细菌形态学检查(精)

细菌形态学检查南华大学预防医学与放射卫生实验教学中心教学对象：高等医学院校卫生检验专业学生实验课时：4学时课程类型：专业实验课课程要求：必修每组人数：1人实验目的和要求掌握革兰染色法的原理、方法及结果判断。掌握显微镜油镜的使用与保护、细菌涂片制备的方法。熟悉不染色标本检查法。学会观察细菌的基本形态和特殊结构。了解实验室规则及注意事项。实验内容实验室规则及注意事项。显微镜的使用与保护。细菌不染色标本检查。细菌涂片及革兰染色。细菌基本形态、特殊结构观察。一、实验室规则及注意事项不得在实验工作区内吃、喝及抽烟，以及装卸隐形眼镜和上妆等。实验用的冰箱中不得储存饮料、食物。在实验操作时请穿好实验防护衣及其它合适的防护服。实验室中不宜穿凉鞋、露趾鞋。操作感染性、有毒物质或动物时，必须戴手套。不宜将实验衣、手套或其它个人防护装备穿着到实验室以外的场所。实验工作台应每日清理，若有污染发生应立即进行消毒；所有设备在使用后均必须及时清理和处理，以保持无污染状态。所有污染物－玻璃器皿、动物笼、实验装置等，必须先经过消毒处理(如：高压蒸气灭菌或化学杀菌处理)，再行清洗或重复使用。废弃物需经适当之废弃物处理流程处置。在接触传染性物质、化学物质和动物后脱掉手套，切记洗手。严格无菌操作，树立良好无菌观念。在遇到不能处理的问题时，请立即与本实验室人员联系以便及时采取相应的处理或消毒措施。二、显微镜的使用与保护普通光学显微镜用油镜放大1000倍，一般细菌均能清楚看到。暗视野显微镜用于检查不染色的活细菌和螺旋体的形态及运动观察。相差显微镜主要用于检查不染色活细菌的形态及某些内部结构。显微镜油镜的使用(一)低倍镜对光，将光线调至最强程度(聚光器提高，光圈全部开放)。转动粗调节器使镜筒上升，滴香柏油1小滴(不要过多，不要涂开)于接物镜正下方标本上。转动接物镜转换盘，使油镜头于镜筒下方。俯身镜旁侧面在肉眼的观察下，转动粗调节器使油镜头徐徐下降浸入香柏油内，轻轻接触玻片为止。显微镜油镜的使用(二)慢慢转动粗调节器，使油镜头徐徐上升至见到标本的物象为止。转动微调节器，使视野物象达到最清晰的程度。左手徐徐移动推进器，并转动微调节器以观察标本。标本观察完毕后，转动粗调节器将镜筒升起，取下标本玻片。立即用擦镜纸将镜头上的香柏油擦净。显微镜的保护(一)显微镜在从木箱中取出或装箱时，右手紧握镜臂，左手稳托镜座，轻轻取出。不要只用一只手提取，以防显微镜坠落，然后轻轻放在实习台上或装入木箱内。显微镜放到实习台上时，先放镜座的一端，再将镜座全部放稳，切不可使镜座全面同时与台面接触，这样震动过大，透镜和微调节器的装置易损坏。显微镜的保护(二)显微镜须经常保持清洁，勿使油污和灰尘附着。如透镜部分不洁时，用擦镜纸轻擦，如有油污，先将擦镜纸蘸少许二甲苯拭去。显微镜用完后，取下标本片，经聚光器降下，再将物镜转成“八”字形，转动粗调节器使镜筒下降，以免接物镜与聚光器相碰。三、不染色标本检查应用：主要用于观察活菌的动力和运动方式。常用方法：压滴法、悬滴法、暗视野映光法。1、压滴法载玻片细菌悬液盖玻片2、悬滴法镜检盖玻片细菌悬液凹玻片四、细菌涂片制备和革兰染色细菌标本经染色后，除能清楚看到细菌的形态、大小、排列方式外，还可根据染色反应将细菌进行分类。（一）涂片制备涂片：干燥：固定：通常用火焰加热固定，将已干燥的涂片在火焰中迅速通过3次，以手背皮肤接触玻片不烫为佳。涂片干燥固定染色水洗、吸干镜检制备涂片标本→染色（二）革兰染色最经典、最常用的染色方法。通过革兰染色将所有细菌分为G+菌和G-菌两大类。1、染色原理细胞壁通性学说：与肽聚糖结构有关。化学学说：与细菌细胞质中核糖核酸镁盐有关。等电点学说：与细菌所带电荷有关。2、染色方法结晶紫液初染卢戈碘液媒染95％乙醇脱色稀释复红复染1min水洗、甩干30S～1min水洗、甩干1min水洗、甩干影响革兰染色的关键步骤是脱色。2、染色方法3、革兰染色结果紫色－－革兰阳性菌红色－－革兰阴性菌革兰阳性菌革兰阴性菌4、影响革兰染色的因素操作因素涂片的厚薄；脱色时间的长短。染液因素卢戈碘液放置时间过长；95％乙醇挥发；结晶紫与草酸铵混合时间太长。细菌因素细菌种类；细菌菌龄等。五、细菌的基本形态和特殊结构观察细菌基本形态－球菌细菌基本形态－杆菌细菌基本形态－弧菌细菌特殊结构－芽胞细菌特殊结构－荚膜细菌特殊结构－鞭毛