显微镜的使用及维护

实验一普通光学显微镜的使用与维护ALEX3/31/2020前言显微镜是一种高精密的仪器,目前已广泛应用于生命科学、材料科学、医学等学科领域。第一代为光学显微镜，第二代为电子显微镜，第三代为扫描隧道显微镜。3/31/2020光学显微镜电子显微镜扫描隧道显微镜3/31/2020一、实验目的1.掌握显微镜的正确使用2.熟悉显微镜的工作原理、基本结构、性能参数3.了解显微镜的拆装技术和主要性能参数的设定3/31/2020二、显微镜•1.光学显微镜的成像原理要获得清晰的像，被观察标本AB应位于物镜前焦点外至两倍焦距之间。标本AB经两级放大，在眼的明视范围内看到放大的A``B``像。3/31/20202、普通光学显微镜的结构•普通显微镜在结构上分：光学系统，机械系统。•光学系统包括物镜、目镜、聚光镜、反光镜等。•机械系统包括底座、镜臂粗调手轮、微调手轮、载物台、转换器等。3/31/2020•1.物镜•显微镜光学系统最核心的部件，其性能直接关系到显微镜的性能和成像质量。显微镜的光学系统3/31/2020•2.目镜•也称接目镜，实质上是放大镜，其作用是把物镜分辨和放大的实像再放大并映入观察者眼中。显微镜的光学系统3/31/2020聚光镜光源(灯在底座内)•3.光源•4.聚光镜显微镜的光学系统3/31/2020聚光镜孔径光阑3/31/2020物镜转换器载物台调节手轮单目镜镜筒物镜转换器显微镜的机械系统3/31/2020聚光器升降螺旋玻片夹调焦螺旋调焦螺旋锁显微镜的机械系统3/31/20203、普通光学显微镜的正确使用•（1）.显微镜取镜放置：•①移取时右手握住镜臂，左手托住镜座，保持显微镜平直•②显微镜放置在稳定的台面上，离台边一定距离（6cm以上）•③正确连接接地良好的电源。3/31/2020将主开关打开，调节亮度将样品置于载物台，移入光路以转换器使低倍物镜入光路转动调焦旋钮，对样本聚焦调节目镜瞳间距和屈光度调节孔径光阑和视场光阑将观察物镜转入光路，再聚焦再次调节亮度，开始观察（2）.普通光学显微镜的基本观察步骤3、普通光学显微镜的正确使用3/31/20203、普通光学显微镜的正确使用•（3）.清洁收镜：•①观察完毕，移去标本，扭转转换器，使两低倍物镜镜头呈V字形于载物台上方•②用擦镜纸擦净油镜镜头，绸布擦拭镜身•③是有张力的部件处于松弛状态（聚光镜、载物台）•④调节光亮度旋钮将光亮度调至最暗，关闭电源。3/31/2020•（1）.数值孔径4、显微镜的性能参数又称镜口率，是物体与物镜间媒质的折射率n与物镜孔径角的一半（β）正弦值的乘积，用NA表示。即：NA＝n×sinβ数值孔径与分辨率成正比，与放大率成正比，NA增大，视场宽度与工作距离都会相应地变小。3/31/2020•（2）.放大倍数•又称为放大率，指显微镜经多次成像后最终所观察到的物像大小相对于原物体大小的比值，常记作M。即：M＝maqm是物镜的放大倍数a为目镜的放大倍率q是在双目显微镜中所增设的棱镜产生的放大倍数（双目显微镜取值为1.6倍，单目显微镜q值为1）。3/31/2020•物镜一般刻有放大倍数×NA（数值孔径）如：4×0.1（1组镜片）10×0.25（2组镜片）40×0.65（3组镜片）100×1.25（4组镜片）160/0.17（机械镜筒长/盖玻片的厚度）3/31/2020•（3）.工作距离•指显微镜正常观察物像时物镜表面到被观察标本间的距离•显微镜使用过程中习惯所说的“调焦”指的就是调整物镜的工作距离•它与物镜的数值孔径成反比，一般情况下，物镜的数值孔径越大，其工作距离越小。3/31/2020•（4）.视野•视野又称视场，是指通过显微镜所能看到的标本范围。视野成圆形•视野大小决定于物镜的倍数及目镜光阑的大小，小的放大倍数和大光阑可获得较大的视野，反之则视野较小•因为视野的局限，一般均要通过机械装置移动、分区观察标本。3/31/2020•（5）.景深•又称焦点深度，是指在成一幅清晰物像的前提下，像平面不变，景物沿光轴前后移动的距离•显微镜观察时，不仅位于聚焦平面上的点是清楚的，而且在景深范围内的各点也是清楚的•景深与总放大倍数及物镜的分辨率成反比（垂直鉴别能力）3/31/2020三、实验器材1.普通光学显微镜一台2.红细胞悬液3.骨髓片4.微量吸管、一次性塑料吸管等3/31/2020四、操作步骤1、显微镜光学系统的拆卸和组装（仅示教）•拆卸：拆的次序是由下而上，即先拆光源、后拆聚光镜、物镜、目镜•组装：装的次序是由上而下，即先目镜、后物镜、聚光镜、光源2、普通光学显微镜的调试3、显微镜光学性能参数的设定4、正确使用光学显微镜观察不染色标本和染色标本，并总结其不同之处（不染色标本制备：用微量吸管吸取EDTA抗凝血20ul，加入到5ml生理盐水中，混匀，用一次性塑料吸管滴加3-5滴与洁净玻片上）3/31/2020五、注意事项1.转换物镜时须旋转转换器，勿转物镜，否则易损坏光轴。2.目镜不要轻易拿下，否则灰尘会落入物镜中。3.不用时，使载物台落下，呈放松状态。4.光源灯不用时关到最小，保护灯泡。3/31/2020六、维护与保养1.保证良好的使用环境台面稳固、环境良好。2.保持正确的使用方法操作轻巧、舒缓，正确旋转各类螺旋，合理使用照明光源和油镜。3.定期进行清洁维护正确清洁，定期维护。4.擦镜：1）擦镜液的配制：乙醇：乙醚=7：3或80%：20%2）先用洗耳球吹去浮尘。3）用长絮棉签沾檫镜液由中心向外擦。3/31/2020常见故障原因排除方法视场模糊、视场亮度不均、不能看到完整视场1．物镜转换器未能正确定位（物镜未与光路同轴）1．旋转物镜转换器直至选用物镜完全对中2．聚光器位置太低2．调整（升高）聚光器位置得到良好物像3．视场光阑未对中3．调整视场光阑使其良好对中4．视场光阑开得太小4．适当开大光阑七、常见故障与处理3/31/2020常见故障原因排除方法视场内有污迹或灰尘1．目镜、物镜、聚光镜等其它光学部件上有污迹和灰尘（旋动目镜时污物转动说明目镜上有污物，否则污物在物镜或聚光镜上）1．正确擦拭显微镜的光学部件。擦拭目镜和物镜时必须使用合格的拭镜纸、蘸取无水乙醇擦拭。要避免二次污染2．标本片上有污迹和灰尘2．正确擦拭标本片七、常见故障与处理3/31/2020常见故障原因排除方法观察效果差、看不清细节、视场不均匀（反差过大）1．标本片正反面错放1．翻转，使盖玻片向上2．盖玻片太厚2．使用标准厚度（0.17mm厚）的盖玻片3．油镜观察时未浸油3．使用合格浸油，油镜浸入4．油镜浸油内有气泡4．除去气泡（加浸油时避免空气进入；有气泡可用牙签等挑破而除去）5．干型物镜上有浸油或其他污物5．用专用擦镜头液擦拭6．光阑未能调整好（过大或过小）6．适当调整光阑七、常见故障与处理