HPLC-仪器验证方案

中国国际制药股份有限公司WATERS2695高效液相色谱仪验证方案中国国际制药股份有限公司检验仪器OQ&PQ文件WATERS2695高效液相色谱仪验证验证或使用设备设备名称：高效液相色谱仪出厂编号：设备型号：2695型设备/计量编号：设备厂商：美国WATERS公司使用部门：质量检验部配套设备：打印机、微机工作站计划开始实施日期计划完成日期WATERS2695高效液相色谱仪验证方案审批部门/姓名签名日期验证小组负责人相关/接收部门确认人负责部门经理审批相关部门经理审批质量保证部审批管理者代表审批----------文件页码共页文件编号：注：以上人员签字后方可实施本草案中国国际制药股份有限公司WATERS2695高效液相色谱仪验证方案WATERS2695高效液相色谱仪验证方案目录1.0再确认目的2.0再确认项目及结果2.1仪器各单元开机性能确认2.2四元泵的确认2.2.1泵流量的确认2.2.2梯度准确度的确认2.3自动进样器确认2.3.1进样器精密度的确认2.3.2进样器线性的确认2.4检测器确认2.4.1波长准确度测试2.4.2检测器线性的确认2.4.3最小检测浓度的确认第1页共5页中国国际制药股份有限公司WATERS2695高效液相色谱仪验证方案WATERS2695高效液相色谱仪再确认方案1.0再确认目的通过验证来确认此台仪器各项性能是否符合要求。2.0再确认项目2.1仪器各单元开机性能确认项目开关功能键泵及进样器打开电源开关，泵及进样器进行自检，并显示置主画面。检测器打开电源开关，检测器灯打开，并进行自检约6min，氘灯在三个内置波长257、521、656处的校准，若偏差小于±1nm，自检通过，若大于1nm，出现自检错误提示。2.2四元泵的确认2.2.1泵流量的确认2.2.1.1测试条件：流动相：超纯水色谱柱：4.6mm×250mm温度：室温2.2.1.2测试方法：启动仪器，以水为流动相，待压力稳定后，在流动相出口处用称重过的10ml容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，收集5分钟流出的流动相，精密称定，每个流速测定3次，记录测试温度，按下式计算流量设定值误差Ss和流量稳定性误差SR。%100)(SSmSFFFS%100)(minmaxmRFFFS式中：Fm——Fm=（W2－W1）/（ρ·t），流量实测值，ml/min；W2——容量瓶＋流动相的质量，g；W1——容量瓶的质量，g；ρ——试验温度下水的密度，g/ml；t——收集流动相的时间，min；mF——同一组测量值的算术平均值，ml/min；Fs——流量设定值，ml/min；Fmax——同一组测量中流量最大值，ml/min；第2页共5页中国国际制药股份有限公司WATERS2695高效液相色谱仪验证方案Fmin——同一组测量中流量最小值，ml/min。2.2.1.3测试标准：Fs（ml/min）0.5001.0001.500允许误差Ss5%3%3%SR3%2%2%2.2.2梯度准确度的确认2.2.2.1测试条件：流动相：0.3%丙酮-水检测波长：254nm流速：1.000ml/min柱温：30℃2.2.2.2测试方法：按下表设置梯度洗脱程序，以两通代替色谱柱连接管路，先用超纯水冲洗系统，待基线平稳后开始执行梯度程序，画出梯度变化曲线。测定三次，取各梯度级高度的平均值，由曲线图测量100%B（C）梯度级平均高度计算各梯级实际体积%，每个梯级的理论体积%和实际体积%之差即为梯度准确度，以最大差值为梯度准确度误差。梯度洗脱表时间A通道（C通道）：超纯水B通道（D通道）：0.3%丙酮水溶液0.00min100%0%3.00min100%0%6.00min0%100%9.00min0%100%9.01min20%80%12.00min20%80%12.01min40%60%15.00min40%60%15.01min60%40%18.00min60%40%18.01min80%20%21.00min80%20%21.01min100%0%24min100%0%2.2.2.3测试标准：梯度准确度误差≤±1%2.3自动进样器的确认2.3.1进样器精密度的确认第3页共5页中国国际制药股份有限公司WATERS2695高效液相色谱仪验证方案2.3.1.1测试条件：流动相：乙腈-水（20:80）对照品：25µg/ml咖啡因对照溶液色谱柱：C18色谱柱检测波长：273nm进样量：10µl流速：1.000ml/min柱温：40℃2.3.1.2测试方法：对照品置于进样瓶中，共进样6针，记录峰面积，求6针RSD。2.3.1.3测试标准：RSD≤1.5%2.3.2进样器线性的确认2.3.2.1测试条件：流动相：乙腈-水（20:80）对照品：25µg/ml咖啡因对照溶液色谱柱：C18色谱柱检测波长：273nm进样量：（1、5、10、15、20）µl流速：1.000ml/min柱温：40℃2.3.2.2测试方法：对照品置于进样瓶中，不同进样量各进一针，记录峰面积，求进样浓度与峰面积的相关系数。2.3.2.3测试标准：相关系数r≥0.9992.4检测器的确认2.4.1波长准确度测试以水流过流通池时作一空白扫描，然后，以手动方式将咖啡因标样5)用水稀释10倍后注入流通池，扫描200nm～300nm范围内的紫外吸收图谱。记录咖啡因最大吸收和最小吸收处的波长，其205nm处的最大吸收波长与205nm比较，其273nm处的最大吸收波长与273nm比较，最小吸收波长与245nm比较，三波长处的差值|△λ|均应≤2nm。波长检查表（表35）选择波长（nm）205(max.)245(min.)273(max.)实测波长（nm）误差（nm）第4页共5页中国国际制药股份有限公司WATERS2695高效液相色谱仪验证方案2.4.2检测器线性的确认2.4.2.1测试条件：流动相：乙腈-水（20:80）对照品：（5、10、25、50、100）µg/ml咖啡因对照溶液色谱柱：C18色谱柱检测波长：273nm进样量：10µl流速：1.000ml/min柱温：40℃2.4.2.2测试方法：5个浓度对照品置于不同进样瓶中，各进一针，记录峰面积，求样品浓度与峰面积的相关系数。2.4.4.3测试标准：相关系数r≥0.9992.4.3最小检测浓度的确认2.4.3.1测试条件：流动相：乙腈-水（20:80）对照品：1×10-7/ml咖啡因对照溶液色谱柱：C18色谱柱检测波长：273nm进样量：5µl流速1.000ml/min柱温：40℃2.4.3.2测试方法：以流动相冲洗系统至基线平稳，进样，记录色谱图，由色谱图峰高及基线噪音，按下式计算最小检测浓度CLHCNCdL2式中：CL——最小检测浓度，g/ml；Nd——基线噪音峰高，mAU；C——标准溶液浓度，g/ml；H——标准溶液色谱峰高，mAU。2.4.3.3测试标准：≤1×10-7g/ml咖啡因溶液第5页共5页