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病原性球菌学习要点:掌握:葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属、淋病奈瑟菌的生物学特性、致病性及微生物检验。熟悉:脑膜炎奈瑟菌生物学性状、致病性及微生物检验。了解:微球菌属的生物学特性及微生物检验。一、葡萄球菌属1.生物学特性(1)形态染色:球形或略呈椭圆形,典型的葡萄球菌排列成葡萄串状,无鞭毛,无芽胞,革兰染色为阳性。(2)培养特性:营养要求不高,在普通基础培养基上生长良好,兼性厌氧或需氧,最适生长温度为37℃,最适pH值为7.4,与普通平板上可形成圆形、隆起、表面光滑、湿润、边缘整齐、不透明的菌落,菌落因菌种不同而呈现金黄色、白色或柠檬色,色素为脂溶性。血平板上,致病菌株可形成β溶血现象。(3)生化反应:触酶阳性,多数菌株能够分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖,产酸不产气,致病菌株能分解甘露醇。(4)抗原结构:主要有葡萄球菌A蛋白(SPA),荚膜抗原及多糖抗原。(5)抵抗力:在无芽胞的细菌中抵抗力最强。对青霉素等抗生素敏感。但是耐药菌株逐年增多,已成为医院内感染最常见的致病菌。(6)分类:根据色素、生化反应等表型的不同,葡萄球菌可分为金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌3种。2.临床特征(1)致病物质:凝固酶、耐热核酸酶等。凝固酶是鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标。毒素包括葡萄球菌溶素,杀白细胞素,肠毒素,表皮剥脱毒素,毒性休克综合征毒素-1(TSST-1)。(2)所致疾病:有侵袭性和毒素性两种类型。侵袭性疾病主要引起化脓性炎症,是葡萄球菌引起的最常见感染。如局部感染的疖、痈、毛囊炎等皮肤及肺炎等内脏器官感染;全身感染的败血症、脓毒血症等。毒素性疾病由葡萄球菌产生的有关外毒素引起,主要有①食物中毒②假膜性肠炎③烫伤样皮肤综合征④毒性休克综合征。(3)免疫性:人类对葡萄球菌有一定的天然免疫力。病愈后免疫力不牢固。3.微生物检验(1)标本采集:不同病型采集不同标本。化脓性病灶采集脓汁、渗出液;疑为败血症采集血液;脑膜炎采集脑脊液;食物中毒采集病人呕吐物、可疑食物和粪便等,采集时避免病灶周围正常菌群污染。(2)检验程序及方法:1)直接涂片镜检:无菌体液标本经染色直接显微镜镜检后,发现有革兰阳性球菌,可做出“查见类似葡萄球菌属革兰阳性球菌”的初步报告。2)分离培养和鉴定:不同标本经处理后接种血琼脂平板。经37℃孵育18~24h,观察菌落形态,致病葡萄球菌有β溶血现象。挑选可疑菌落进一步作形态、生化等方面的鉴定。鉴定试验方法及要点如下:①血浆凝固酶试验,鉴定致病性葡萄球菌;②耐热核酸酶试验,用于检测金黄色葡萄球菌产生的耐热核酸酶;③甘露醇发酵试验,金黄色葡萄球菌可发酵甘露醇,该试验为阳性;④SPA的检测,是鉴定金黄色葡萄球菌的指标之一;⑤触酶试验,葡萄球菌该试验阴性,以区别于链球菌;⑥肠毒素的测定,将食物中毒病人的呕吐物或剩余物接种于肉汤管中,孵育后取上清液注射至6~8周龄的幼猫腹腔,若于4h内发生呕吐、腹泻、体温升高、死亡等现象,提示有肠毒素存在。二、链球菌属1.生物学性状(1)形态与染色:球形或椭圆形,其中链球菌呈链状排列,革兰染色阳性,无鞭毛,无芽胞。(2)培养特性:营养要求较高,在血琼脂平板上可形成灰白色、圆形细小菌落,不同群链球菌可出现不同溶血现象,即β溶血环,α溶血环及不溶血。(3)生化反应:触酶阴性,一般不分解菊糖,不被胆汁溶解,这两个特性可用来鉴别甲型溶血性链球菌和肺炎链球菌。(4)抗原结构:主要有蛋白质抗原,多糖抗原,核蛋白抗原。其中M蛋白抗原与致病性有关,多糖抗原又称为C抗原,根据C抗原不同,将链球菌分为20个群,核蛋白抗原无特异性。(5)分类:按链球菌细胞壁中多糖抗原的不同,将其分为20个血清群(A~H,K~V),对人致病的链球菌约90%属于A群,即化脓性链球菌。(6)抵抗力:不强,对常用消毒剂抗菌药物均敏感。青霉素为首选治疗药物,极少发现耐青霉素的菌株。2.临床特征(1)致病物质:A群链球菌致病力最强,有较强的侵袭力,是最常见的致病性链球菌。主要有①链球菌溶血素:分为链球菌溶血素O(SLO)和链球菌溶血素S(SLS)两种。②致热外毒素。③侵袭性物质:主要包括脂磷壁酸、纤维黏连蛋白结合蛋白、M蛋白等黏附素以及透明质酸酶、链激酶、链道酶等侵袭性酶。(2)所致疾病及临床表现:A群链球菌引起的疾病约占人类链球菌感染的90%,可引起化脓性、中毒性和超敏反应性三类疾病。①化脓性炎症②猩红热③链球菌性超敏反应性疾病。(3)免疫性:人体感染链球菌后血清中可出现多种抗体,但因链球菌的型别多,各型间无交叉免疫力,故常反复感染。3.微生物检验(1)标本采集:根据不同疾病的特点取不同标本。(2)检验程序及方法:1)直接涂片镜检:无污染标本经直接涂片革兰染色后镜检,发现有典型的链状排列革兰阳性球菌时,可初步报告。2)分离培养和鉴定:采用血琼脂平板培养有助于识别链球菌的溶血特性和鉴定,在5%C02环境下,经37℃孵育24h,观察菌落性状,取可疑菌落做进一步鉴定。主要鉴定试验方法及要点如下:①杆菌肽试验敏感试验,出现抑菌环者即可初步鉴定为A群链球菌。②Optochin敏感试验,抑菌环~14mm为敏感,肺炎链球菌抑菌环为敏感,其他链球菌不出现或抑菌环14mm,本试验较胆盐溶菌试验鉴别价值更可靠。③胆盐溶菌试验,肺炎链球菌阳性,草绿色链球菌阴性。④血清学鉴定试验,目前应用较普遍的是商品化试剂盒——STREPTEX,它主要用于检测链球菌群的特异性抗原,出现凝集者为阳性。⑤抗SLO试验,常用于风湿性关节炎、急性肾小球肾炎的辅助诊断。三、肺炎链球菌1.生物学特性:为革兰阳性球菌,呈矛尖状,成双排列,有荚膜,无鞭毛,无芽胞。营养要求较高,兼性厌氧菌,可形成中心下陷的脐窝状的菌落,有自溶现象。可分解多种糖类,产酸不产气,多数菌株分解菊糖,胆汁溶解试验阳性,Optochin敏感试验阳性,可作为肺炎链球菌与草绿色链球菌的鉴别。其抗原成分包括荚膜多糖,菌体多糖,M蛋白。抵抗力弱,有荚膜的抵抗力强,对一般消毒剂敏感。对青霉素、红霉素敏感。2.临床特征:肺炎链球菌是一种条件致病菌,可以引起大叶性肺炎,其次是支气管炎,可继发胸膜炎、脓胸,还可引起中耳炎、乳突炎和脑膜炎。3.微生物检验(1)标本的采集:根据病种采集不同的标本。(2)检验程序及方法:1)直接涂片检查,除血液标本,其他标本均可做直接涂片检查。如见革兰阳性矛尖状双球菌,周围有较宽的透明区,经荚膜染色确认后可初诊,并报告“找到肺炎链球菌”。2)分离培养,血液、脑脊液增菌培养后,呈均匀浑浊,且有绿色荧光。血液、脑脊液增菌后,脓汁或痰标本直接接种于血琼脂,置5%~10%CO2环境中培养后观察菌落,并取可疑菌落做进一步菊糖发酵实训,胆盐溶菌试验和Optochin敏感试验。3)动物实训,小白鼠对肺炎链球菌极为敏感,通常在接种后12~36h,因败血症而死亡。4)荚膜肿胀试验:将接种待检菌的小白鼠腹腔液置于玻片上,混入不稀释的抗荚膜抗原的免疫血清,加少量碱性美蓝染色液后,覆盖玻片,用油镜检查,如发现荚膜出现肿胀为阳性。四、肠球菌属1.生物学特性:肠球菌为G+,呈单个、成双或短链状排列,无芽胞,无荚膜,营养要求较高,在血平板上可形成灰白色、不透明、表面光滑、圆形菌落,并伴有α或不溶血现象。能在高盐、高碱条件(pH9.6),高胆汁(40%)培养基上和10~45~C的环境下生长。触酶阴性,胆汁七叶苷水解、万古霉素敏感性及吡咯烷基芳基酰胺酶均为阳性。2.临床特征:肠球菌所致的感染中最常见为尿路感染,而其中绝大部分为院内感染,亦是引起老年人和严重基础疾病患者败血症的常见病原菌。近年来肠球菌耐药菌株及其所致的感染率增加。3.微生物检验(1)标本的采集:根据病种的不同,可采集尿液、血液及脓性分泌物等标本。(2)检验程序及方法:1)直接涂片:可见单个、成双或短链状排列的卵圆形革兰阳性球菌。2)分离培养:用血平板或选择性培养基,如叠氮胆汁七叶苷琼脂进行分离培养,该培养基可抑制革兰阴性杆菌的生长,而长出的肠球菌菌落为黑色,便于识别。3)鉴定:主要试验有①PYR试验。本法是一种快速筛选鉴定试验。用于鉴定能产生吡咯烷基芳基酰胺酶的细菌,如肠球菌、链球菌属中的化脓性链球菌、草绿色气球菌和某些凝固酶阴性葡萄球菌等。②胆汁一七叶苷试验。D群链球菌和肠球菌能在含有胆盐的培养基中水解七叶苷,其生成物与铁离子反应生成黑色化合物,97%的肠球菌在24h培养后呈阳性反应,72h后100%为阳性。但本法不能区别肠球菌和非肠球菌,进一步鉴定需做盐耐受试验。③盐耐受试验。肠球菌能在含6.5%NaCl的心浸液肉汤中生长,本法结合胆汁-七叶苷试验可鉴定肠球菌。五、奈瑟菌属1.脑膜炎奈瑟菌(1)生物学特性①形态与染色:为革兰阴性双球菌,菌体呈肾形,成对排列,新分离的菌株有荚膜和菌毛,无芽胞,无鞭毛。②培养特性:营养要求高,最适温度为37~C,最适pH为7.4~7.6。在巧克力平板上菌落为蓝灰色、半透明、光滑、湿润、扁平、边缘整齐呈露滴状;在血平板上菌落不溶血,无色素;卵黄双抗(EPV)培养基菌落为无色,较大且光滑、湿润、扁平,边缘整齐等。③生化反应:绝大多数菌株能分解葡萄糖和麦芽糖,产酸不产气(因淋病奈瑟菌不分解麦芽糖,借此与之鉴别)。④抗原及分型:根据群特异性荚膜多糖抗原不同,将该菌分为13个血清群,其中H、I、K血清群是由我国发现的,我国流行的菌株以A群为主。⑤抵抗力:抵抗力弱,对干燥、热、寒冷、紫外线、消毒剂等均十分敏感。对磺胺类、青霉素、链霉素均很敏感。(2)临床特征①致病物质:主要有内毒素、荚膜和菌毛。②所致疾病及临床表现:本菌主要引起流行性脑脊髓膜炎,传染源是病人和带菌者,经飞沫传播,主要临床症状为脑膜刺激征,严重者可死亡,病死率极高。③免疫性:病后可产生群特异性抗体,但不持久。(3)微生物检验1)标本采集:根据临床病程采集不同标本。采集的标本应立即送检或用血平板进行床旁接种后立即孵育。2)检验程序及方法:①直接涂片检查:取脑脊液离心后沉淀物涂片或刺破瘀斑血印片,干燥固定后革兰染色或美蓝染色镜检,若发现中性粒细胞内(或胞外)革兰阴性双球菌,呈肾形成对排列,可初步报告。②分离培养:增菌后接种于巧克力琼脂或EPV琼脂,置5%~10%CO2环境中培养后观察菌落,取可疑菌落涂片,并进一步根据相应的生化反应等试验予以鉴定。③鉴定:通过直接凝集试验鉴定血清型别,及氧化酶、糖类发酵和触酶试验等生化反应作出鉴定。总之,如直接镜检形态为革兰染色阴性双球菌时可初步报告,经分离培养后见菌落特征典型、分解葡萄糖、麦芽糖、产生少量酸,氧化酶试验阳性、血清凝集试验阳性,即可报告“检出脑膜炎奈瑟菌”。2.淋病奈瑟菌(1)生物学特性:本菌的形态常呈球形或肾形,成对排列,形似咖啡豆,革兰阴性。新分离的菌株可有荚膜和菌毛,无芽胞和鞭毛。需氧生长,营养要求较高,只能在巧克力琼脂培养基中生长,初次分离时须在5%~10%CO2环境下培养,可形成灰白色的菌落。本菌只分解葡萄糖,产酸不产气,氧化酶和触酶试验阳性。抵抗力弱,对消毒剂敏感,对青霉素、磺胺等抗生素敏感,但是耐药菌株逐渐增多。(2)临床特征:致病物质有菌毛、外膜蛋白、IgAl蛋白水解酶、LPS等,主要引起人类淋病,是我国目前流行的发病率最高的性病,主要通过性接触而感染泌尿生殖道、口咽部和肛门直肠的黏膜,并可播散至全身。若母亲患有淋病时,婴儿出生时可感染导致淋菌性结膜炎。病后虽产生相应的细胞免疫和体液免疫,但免疫力弱,不足以保护再感染。(3)微生物检验1)标本采集:主要取泌尿生殖道脓性分泌物或眼结膜分泌物,全身淋病可取血液,采集后立即送检。2)检验程序及方法:①直接涂片检查:革兰染色后镜检若发现中性粒细胞内有革兰阴性双球菌,结合症状可初诊。②分离培养:细菌培养仍是目前世界卫生组织推荐的筛选淋病病人的惟一方法。常用的分离培养基为巧克力平板。接种后置于5%~10%CO。环境中培养后观察菌落,取可疑菌落进行涂片镜检,并作生化试验予以鉴定。病原性球菌的检查实验目的:1.了解病原性球菌的检查程序。2.掌握细菌涂抹标本制备和革兰氏染色法。3.掌握病
本文标题:病原性球菌
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