4--血涂片及染色操作程序

南通市第一人民医院检验科急诊检验实验室标准操作程序版本/修订号：4/0血涂片及染色操作程序文件编号：YYJZ-4第1页，共2页生效日期：2014-04-011.目的规范血涂片及染色操作程序，确保检测结果准确度。2.标本种类人体静脉血或末梢血。3.适用范围操作区的血涂片及染色。4．染色原理血涂片染色过程既有物理吸附作用，又有化学亲和作用。由于血细胞内不同结构所含有的化学成分不同，对瑞氏染料亲和力也不同，涂片经染色后，各类细胞呈现不同的着色，从而达到辨别其形态、特征的目的。5.试剂与器材5.1一次性采血针、末梢采血器、棉签、碘酒等。5.2标准级显微镜载玻片、推片、瑞氏染液、OLYMPUSCH20双目显微镜（日本OLYMPUS公司）6．操作步骤6.1薄血膜推片法取血标本一滴置载玻片的一端1cm处或载玻片一侧的3∕4处。以边缘平滑的推片端，从血滴前沿方向接触血液，使血液沿推片散开，推片与载玻片保持25～30º的平面夹角，平稳地将血向前推动，血液即在载玻片上形成一薄层血膜；将制成的血膜在空气中挥动，使迅速干燥，以免血细胞皱缩。天气寒冷或潮湿时，应置于37℃温箱中保温促干，以免细胞皱缩。最后在载玻片的一端用记号笔编号。6.2厚血膜涂片法取新鲜血液1滴于载玻片的中央，用推片的一角将血滴由内向外旋转涂布，制成厚薄均匀、直径约1.5cm的圆形血膜，待自然干燥后，滴加数滴蒸馏水，使红细胞溶解，脱去血红蛋白，倾去水，血涂片干燥后即可染色并用显微镜检查。本方法特别适合检查疟原虫、微丝蚴等。6.3染色平置玻片于染色架上加瑞氏染液3～5滴染色，使其迅速盖满血膜。约1分钟后滴加缓冲液布满，轻轻摇动玻片，使染色液充分混合。5～10分钟后，用水冲去染液，待干。南通市第一人民医院检验科急诊检验实验室标准操作程序版本/修订号：4/0血涂片及染色操作程序文件编号：YYJZ-4第2页，共2页生效日期：2014-04-017.标本要求7.1玻片必须清洁、干燥、中性且无油腻。7.2最好使用非抗凝血，也可使用EDTA抗凝血，但必须在采集后4小时内制成血涂片。7.3使用抗凝血标本不宜冷藏，用前必须混匀。8.注意事项8.1推制的涂片应厚薄适宜，血膜应呈舌状，头、体、尾清晰可分。8.2涂片的好坏与血滴大小、推片与载片之间角度、推片时的速度有关，血滴大、角度大、速度快，则血膜厚；反之则血膜薄。8.3血膜分布不匀，主要是推片边缘不齐、用力不匀或载玻片不清洁所致。8.4瑞氏染液使用后，要迅速盖好，避免挥发。8.5血膜要干透后才能染色，否则染色时易脱落，应在1小时内染色。8.6染色时间与染液浓度、室温及细胞多少有关，冬季室温过低时，染色时间要适当延长。8.7冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲，防染料沉着。冲洗时间也不能长。8.8染色过淡，可复染。染色过深可用水冲洗或浸泡，还可用甲醇脱色。参考文献1.中华人民共和国卫生部医政司.全国临床检验操作规程（第3版）.南京：东南大学出版社，2006.2.江苏省卫生厅.医院检验科建设管理规范（第2版）.南京：东南大学出版社，2013.3.刘成玉,罗春丽.临床检验基础（第5版）.[M]人民卫生出版社，2012.授权人：曹兴建质量负责人：史小波操作人员：急诊室人员