测方法酶介质法聚凝胺试验（polybrenetest）Rh血型检测方法抗球蛋白试验（antiglobulintest）Rh血型检测方法人源盐水介质抗D试验低离子强度溶液试验CompanyLogo方法学评价方法评价酶介质法（直接法）简单、快速、经济，但灵敏度低。酶介质法（间接法）简单、经济、灵敏。可鉴定抗原和检测抗体。但较费时，准确性和稳定性较差低离子强度溶液试验反应时间短，灵敏度高聚凝胺试验快速、灵敏、准确性高，应用较多抗球蛋白试验检查不完全抗体最可靠方法，但操作复杂，费时，试剂较贵。多用于新生儿溶血病的诊断及因血型不合输血产生的血型抗体的检测人源盐水介质抗D试验操作简单，特异性和灵敏度均高，应用广泛，但试剂昂贵质量保证检测前标本处理：标本新鲜，严防污染。为避免假阴性，被检红细胞要用生理盐水充分洗涤。试剂和器材：使用有效期内的合格试剂。抗血清要妥善保存，防治污染。使用的仪器、器材清洁干燥。质量保证检测中•抗原抗体比例、介质浓度•反应时间、反应温度、离心条件•阴性对照、阳性对照及试剂对照•红细胞上的Rh抗原与相应抗体反应形成的凝集较弱，观察结果不可用力振摇•当结果可疑时，须用显微镜观察确认质量保证检测后•复查实验全过程，填写试验报告，查对无误后方可发出报告。•标本置4℃保存1周以上，以备复查。临床上血型检查的质量控制1、医务人员的问题•临床医生•临床护士抽取血标本时，未校对患者的姓名、床号•检验科人员没有对报告核对正确，造成血型鉴定错误临床上血型检查的质量控制2、被检红细胞•血型测定的错误血型：检测时只用肉眼观察结果，微弱、细小的凝集未看到•冷凝集素：在支原体肺炎、肝硬化等疾病患者血清中，冷凝集素很高，严重干扰血型鉴定。•ABO亚型：抗原结构和位点数改变导致的弱表现。•ABO血型抗体减弱：当献血者血清中抗A和抗B效价减弱，其反定型格局总表现为AB型。临床上血型检查的质量控制3、其它因素•输血或妊娠：产生不规则抗体•类B抗原：某些受肠道革兰氏阴性杆菌感染的病人，红细胞获得了类B抗原，A型病人可误定为AB型，O型误定为B型•磺胺类药物：注射青霉素后，有些人的血清中含有青霉素抗体，而青霉素已吸附在红细胞表面，当此红细胞与血清相遇时便发生凝集。临床上血型检查的质量控制总之，在患者ABO血型鉴定试验中，如果出现正反定型结果不符，不能轻易发报告，否则，可致ABO血型的误判。因此，在具备认真的工作态度的基础上，还需要不断积累丰富的血型鉴定经验，对异常结果进行系统全面地分析，查明原因，确保安全输血。That’sall!Thankyou!