热毒宁注射液

热毒宁注射液ReduningZhusheye【性状】本品为淡黄棕色至红棕色的澄明液体。【鉴别】（1）取本品5ml，加1%H2SO4水溶液调pH值至3，加水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次10ml，合并正丁醇提取液，水浴挥干，残渣加甲醇10ml使溶解，量取2ml，加甲醇稀释至5ml，摇匀，作为供试品溶液。另取金银花对照药材0.5g，加水20ml回流1小时，滤过，滤液加1%H2SO4水溶液调pH值至3，加水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次10ml，合并正丁醇提取液，水浴挥干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为对照药材溶液。再取绿原酸对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VIB）试验，吸取上述三种溶液各1～2µl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，分别在与金银花对照药材和绿原酸对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。（2）取本品5ml，加水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次10ml，合并正丁醇液，水浴挥干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液。另取栀子对照药材1g，加水20ml回流1小时，滤过，滤液加正丁醇照供试品溶液制备方法制备，作为对照药材溶液。再取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含4mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VIB）试验，吸取上述三种溶液各5µl，分别点于同一高效硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-乙腈-甲醇-浓氨水（7：3：2：0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，分别在与栀子对照药材和栀子苷对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。（3）取【鉴别】（1）项下供试品溶液作为供试品溶液。另取青蒿对照药材2g，加水20ml，超声提取1小时，滤过，滤液加正丁醇照供试品溶液的制备方法制备，作为对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VIB）试验，吸取上述两种溶液各5µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙腈-甲醇-浓氨水（8：2：2：0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。【检查】色泽取本品2ml，加水稀释至100ml，与黄色标准比色液（中国药典2010年版一部附录ⅪA）比较，应为3～5号。pH值应为4.0～6.0（中国药典2010年版一部附录ⅦG）。1有关物质除鞣质外，照注射剂有关物质检查法（中国药典2010年版一部附录ⅨS）检查，应符合规定。重金属及有害元素照铅、镉、砷、汞、铜测定法（中国药典2010年版一部附录ⅨB原子吸收分光光度法或电感耦合等离子体质谱法）测定，铅不得过千万分之六；镉不得过千万分之一；砷不得过千万分之三；汞不得过千万分之一；铜不得过百万分之五。炽灼残渣取本品2ml，水浴蒸干，依法测定（中国药典2010年版一部附录ⅨJ），遗留残渣应不大于1.5%（g/ml）。异常毒性取本品，加灭菌生理盐水制成每1ml含0.1ml药液的溶液，依法检查（中国药典2010年版二部附录XIC），按静脉注射法给药，应符合规定。溶血与凝聚2%红细胞混悬液的制备取兔或羊血数毫升（约20ml），放入盛有玻璃珠的锥形瓶中振摇10分钟，或用玻璃棒搅动血液，除去纤维蛋白原，使成脱纤血液，加入0.9%氯化钠溶液约10倍量，摇匀，每分钟1000～1500转离心15分钟，除去上清液，沉淀的红细胞用0.9%氯化钠溶液按上述方法洗涤2～3次，至上清液不显红色为止。将所得的红细胞用0.9%氯化钠溶液配成2%的混悬液，即得。供试品溶液的制备取本品1ml，加5%葡萄糖注射液11.5ml稀释后混匀，作为供试品溶液。检查法取洁净试管5支，按下表所示依次加入2%红细胞混悬液、0.9%氯化钠溶液或蒸馏水，混匀后，立即置37℃±0.5℃的恒温水浴中，加入供试品溶液，摇匀，置37℃±0.5℃的恒温水浴中，开始每隔30分钟观察一次，1小时后，每隔1小时观察一次，共观察3小时。试管编号123452%红细胞混悬液（ml）2.52.52.52.5/0.9%氯化钠溶液（ml）2.22.22.5/4.7蒸馏水（ml）///2.5/供试品溶液（ml）0.30.3//0.3本品在3小时内不得出现溶血和红细胞凝聚。热原取本品，依法检查（中国药典2010年版一部附录ⅩⅢA），剂量按家兔体重每1kg注射5ml，应符合规定。过敏反应取本品，依法检查（中国药典2010年版一部附录ⅩⅢG），应符合规定。乙酸乙酯及正丁醇残留照气相色谱及有机溶剂残留量测定法（中国药典2010年版二部附录ⅤE和ⅧP）测定。2色谱条件与系统适用性试验气相色谱顶空进样法测定，顶空恒温箱温度95℃，进样环温度110℃，传输管温度125℃，平衡时间：30min，用5%二苯基-95%二甲基硅烷共聚物为固定相的毛细管色谱柱（HP-5：30m×0.53mm×1.5µm）；进样口温度：180℃；检测器温度（FID）：250℃；顶空进样测定，分流比2：1；程序升温：初始温度50℃，保持5分钟，以每分钟3℃升至70℃，再以每分钟20℃升至200℃，保持10分钟，测定；载气流速：2.0ml/min。对照品溶液的制备分别取乙酸乙酯及正丁醇约0.2g，精密称定，分别置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液；再分别精密吸取上述两种储备溶液各1ml，置100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取该溶液10ml，置20ml顶空瓶中，轧盖，即得。供试品溶液的制备取本品10支，倾出注射液，置一锥形瓶中，摇匀，精密吸取10ml，置20ml顶空瓶中，轧盖，即得。测定法顶空进样测定，记录色谱图。本品含乙酸乙酯、正丁醇均不得大于0.02%。总固体量精密量取本品10ml，置干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105℃干燥3小时，移置干燥器中，放置冷却30分钟，称重，计算，将结果减6.6mg/ml聚山梨酯-80，即得。本品每1ml含总固体量应为45.0～94.4mg。【指纹图谱】1、液相色谱法照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录VID）测定。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.1%磷酸水溶液系统为流动相，洗脱程序为：时间（分钟）甲醇（%）0.1%磷酸水溶液（%）02080506040606040流速为0.8ml/min；检测波长为225nm。理论板数按参照物（栀子苷）峰计算，应不低于6000。参照物溶液的制备取栀子苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品1ml，置25ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。测定法分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各5µl，分别注入液相色谱仪，记录1小时色谱图，供试品指纹图谱中与参照物峰相应的峰为S峰，计算相对保留时间和峰面积3比值，与标准指纹图谱对照。指纹图谱共有峰峰面积之和应不小于总峰面积的90%，各共有峰面积比值和相对保留时间与标准指纹图谱相关值比较，应符合规定。指纹图谱及各项技术参数：（峰号）相对保留时间：（1）0.286±20%、（2）0.398±20%、（3）0.458±20%、（4）0.748±20%、（5）0.804±20%、（6）0.848±20%、（7）0.915±20%、（8）0.940±20%、（S）应为1、（9）1.372±20%、（10）1.592±20%、（11）1.625±20%、（12）1.890±20%、（13）1.941±20%。（峰号）峰面积比值：（3）0.34～0.65、（4）0.83～1.30、（5）0.32～0.64、（S）1标准指纹图谱：技术参数（参考）：仪器：Agilent1100液相色谱仪或Agilent1200液相色谱仪；色谱柱：phenomenexlunaC18，4.6×250mm，5µm；柱温30℃。积分方式：谷谷积分；最小积分峰面积：以供试品指纹图谱14个共有指纹峰中峰面积最小的指纹峰峰面积为最小积分峰面积；最小积分峰高：以供试品指纹图谱14个共有指纹峰中峰高最小的指纹峰峰高为最小积分峰高。2、气相色谱法照气相色谱法（中国药典2010年版一部附录VIE）测定色谱条件与系统适用性试验气相色谱顶空进样法测定，顶空恒温箱温度95℃，进样环温度110℃，传输管温度125℃，平衡时间：60min，用5%二苯基-95%二甲基硅烷共聚物为固定相的毛细管色谱柱（HP-5：30m×0.32mm×0.25μm）；进样口温度：240℃；检测器温度（FID）：2345678S91011131214240℃；顶空进样测定，分流比：1：1；程序升温：初始温度50℃，保持5分钟，以每分钟10℃升至80℃，保持10分钟，以每分钟10℃升至130℃，保持6分钟，再以每分钟5℃升至240℃，保持9分钟，测定；载气流速：2.0ml/min；理论板数按对照品（樟脑）峰计算，应不低于30000。对照品溶液的制备取樟脑对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，精密吸取1ml，置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取该溶液10ml，置20ml顶空瓶中，轧盖，即得。供试品溶液的制备取本品5支，混匀，精密吸取10ml，置20ml顶空瓶中，轧盖，即得。测定法顶空进样测定。记录1小时色谱图，供试品指纹图谱中与对照物樟脑峰相应的峰为5号共有指纹峰，以与5号共有指纹峰相对保留时间为0.70～0.76的色谱峰为S峰，计算相对保留时间和峰面积比值，与标准指纹图谱对照。扣除相对保留时间与s峰保留时间比值为0.18之前的溶剂峰,指纹图谱共有峰峰面积之和应不小于总峰面积的90%，各共有峰面积比值和相对保留时间与标准指纹图谱相关值比较，应符合规定。指纹图谱及各项技术参数：（峰号）相对保留时间：（1）0.199±20%、（2）0.650±20%、（3）0.818±20%、（4）0.898±20%、（S）1、（5）1.343±20%、（6）1.461±20%、（7）1.572±20%、（峰号）峰面积比值：（3）0.06～0.30、（4）0.40～1.00、（S）1标准指纹图谱：min01020304050pA102030405060FID1A,(20090525\RDN00002.D)S樟脑1234S5樟脑765技术参数（参考）：技术参数（参考）：仪器：Agilent6890气相色谱仪；色谱柱：AgilentHP-5（30m×0.32mm×0.25µm）。积分方式：谷谷积分；最小积分峰面积：以供试品指纹图谱8个共有指纹峰中峰面积最小的指纹峰峰面积为最小积分峰面积；最小积分峰高：以供试品指纹图谱8个共有指纹峰中峰高最小的指纹峰峰高为最小积分峰高。其他应符合注射剂项下有关各项规定（中国药典2010年版一部附录ⅠU）【含量测定】栀子和金银花照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录VID）测定。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-0.1%磷酸水溶液系统为流动相，按下表进行梯度洗脱；流速为0.8ml/min；绿原酸、新绿原酸和隐绿原酸的检测波长为324nm，栀子苷和断氧化马钱子苷的检测波长为237nm；理论板数按绿原酸峰计算，应不低于10000。时间（分钟）甲醇（%）0.1%磷酸水溶液（%）01585102575303565605050参照物溶液的制备取绿原酸对照品和栀子苷对照品各适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含绿原酸0.3mg、栀子苷0.5mg的溶液，摇匀，即得。供试品溶液的制备精密量取本品1ml，置20ml量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。测定法分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定。以绿原酸对照品为对照，按外标法计算本品中绿原酸的含量；以本品中的绿原酸为内参物，根据相对校正因子计算本品中新绿原酸和隐绿原酸的含量；以栀子苷对照品为对照，按外标法计算本品中栀子苷的含量；以本品中的栀子苷为