Agilent-1260-Infinity-Ⅱ高效液相色谱仪操作规程

操作规程第1/32页文件编号：XXX版本号：00Agilent1260InfinityⅡ高效液相色谱仪操作规程颁发部门：质量保证部分发部门：□√质量保证部□√质量控制部□验证部□储运部□注射剂部□固体制剂部□原料生产部□工艺设备部□设备部□物资供应科□技术中心□人力资源部□企划运营管理部□营销中心□行政部□财务部□IT管理科部门/职务姓名签名日期部门/职务姓名签名日期执行日期年月日一、目的建立仪器使用的标准操作规程，规范仪器的使用，保证检验结果的可靠性。二、范围适用于Agilent1260InfinityⅡ高效液相色谱仪的使用、维护保养。三、职责质量控制部：1、负责起草/修订、审核该操作规程。操作规程第2/32页文件编号：XXX版本号：00Agilent1260InfinityⅡ高效液相色谱仪操作规程2、负责执行此操作规程。四、依据1、《Agilent1260InfinityⅡ高效液相色谱仪说明书》五、内容1.仪器组成1.1原理高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。注入的供试品，由流动相带入柱内，各组分在柱内被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。1.2结构高效液相色谱仪由输液泵（脱气机一体式）、自动进样器、柱温箱、检测器以及数据处理系统组成。输液泵（脱气机一体式）自动进样器柱温箱检测器溶剂柜电源操作规程第3/32页文件编号：XXX版本号：00Agilent1260InfinityⅡ高效液相色谱仪操作规程2.操作方法2.1使用前准备（1）每天更换水性溶剂，避免藻类生长，可能会堵住脱气机或过滤器。选择使用缓冲液或水相的低通道（A和/或D），选择使用有机相（B和/或C通道）。使用前以2.5～3ml/min的流速使用溶剂清洗每个通道5min。使用应用程序组合将系统平衡15min。（2）换流动相：须将滤头用使用的流动相冲洗一下后放入溶剂瓶中。A、D瓶放水相，B、C瓶放有机相。玻璃滤头应轻拿轻放，可用稀硝酸浸泡清洁，禁止超声清洗。（3）安装色谱柱：根据需要，选定所需型号的色谱柱，更换至柱温箱。安装时注意系统流动相的流向和柱子所标示的流动相的流向应保持一致，本系统的流向是从左向右；在连接接口时尽量将接头插入后再旋螺丝，以免滑丝漏液。2.2开机/使用/关机（1）打开电脑主机和显示器电源，待电脑启动完毕后，从下往上依次打开Agilent1260infinityⅡ各模块电源（输液泵（脱气机一体式）、自动进样器、柱温箱、检测器）。关机时由上往下关闭各模块电源。（2）电脑开机5分钟后双击【CP控制面板】图标，输入登录名和密码，仪器自检，进入控制面板。控制面板左侧由【仪器】、【项目】和【管理】三个模块组成，每个模块上方有相关的菜单栏。当出现下图警告时应重启计算机，等待5分钟后（其数据库加载时间）再登录【CP控制面板】即可解除警告。（3）仪器模块：模块上方有菜单栏，分别是【仪器和位置】、【属性】、【操作】及【选定行】。选择【仪器】Agilent1260并点击【启动】，将自动启动工作站【AcquisitionOpenLABCDS】。关闭仪器时，选择【仪器】Agilent1260并点击【关闭连接】。操作规程第4/32页文件编号：XXX版本号：00Agilent1260InfinityⅡ高效液相色谱仪操作规程（4）项目模块：模块上方有菜单栏，分别是【项目和组】、【属性】及【DataAnalysis】。选择【项目】创建项目，并对填写所创建的项目属性（名称、文件夹路径及描述）及CDS设置（文件位置、项目选项、审计跟踪设置等信息）。其中审计跟踪设置下一旦启用[自动启用审计跟踪]项，将无法关闭。（5）管理模块：模块左边有菜单栏，分别是【我的设置】、【本地配置】、【系统配置】、【安全策略】、【用户】、【组】、【角色】、【系统活动日志】、【许可证】、【仪器控制器】、【诊断】、【ContentManagement】、【仪器选项及管理报告】。操作规程第5/32页文件编号：XXX版本号：00Agilent1260InfinityⅡ高效液相色谱仪操作规程点击相应的项目时，上方将出现不同的子菜单供用户设置，此权限供仪器管理员编辑。（6）选择[Agilent1260]点击【启动】后将自动跳转至工作站【AcquisitionOpenLABCDS】页面，如下图所示：（7）最上方是菜单栏，【状态】、【方法】、【单个样品】及【序列】四大模块。A.【状态】模块1)最左边为仪器（Agilent1260）的色标状态（具体颜色释义见下图），中间含有【运行队列】、【仪器状态】窗口，下方含有【在线信号】窗口。色标状态为绿色才能正常使用。操作规程第6/32页文件编号：XXX版本号：00Agilent1260InfinityⅡ高效液相色谱仪操作规程2)【运行队列】将显示序列状态等信息。3)【仪器状态】窗含有[进样器]、[四元泵]、[柱温箱]和[VWD]四个图像窗口，并有相关色标状态。状态窗口能实时监测仪器各模块、方法的详细参数等。4)【在线信号】显示在线模块下的状态。B.【方法】模块此模块含有常规项和仪器设置项，仪器设置项是我们常用于新建/修改方法，仪器设置包含【四元泵】、【进样器】、【柱温箱】和【VWD】。根据需要在仪器设置项下设置相应的检验方法。1)【四元泵】的设置在[流量]中输入流量。在[溶剂]中输入各流动相的比例。默认A通道为100%，如需用到两个通道或以上的，只要设置除A通道外的比例即可。如需用到梯度洗脱，选择对应通道后在右侧窗口点击添操作规程第7/32页文件编号：XXX版本号：00Agilent1260InfinityⅡ高效液相色谱仪操作规程加行并编辑所需的方法。通道A、D为缓冲液或水相，B、C为有机相通道。在[压力限值]中输入仪器的压力上下限（0bar～600bar），其中压力的上限不能高于柱子的最大承受压力，以保护柱子。我们一般选择400bar。在[停止时间]中输入仪器停止采集数据的时间。[后运行时间]中根据需要设置，一般设置为关闭。2)进样器的设置在[进样]中输入进样体积（进样量范围0μL～100μL）。在[针清洗]中选择启用洗针，可选择[冲洗端口]或[清洗瓶]。选择[冲洗端口]洗针，时间可设置，一般为3s。选择[清洗瓶]洗针，需输入位置和重复次数。位置填写应遵循（P板号-行字符列编号的格式指定孔位置，例如P1-A1。行字符和列编号的值取决于多孔板类型）。重复次数最多可以指定10个重复清洗。在[停止时间]中选择[与泵一致/无限制]。[后运行时间]中根据需要设置，一般设置为关闭。在右边窗口[辅助功能]及[高通量]模块根据实际需要设置相关参数，一般设置默认值。操作规程第8/32页文件编号：XXX版本号：00Agilent1260InfinityⅡ高效液相色谱仪操作规程3)柱温箱的设置在[温度]-左侧：选择需要的温度，右侧:选择[组合]，即表示左右两侧温度一致。在[阀位置/色谱柱]中选择[使用当前色谱柱/位置]，其他可不选择。在[停止时间]中选择[与泵/进样器一致]，在[后运行时间]中选择关闭。在右侧窗口中的高级设置一般选择默认值。4)VWD的设置在[信号]中选择需要的参数编辑，本机含有双波长功能，按需选择。单波长：可以将用于分析的波长设置在190和600nm之间。设置新波长时，检测器的操作规程第9/32页文件编号：XXX版本号：00Agilent1260InfinityⅡ高效液相色谱仪操作规程基线将自动调整。双波长：可以将用于分析的“信号A”和“信号B”波长设置在190和600nm之间。“信号A”和“信号B”相差不得超过150nm。在[峰宽]中选择需要的频率，此参数影响色谱图的数据采集频率，采集频率越高噪音可能会越大，反之则小。在[停止时间]中选择[与泵/进样器一致]，在[后运行时间]中选择关闭。以上四个模块（【四元泵】、【进样器】、【柱温箱】和【VWD】）设置完毕后须保存或另存方法，在菜单栏里点击保存或另存，选择路径后保存，随后弹出[更改原因]，输入原因后按[确定]，完成方法创建/修改。C.【单个样品】模块在[单个样品分析]模块中输入[样品名称]，选择[采集方法]、[处理方法]、[结果路径]，操作规程第10/32页文件编号：XXX版本号：00Agilent1260InfinityⅡ高效液相色谱仪操作规程输入[结果名称]。在[自动进样器]-[进样源]选择进样位置。如果有多个自动进样器，会在该下拉菜单中列出。根据不同的仪器配置，会有不同的进样源。当进样源不受OpenLABCDS控制时，请选择外部。需要空白运行（通过自动进样器）时，请选择无进样/仪器空白。在[进样量]中输入要进样的量（微升）。在[样品瓶]中输入将要进样的样品瓶位置（样品位置格式按进样器设置要求）。此项仅在用户将自动进样器选为其进样源时有效。[样品准备方法]用于定量分析,一般我们不设置。样品含量：用于进样的样品典型含量。ISTD含量：使用内标报告计算时添加到样品中的内标含量。乘积因子：比例因子用于在报告结果前计算结果。样品准备期间补偿样品体积更改时经常使用乘积因子。稀释因子：比例因子用于在报告结果前计算结果。样品准备期间补偿样品体积更改时经常使用稀释因子。目标：用于指定样品纯度计算的目标分子量的公式或分子量（仅限质谱）。校正级别：用于在校正曲线上绘制校正。如要将单个样品标记为校正样品，请选择校正。输入一个数字来为校正样品提供级别。操作规程第11/32页文件编号：XXX版本号：00Agilent1260InfinityⅡ高效液相色谱仪操作规程以上单个样品信息填写完后即可点击【运行】，此单个样品将运行至右侧窗口[运行队列]中，左下方窗口为[在线信号]，右下方为[谱图]。D.【序列】模块此模块含有常规项和进样项，我们常用到进样项。在[序列表]中根据需要输入相应的信息。其中[样品瓶]、[样品类型]、[采集方法]、[进样次数]、[体积]、[进样源]、[样品名称]为必须填写的内容。当需要多个样品时，可点击添加行，同理按要求填写相关信息。当输入的信息与方法参数有偏差时，以当前序列参数运行，故建立序列时应当仔细检查相关重要参数是否与方法一致。在[结果路径]中选择结果存放的路径。在[结果名称]中输入结果名称。当以上序列完成编辑后，应点击[保存]，弹出[保存序列]窗口，输入序列名称后保存，操作规程第12/32页文件编号：XXX版本号：00Agilent1260InfinityⅡ高效液相色谱仪操作规程并填写审计追踪的[更改原因]确定后即可完成新建序列。保存后的序列可点击右下角的【运行】，此序列将被运行，并在[状态]栏中显示“正在采集”或“等待”等信息。运行中的序列可在窗口页面中的[运行队列]或【状态】模块下查看其运行状态，其[状态]栏将显示当前的序列状态（已提交、正在验证、完成、正在采集、等待、已终止），如遇序列中信息填写错误，可在[运行队列]中点击编辑，除正在采集的样品不许编辑外，其余等待的样品可进行再次编辑，更改后再次[保存]填写更改原因后，须点击【更新】或【取消】，否则序列将不会运行当前进样之下的序列行。操作规程第13/32页文件编号：XXX版本号：00Agilent1260InfinityⅡ高效液相色谱仪操作规程2.3使用2.3.1排液及冲洗系统（1）单击泵【四元泵】图标上的流动相瓶图标，出现[瓶填充]对话框，在[实际体积]中输入流动相的实际体积，在[总体积]中输入瓶体积，选中[溶剂量降到设定值之下时停止分析]复选框并在该字段中输入一个阈值，可确保在计算出的溶剂瓶填充量下降低于设定的阈值时泵能够生成[未就绪]状态。当前运行已完成，但序列/工作列表将不继续进行下一次分析。选中[溶剂用完时关闭泵]复选框可确保在计算出的溶剂瓶填充量为零时泵能够生成一个错误。该错误会记录在日志中，分析会立即停止且泵将关闭，设置完成后单击[确定]。（2）手动打开Purge阀：逆时针转2～3圈。（3）单击中部工作站各部件图标右下方的[开启]按钮，