动物免疫与动物采血实验操作规范

动物免疫与动物采血一、动物保定在进行动物免疫和动物采血之前，进行动物保定是非常必要的。正确的抓取固定动物是为了不损害动物健康，不影响观察指标，并防止被动物咬伤，保证试验顺利进行。下面介绍几种常见实验动物的保定方法。1小鼠的抓取固定方法小鼠性情温顺，一般不会主动咬人，但取用时动作也要轻缓。抓取时先用右手抓取鼠尾提起，放在其前，爪能抓牢的物体表面稍后提，或放在实验台上，在其向前爬行时，用左手拇食指迅速提住其后颈部皮肤，把鼠体置于左手心中，将鼠尾用无名指和小指压在手掌上。右手即可进行各种操作，如注射、灌胃及其他实验操作。如进行解剖、手术、心脏及尾部采血和尾静脉注射时，则需将小鼠做一定形式的固定，解剖手术和心脏采血等均可使动物先取背卧式（必要时先进行麻醉），再用大头针或线绳将鼠前后肢依次固定在支持物上。尾静脉采血或尾静脉注射时，可用小鼠尾静脉注射架固定；或倒放适当大小和重量的容器，把小鼠放在里面只露尾巴，这种容器能够压住尾部不让活动，同时起，到驱赶血液的作用；或把小鼠放在一黑布口袋里小鼠趋黑，向前爬动，在尾部将小口袋缩口，固定小布口袋后，可进行尾静脉采血或尾静脉注射等操作。如只想移动小鼠，可用两手把它捧起或用右手拇指和食指的指腹抓住尾部中央将小鼠倒提起来。2大鼠的抓取固定方法4-5周龄以内的大鼠和小鼠一样抓住尾部提起来，周龄较大的大鼠尾部皮肤因为容易被剥脱，所以用左手从背部中央到胸部捏起来抓住。由于大鼠比小鼠牙尖性猛，不易用袭击方式抓取，以防大鼠在惊恐或击怒时咬伤手指，提拿时最好戴上防护手套，轻轻抓住尾巴后提起，置于试验台上，固定方法随操作目的而定。如需尾静脉取血或注射，可将大鼠固定盒内或用小黑布口袋装大鼠，使其只露尾部；如需腹腔注射或肌肉注射或灌胃，可用右手提住鼠尾，将鼠放在鼠爪能抓牢的物体表面，如铁丝笼子，稍向后拉鼠尾、鼠身被拉长，用左手贴在鼠背，捏紧头顶部和背部皮肤，即可将大鼠固定在左手中，右手可进行其他操作；如需长时间固定操作，可将大鼠四肢固定在木板上，用一根棉绳拉住两只门齿固定在头部后木板上。3豚鼠的抓取固定方法豚鼠较为胆小易惊，不宜强烈刺激和受惊，所以在抓取时，必须稳、准和迅速。抓取幼小豚鼠时，用两手捧起来，成熟动物则用右手大把抓起来，用手固定，方法是先用手掌迅速扣住鼠背，抓住其肩胛上方，以拇指和食指环握颈部，另一只手托住臀部。也可用固定器固定豚鼠或将豚鼠四肢固定在木板上。4家兔的抓取固定方法。家兔比较顺服不会咬人，但脚爪较尖，应避免抓伤。进行皮下、腹腔、肌肉注射或测肛温时，只须将家兔抓牢或按住就行即可，抓兔的方法是用右手把两耳轻轻地拿在手心，抓紧颈后部的皮厚处，提取兔，然后用左手托住臀部，使兔的体重大部分落在左手上，不能单提两耳，因为兔耳并不能承担全身重量，易造成疼痛而引起挣扎。单提两耳，捉拿四肢，提抓腰部和背部都是不正确的抓法。当只对兔的头部进行操作时，如耳静脉注射、采血等，可用兔固定器固定头部，对兔进行测量血压，呼吸及手术时，可将兔固定在实验台上，四肢用棉绳固定在实验台两侧，另用一根棉绳拴住兔的两只门牙，另一端固定在实验台的铁柱上即可。5狗的抓取固定方法未经驯服练用于急性试验的狗，因狗性凶恶，能咬伤人，因此进行实验时第一步就是要绑住狗的嘴。驯服的狗绑嘴时可从侧面靠近轻轻抚摸其颈背部皮毛，然后迅速用布带缚住其嘴，用粗棉带从下颌绕到上颌打一结，然后绕下颌再打一结，最后将棉带索引到头后，在颈顶上打三结，在这结上再打一结，捆绑松紧要合适，麻醉后应立即解绑，尤其用乙醚麻醉时，以免由于鼻腔黏液阻塞而造成窒息。也可用特制的钳或长柄狗夹夹住狗的颈部，注意不要夹伤嘴和其他部位，夹住颈后，使头向上，颈部拉直，然后套上狗链。狗固定时先固定头部，再固定四肢。头部固定，固定狗头需用一特制的狗头固定器，狗头固定器为一圆圈，圈的中央有一弓形铁，与棒螺丝相连，下面有一根平直铁闩。操作时先将狗舌拉出，把狗嘴插入固定器的铁圈内，再用平直铁闩横贯于犬齿的上下颌之间，然后向下旋转棒螺丝，使弓形铁逐渐下压在动物的下颌骨上，把铁柄固定在试验台的铁柱上即可。四肢固定，如果取仰卧位，四肢固定方法与家兔相同。二、动物免疫动物免疫接种的方法有很多，主要有注射免疫法、经口免疫法、气雾免疫法等。1注射免疫法注射免疫法中可分为皮下接种、皮内接种、肌肉接种和静脉接种等四种接种方法1.1皮下接种法家兔接种时，由助手把家兔俯卧或仰卧保定，于其背侧或腹侧皮下结缔组织疏松部分剪毛消毒，术者右手持注射器，以左手拇指、食指和中指捏起皮肤使其成一个三角形皱褶，或用镊子夹起皮肤，于其底部进针。感到针头可随意拨动即表示插入皮下。当推入注射物时感到流利畅通也表示在皮下。拔出注射针头时用消毒棉球按住针孔并稍加按摩。豚鼠皮下接种，保定和术式同家兔。小鼠皮下接种时，无须助手帮助保定。术者在做好接种准备后，先用右手抓住鼠尾，令其前爪抓住铁丝盖，然后用左手的拇指及食指捏住头颈部皮肤，并翻转左右使小鼠腹部朝上，将其尾巴夹在左手掌与小指之间，右手消毒术部，把持注射器，以针头稍微挑起皮肤插入皮下，注入时见有水泡微微鼓起即表示注入皮下。拔出针头后，同家兔皮下注射时一样处理。对牛、马等大家畜皮下接种时，一律采用颈侧部位，猪在耳根后方，家禽在胸部、大腿内侧。根据药液的浓度和家畜的大小而异，一般用16-20号针头，长约1.2-2.5cm。家禽则应采用针孔直径小于20号的针头。1.2皮内接种做家兔、豚鼠及小鼠皮内接种时，均需助手保定动物，其保定方法同皮下接种。接种时术者以左手拇指及食指夹起皮肤，右手持注射器，用细针头插入拇指及食指之间的皮肤内，针头插入角度要小，注入时感到有阻力且注射完毕后皮肤上有硬泡即为注入皮内。皮内接种要慢，以防使皮肤胀裂或自针孔流出注射物而散播传染。大动物接种时，马的皮内接种采用颈侧、眼睑部位。牛及羊除颈侧外，可在尾根或肩胛中央部位。猪大多数在耳根后。鸡在肉髯部位。现在仅有羊痘弱毒菌苗、猪瘟结晶紫疫苗等少数制品，其他均属于诊断液方面。一般使用专供皮内注射的注射器，也可使用蓝心注射器和相应的注射器针头。1.3肌肉接种大动物例如马、牛、猪、羊的肌肉接种时，一律采用臀部和颈部两个部位。小动物例如大白鼠、小白鼠、家兔、豚鼠的肌肉接种时，采用后肢股部，禽类的注射部位为胸肌部。术部消毒后，将针头刺入肌肉内，注射疫苗。1.4静脉接种家兔的静脉接种：将家兔纳入保定器内或由助手把握住它的前、后躯保定，选一侧耳边缘静脉，先用70%酒精涂察兔耳或以手指轻弹耳朵，使静脉努张。注射时，用左手拇指和食指拉紧兔耳，右手持注射器，使针头与静脉平行，向心脏方向刺入静脉内，注射时应无阻力且有血液向前流动即表示注入静脉，缓慢注射，注射完毕用消毒棉球紧压针孔，以免流血和注射物溢出。豚鼠静脉接种：使豚鼠俯卧保定，腹面向下，将其后肢剃毛，用70%酒精消毒皮肤，施以全身麻醉，用锐利刀片向后肢内上侧向外下方切一长约1cm的切口，使露出尾部，用最小号针头刺入尾侧静脉，缓慢注入接种物，接种完毕，将切口缝合一两针。小鼠的静脉注射：其注射部位为尾侧静脉。选15-20g体重的小鼠，注射前将尾部浸于约50℃温水内1-2min，使尾部血管扩张易于注射。用一烧杯扣住小鼠，露出尾部，用最小号针头刺入尾侧静脉，缓慢注入接种物，注射时应无阻力，皮肤不变白、不隆起，表示注入到静脉内。马、牛、羊的静脉接种，一律在颈静脉部位，猪在耳静脉部位。鸡则在翼下静脉部位。2经口免疫法2.1饮水免疫与喂食免疫饮水免疫是将可供口服的疫苗混于水中，畜、禽通过饮水而获得免疫，喂食免疫是将可供口服的疫苗用冷的清水稀释后拌入饲料等事物中，畜、禽通过吃食而获得免疫。疫苗经口口免疫时，应按畜、禽头数和每头畜、禽平均饮水量或吃食量，准确计算需要的疫苗剂量。免疫前应停水或停料半天，夏季停水或停料时间可以缩短，以保证饮喂疫苗时，每头畜、禽都能饮入一定量的水或吃入一定量的料。饮水免疫时，一定要增加饮水量，让每头畜、禽都能饮到足够的水。稀释疫苗时应当用清洁的水，禁用含漂白粉的自来水。混有疫苗的饮水和饲料一般不应超过室温。已稀释的疫苗，应迅速饮喂。2.2经口滴入将动物保持相应的体位，用金属或硬塑料管接上注射器，也可用吸管、移液管等，将疫苗滴入动物口腔，注意应送至咽部，让其自行吞咽，为了不使滴入的疫苗流出口外，可在滴入口腔之后，可给予动物较喜欢吃的食物，使滴入的疫苗全部进入胃内。3气雾免疫法此法是用气泵产生的压缩空气通过气雾发生器，将稀释疫苗喷出去，使疫苗形成直径1-10μm的雾化粒子，均匀地浮游在空气中，畜、禽通过呼吸道吸入肺内，以达到免疫。鸡感染支原体病时禁用气雾免疫，因为免疫后往往激发支原体病发生，雏鸡首免时使用气雾免疫应慎重，以免发生呼吸道疾病而造成损失。三动物采血1大鼠和小鼠采血方法1.1割尾采血需血量较少时采用此法采血。先将动物固定或麻醉，并露出鼠尾，将鼠尾浸在45℃左右温水中数分钟或将鼠尾放在电取暖前烤数分钟或用酒精或用酒精涂擦鼠尾，使鼠尾血管充盈，然后将鼠尾擦干，用锐器割去尾尖1-2mm或3-5mm，让血液自由顺管壁流入试管或用血红蛋白吸管吸取，为采取较多的血，可由手自尾根部向尾尖按摩。采血结束时，伤口消毒，并压迫止血，也可用火烧灼止血或6%火棉胶涂敷止血。也可在尾部做一横切口，割破尾动脉或静脉，收集血液及止血方法同上。此法采血每鼠一般可采血10余次以上，小鼠每次取血0.1ml左右，大鼠可取血0.3-0.5ml，如方法合适，室温较高，小鼠也可取血0.5ml以上，大鼠可取血3ml以上。1.2眼眶后静脉丛取血左手抓住鼠两耳之间的头部皮肤，使头部固定，并轻轻向下压迫颈部两侧，引起头部静脉血液回流困难，使眼球充分外突，眶后静脉丛充血。右手持长为7-10cm的玻璃制取血管或连接7号针头的1ml注射器，使采血器与鼠面成45℃的夹角，将针头刺入下眼睑与眼球之间，轻轻向眼底部方向移动，在此处旋转取血管以切开静脉丛。把取血管保持水平位，稍加吸引，即可取出血液。当得到所需要的血量后，即除去加于颈部的压力，同时将采血器拔出，以防止术后穿刺孔出血。一般刺入深度小鼠约2-3mm，大鼠约4-5mm，刺入当感到有阻力时即停止推进，同时，将针退出约0.1-0.5mm，可边退边抽取血液。小鼠、大鼠、豚鼠、家兔皆可自眼眶后静脉丛取血，根据实验需要，可在数分钟后在同一穿刺孔重复取血，一般两眼轮换取血，小鼠每次可采血0.2-0.3ml，大鼠每次可采血0.5-1.0ml。1.3心脏采血鼠类心脏较小，且心率较快，心脏采血较困难，一般较少用，小鼠几乎不用活体心脏取血。大鼠取血时将大鼠仰卧固定于固定板上，将心前区部位毛剪去，并用碘酒酒精消毒此处皮肤，在左侧第3-4肋间，用左手食指触摸心搏动处，右手取连接有4-5号针头的注射器，选择心搏最强处穿刺，当针刺入心脏时，血液由心脏跳动的力量自动进入注射器，也可由左手抓住大鼠，右手选择心搏最强处后直接将针刺入心脏，心脏取血时最好一次刺中心脏，反复刺心脏，会引起动物死亡。也可开胸一次死亡采血，先将动物作深麻醉，打开胸腔，暴露心脏，用针头刺入右心室，吸取血液，小鼠约可取0.5-0.6ml，大鼠可取0.8-1.2ml。1.4眼球取血先将动物用左手倒持固定，压迫颈（背）部，使眼球突出并充血，以弯头小止血钳（或镊子）迅速钳取眼球（或挖取眼球），眼眶内很快流出或喷出血液，将血滴入盛血的器皿中，或滴入预先加有抗凝剂的器皿中，直到达到要求的取血量，一般可取动物体重的4-5%血液量。如取血时眼部血液凝固，可再挖取对侧眼球，并做规律性松紧挤压胸腔，以促使血液流出。此种取血方法为一次性取血，取血后动物多死亡。2豚鼠采血方法2.1心脏采血使动物仰卧固定，用左手触摸心脏搏动处，在心跳最明显处剪毛消毒，然后用针头插入胸壁稍向右下方刺入，一般在胸骨左缘第4-6肋间腔。如果注射针正确地刺入心脏，血液随心脏跳动而进入注射器内，取血宜迅速，以缩短针留在心脏内的时间，以防止血液在注射器内凝固。也可豚鼠不固定，由助手握住前后肢进行采血。豚鼠采血时，一般应在麻醉下开胸直接从心脏取血。部分取血可采取5-7ml，采全血15-20ml