原来的淡紫拟青霉

淡紫拟青霉（（Paecilomyceslilacinus（Thorn.）Samson）（一）概述淡紫拟青霉（Paecilomyceslilacinus）隶属半知菌门、丝孢菌纲、丝孢菌科、拟青霉属（Paecilomyces），于1907年由Bainier建立。该菌是一种土壤及多种植物根围的习居菌，广泛分布于世界各地，具有生防效率高、寄主广、易培养等优点，特别在控制植物病原线虫方面效果显著，是一种重要的植物线虫寄生真菌。淡紫拟青霉对植物根结线虫的寄生作用由秘鲁国际马铃薯研究中心Jatala（1979）首次报道，该菌是南方根结线虫M.incognita与白色胞囊线虫卵的有效生防菌。目前已在数个国家开发为生物杀线菌剂，广泛应用与根结线虫、胞囊线虫等植物寄生线虫的防治。淡紫拟青霉商品菌剂已在菲律宾(商品名“Biocon”)、秘鲁、美国（商品名“Melocon”）、巴基斯坦、澳大利亚和德国等国家用于防治植物线虫病，效果显著。我国采用液体发酵技术工业化生产商品制剂，在黑龙江、云南、南京等地防治大豆胞囊线虫和南方根结线虫等均取得较好的效果。（二）形态特征及生物学特点该属主要特征是分生孢子梗呈瓶状或近球形(瓶梗),在菌丝端或短枝上轮生,分生孢子单孢链状,至今该属报道有近50个种,皆为昆虫病原菌和线虫病原菌。[1]此菌广泛分布于世界各地，具有功效高、寄主广、易培养等优点，特别在控制植物病原线虫方面功效卓著。半个多世纪以来，国内外许多专家学者对此菌进行了广泛而深入的研究，在生物学、生态学、大量培养、控害效能与田间应用等方面取得了一系列研究成果。淡紫拟青霉的分生孢子梗末端膨大。分生孢子为单细胞，呈链状平滑、无色至黄色，2~4um宽，孢梗上具有瓶颈状不规则的分枝或轮生分枝，瓶梗基部较宽。轮生分支由圆柱形的部分组成，有时分枝向远离主轴方向弯曲。淡紫拟青霉对营养条件要求不高，不仅能在多种常规培养基上生长，而且能在多种自然基质，如农副产品废料、废渣与植物叶片或植物浸提液中生长。平板培养菌落较大，圆形、隆起、较致密。在15~35℃都能正常生长，在24~25℃条件下生长最为迅速，产孢量最大。湿度对孢子萌发至关重要，相对湿度（RH）达到85%时，包子才开始萌发，RH为98%，25℃时，孢子的萌发率最高。（三）控害功能1、对植物病原线虫淡紫拟青霉是南方根结线虫与白色胞囊线虫卵的有效寄生菌，对南方根结线虫的卵寄生率高达60%~70%。对多种线虫都有防治效能，其寄主有根结线虫、胞囊线虫、金色线虫、异皮线虫、甚至人畜肠道蛔虫，是防治根结线虫最有前途的生防制剂。淡紫拟青霉菌对根结线虫的抑制机理是淡紫拟青霉与线虫卵囊接触后，在粘性基质中，生防菌菌丝包围整个卵，菌丝末端变粗，由于外源性代谢物和真菌几丁质酶的活动使卵壳表层破裂，随后真菌侵入并取而代之。也能分泌毒素对线虫起毒杀作用。2、对昆虫据文献资料，淡紫拟青霉可寄生半翅目的荔枝蝽蟓、稻黑蝽；同翅目的叶蝉、褐飞虱；等翅目的白蚁；鞘翅目的甘薯象鼻虫以及鳞翅目的茶蚕、灯蛾等。3、对植物病原菌淡紫拟青霉36-1菌株对植物病原菌具有拮抗效能。在玉米小斑病、小麦赤霉病、黄瓜炭疽病菌、棉花枯萎病和水稻恶苗病上试验，淡紫拟青霉菌株活菌体液对其菌丝生长抑制率分别为80.22%、80.50%、77.71%、75.30%和61.36%；处理柑桔果面，青、绿霉扩展抑制率为65.97%。批量处理柑桔，好果率为78.44%，比对照高54.44%。（四）淡紫拟青霉次生代谢物的生理功效1、促进植物生长在拟青霉的培养过程中，特别是在特殊培养基与深层发酵培养过程中，该菌能产生丰富的衍生物，其一是类似吲哚乙酸产物，它最显著的生理功效是低浓度时促进植物根系与植株的生长，因此在植物根系施菌不仅能明显抑制线虫侵染，而且能促进植株营养器官的生长，同时对种子的萌发与生长也有促进作用。2、产生多种功能酶此菌能产生丰富的几丁质酶，几丁质酶对几丁质有降解作用，它能促进线虫卵的孵化，提高拟青霉菌对线虫的寄生率，此外还能产生细胞裂解酶、葡聚糖酶与丝蛋白酶，Galvez-Mariscal研究表明：在高效菌株中蛋白酶和葡聚糖酶、淀粉酶活性高出1.2~4.2倍和20~120倍，这些酶促进细胞分裂。3、降解效应Somaseknar研究发现，淡紫拟青霉能促进难溶磷酸盐的溶解，实验室研究证实：拟青霉菌的增溶效果达到30%，其它线虫拮抗菌达到20%~40%。同类研究还表明，拟青霉还能促进许多化学聚合物（如农药，制革废水等）的分解，这证明淡紫拟青霉具有一定的环保效应。（五）有效成分1、成分：淡紫拟青霉活体孢子2、毒性：急性经口大鼠LD50大于5400mg/kg，急性吸入大鼠LC50大于2300mg/m3，急性经皮大鼠LD50大于2350mg/kg，对眼睛和皮肤无刺激性，轻度致敏，对鱼、鸟为低毒，对蜜蜂、家蚕是安全的。3、作用机理：淡紫青拟霉孢子萌发后，所产生的菌丝可穿透线虫的卵壳、幼虫及雌性成虫体壁，菌丝在其体内吸取营养，进行繁殖，破坏卵、幼虫及雌性成虫的正常生理代谢，从而导致植物寄生线虫死亡。4、防治对象：大豆、番茄、烟草、黄瓜、西瓜、茄子、姜等作物根结线虫、胞囊线虫。5（六）淡紫拟青霉的生防机制淡紫拟青霉能够通过多种方式侵染根结线虫等植物寄生线虫，既可以通过物理方式寄生线虫的卵和胞囊，又可以在侵染线虫的过程中通过机械压力和分泌的胞外酶联合作用，或产生毒性代谢物质麻痹毒杀线虫促进菌物在线虫寄主上定殖和获取营养。真菌孢子附着在寄主虫体和卵壳上分泌几丁质酶加速虫体表和卵壳的分解，或使幼虫提早孵化，提高幼虫死亡率。肖炎农等通过一系列实验证明，淡紫拟青霉产生的几丁质酶能直接促进根结线虫卵的孵化，其孵化率与酶的浓度呈正相关，该酶对根结线虫幼虫有一定的致死作用。Bonants等用扫描电镜观察淡紫拟青霉对北方根结线虫卵的侵染过程，发现有裂解酶的参与。从发酵液中得到部分纯化的蛋白酶的分子质量为33.5kDa，最适PH10.3，温度60℃，蛋白酶的活性被苯甲磺酰氟（PMSF）完全抑制。通过延时显微镜观察发现，纯酶和线虫卵一起孵化，酶能使线虫的卵漂浮起来；乱的孵化受到严重的影响，不成熟的卵容易受到纯酶的影响，然而纯酶对幼虫没有明显的影响，说明淡紫拟青霉产生的胞外丝氨酸蛋白酶可能在线虫卵的穿透过程中起作用。（七）应用1、在蔬菜上防治病原线虫有机蔬菜生产中生物防治植物线虫病的主要生物类型，淡紫拟青霉并提出了提高生物防治效果的途径。植物线虫病在我国局部发生、危害严重，几乎每种作物上都有1~2种线虫病，有的发生面积不断扩大，危害越来越重，已成为农业生产上亟待解决的问题之一。淡紫拟青霉在植物根系周围施用淡紫拟青霉菌剂不仅能明显抑制线虫侵染，而且能促进植物根系及植株营养器官的生长，常规的化学防治的农药的毒性较大，危害绿色食品的生产，所以应寻找新的技术。淡紫拟青霉生物农药生物防治植物病原线虫是目前研究的热点，已发现可以防治线虫病的生物有捕食线虫的真菌、线虫、涡虫、线蚓、昆虫、螨类等；寄生线虫的病毒、原生动物、细菌等;还可用植物的提取液，其防治效果也较好。生物防治是目前病害防治中最具有应用前景的防治方法，符合环保和健康理念。但国内用于防治根结线虫病的生防产品非常少，大多数对根结线虫有作用的生防制剂都还处于研发阶段。目前登记的生防产品仅有“线虫必克”和阿维菌素以及最近登记的淡紫拟青霉。在蔬菜根结线虫防治上用的较多的有阿维菌素。可用0.5%阿维菌素颗粒剂15-17.5g/亩进行沟施或穴施。但作为生物农药阿维菌素存在几乎所有生物农药不可避免的弱点，即田间使用效果不太稳定。根结线虫病主要为害蔬菜根部，侧根和须根最易受害。受害根部产生大小不等的瘤状物或根结，根结初为白色，柔软，后变为浅黄褐色或深褐色，表面粗糙，有时裂开。剖开根结，可看到白色珍珠状小颗粒，是根结线虫的雌成虫。蔬菜受根结线虫侵染后生长发育缓慢，叶片小而黄。发病重时，植株矮小，不结实或结实不良，遇高温干旱天气时，植株易萎蔫甚至枯死。2、制剂：淡紫拟青霉菌淡紫拟青霉菌剂是纯微生物活孢子制剂，具有高效、光谱、长效、安全、无污染、无残留等特点，可明显刺激作物生长。试验证明，在植物根系周围施用淡紫拟青霉菌剂不仅能明显抑制线虫侵染，而且能促进植物根系及植株营养器官的生长，如播前拌种，定植时穴施，对种子的萌发与幼苗生长具有促进作用，可实现苗全、苗绿、苗壮，一般可使作物增产15%以上3、使用方法（1）拌种按种子量的1%进行拌种后，堆捂2—3小时、阴干即可播种。（2）处理苗床将淡紫拟青霉菌剂与适量基质混匀后撒入苗床，播种覆土。1公斤菌剂处理30—40平方苗床。（3）处理育苗基质将1公斤菌剂均匀拌入2—3方基质中，装入育苗容器中。（4）穴施施在种子或种苗根系附近，亩用量0.5—1公斤。4、注意事项（1）勿与化学杀菌剂混合施用。（2）请注意安全使用，淡紫拟青霉可寄生眼角膜，如不慎进入眼睛，请立即用大量清水冲洗。（3）最佳施药时间为早上或傍晚。勿使药剂直接放置于强阳光下。（4）贮存于阴凉干燥处，勿使药剂受潮。参考文献：《植物病害生物防治学》：第四章植物病害生物防治因子；十一、淡紫拟青霉