湖北省高校大学生生物实验技能大赛之生物化学实验培训方案

湖北省高等学校大学生生物实验竞赛生物化学实验培训方案根据竞赛精神，生物化学实验参赛的内容要求，具体安排以下培训内容。序号实验名称实验内容学时1洗涤玻璃器皿的洗涤42分光光度计使用紫外分光光度计使用方法可见分光光度计使用方法443常用玻璃仪器的使用移液管、烧杯、三角瓶、容量瓶、分液漏斗、滴定管等使用方法44主要仪器使用天平、酸度计、移液枪、离心机、干燥箱、干燥器、水浴锅、制冰机使用方法165溶液的配制和标定标准溶液、缓冲溶液、搅拌、震荡、混匀、定容方法86糖含量的测定a3.5-二硝基水杨酸测还原糖（标准曲线的制作）b蒽酮比色法测糖含量（标准曲线的制作）c苯酚法测糖（标准曲线的制作）d多糖的测定88887蛋白质含量的测定a斐林-酚试剂法测蛋白质（标准曲线的制作）b凯氏定氮法测定蛋白质含量c考马斯亮蓝G-250测蛋白质（标准曲线的制作）8868糖类的性质实验a-萘酚反应间苯二酚反应糖类的还原作用层析22249蛋白质的性质实验双缩脲反应茚三酮反应黄色反应沉淀反应等电点层析22222410酶的动力学研究a尿酶的动力学研究b胰蛋白酶的动力学研究8811考试胰蛋白酶的动力学研究斐林-酚试剂法测蛋白质蒽酮测糖444实验一玻璃器皿的洗涤1实验目的和要求1.1要求掌握生物化学实验中使用器皿洗净方法，保证实验的准确性；1.2内壁被水均匀润湿而无条纹、不挂水珠。2实验内容2.1用去污粉、洗涤剂洗实验室中常用的烧杯、锥形瓶、量筒等一般的玻璃器皿，可用毛刷蘸些去污粉或合成洗涤剂刷洗。去污粉是由碳酸钠、白土、细沙等混合而成的。将要刷洗的玻璃仪器先用少量水润湿，撒入少量去污粉，然后用毛刷擦洗。利用碳酸钠的碱性去除油污，细沙的磨擦作用和白土的吸附作用增强了对玻璃仪器的清洗效果。玻璃仪器经擦洗后，用自来水冲掉去污粉颗粒，然后用蒸馏水洗三次，去掉自来水中带来的钙、镁、铁、氯等离子。洗干净的仪器倒置时，仪器中存留的水可以完全流尽而仪器不留水珠和油花。出现水珠或油花的仪器应当重新洗涤。洗净的仪器不能用纸或抹布擦干，以免将脏物或纤维留在器壁上面沾污了仪器。仪器倒置时应放在干净的仪器架上（不能倒置于实验台上）。锥形瓶、容量瓶等仪器可倒挂在漏斗板或铁架台上。小口颈的试管等可倒插在特别的干净的支架上。2.2铬酸洗液滴定管、移液管、容量瓶等具有精确刻度的仪器，常用铬酸洗液浸泡15min左右，再用自来水冲净残留在器皿上的洗液，然后用蒸馏水润洗2～3次。铬酸洗液的配制：在台秤上称取10g工业纯K2Cr2O7（或Na2Cr2O7）置于500mL烧杯中，先用少许水溶解，在不断搅动下，慢慢注入200mL浓硫酸（工业纯），待K2Cr2O7全部溶解并冷却后，将其保存于带磨口的试剂瓶中。所配的铬酸洗液为暗红色液体。因浓硫酸易吸水，用后应将磨口玻璃塞子塞好。使用洗液应按以下顺序操作：2.2.1用洗液洗涤前，凡能用毛刷洗刷的仪器必须先用自来水和毛刷洗刷，倾尽水，以免洗液被稀释后降低洗涤效果。2.2.2洗液用过后倒回原磨口瓶中，以备下次再用。当洗液变为绿色而失效时，可倒入废液桶中，绝不能倒入下水道，以免腐蚀金属管道。2.2.3用洗液洗涤过的仪器，应先用自来水冲净，再以蒸馏水润洗内壁2～3次。2.2.4洗液为强氧化剂，腐蚀性强，使用时特别注意不要溅在皮肤和衣服上。必须指出：洗液不是万能的，以为任何污垢都能用它洗去的说法是不对的。如被MnO2沾污的器皿，用洗液是无效的，此时可用草酸、盐酸或酸性Na2SO3等还原剂洗去污垢。2．3用其它溶剂洗光度法中所用比色皿，是由光学玻璃制成的，不能用毛刷刷洗。通常视沾污的情况，选用铬酸洗液、HCl-乙醇、合成洗涤剂等浸泡后，用自来水冲洗净，再用蒸馏水润洗2～3次。2.3.1NaOH–KMnO4水溶液称取10gKMnO4放入250mL烧杯中，加入少量水使之溶解，再慢慢加入100mL10%NaOH溶液，混匀即可使用。该混合液适用于洗涤油污及有机物。洗后在器皿中留下的MnO2·nH2O沉淀物可用HCl－NaNO2混合液、酸性Na2SO3或热草酸溶液等洗去。2.3.2KOH－乙醇溶液适合于洗涤被油脂或某些有机物沾污的器皿。2.3.3HNO3－乙醇溶液适合于洗涤油脂或有机物沾污的酸式滴定管。使用时先在滴定管中加入3mL乙醇，沿壁加入4mL浓HNO3，盖住滴定管管口，利用反应所产生的氧化氮洗涤滴定管。实验二分光光度计的使用1实验目的和要求掌握紫外光分光光度计、可见光分光光度计的使用2实验内容可见--紫外光分光光度计的使用不同物质对不同波长入射光的吸收程度各不相同，从而形成特征性的吸收光谱。分光光度法不仅适应于可见光区，同时还可扩展至紫外光区及红外光区，因此给科研实验带来了极大方便。2.1接通稳压器电源，待稳压器输出电压稳定至200V后打开光度计电源，仪器自动进入初始化。2.2初始化约需时10min，内容包括：①寻找零级光;②建立基线;③最后当显示器指示××nm时，，表明仪器完成初始化程序，可进入检测状态。2.3按要求输入各项参数，选择相应比色杯(玻璃或石英)，将空白管、标准管及待测管依次放入比色皿架内，关上比色池盖。2.4以空白管自动调零。2.5试样槽依次移至样品位置，待数据显示稳定后按“START/STOP”键，打印机自动打印所测数据，重复上述步骤，直到所有样品检测完毕。2.6检测结束后应及时取出比色杯，并清洗干净放回原处，同时关上仪器电源开关及稳压器电源开关，做好使用情况登记。3注意事项3.1仪器初次使用或使用较长时间(一般为一年)，需检查波长准确度，以确保检测结果的可靠性。3.2由于长途运输或室内搬运可能造成光源位置偏移，导致亮电流漂移增大。此时对光源位置进行调整，直至达到有关技术指标为止。若经调整校正后波长准确度、暗电源漂移及亮电流漂移三项关键指标仍未符合要求，则应停止使用，并及时通知有关技术人员检修。3.3每次检测结束后应检查比色池内有否溶液溢出，若有溢出应随时用滤纸吸干，以免引起测量误差或影响仪器使用寿命。3.4仪器每次使用完毕，应于灯室内放置数袋硅胶(或其它干燥剂)，以免反射镜受潮霉变或沾污，影响仪器使用，同时盖好防尘罩。3.5仪器室应通常保持洁净干燥，室温以5-35℃为宜，相对温度不得超过85%。有条件者应于室内配备空调机及除湿机，以确保仪器性能稳定。3.6仪器室不得存放酸、碱、挥发性或腐蚀性等物质，以免损坏仪器。3.7仪器长时间不用时，应定时通电预热，每周1次，每次30min，以保证仪器处于良好使用状态。3.8坚持标准溶液现用现配，不使用过期标准液。3.9比色皿应该保持清洁，干燥。如有污物，可用稀盐酸清洗后，再用1：1的酒精与乙醚清洗凉干。禁止用硬物碰或擦透明表面。3.10在开机状态，不测量时，应该打开样品池门，否则，影响光电传感器寿命。3.11仪器使用完毕后盖好防尘罩。3.12比色皿的校准在440nm波长下，用含铬量30ug/mL的重铬酸钾标准溶液进行检测。如果用两个比色皿。将两个比色皿都装上清水，以其中一个为基准，将另外一个比色皿（同样也是装清水的）作为待测样，记录其读数（或者用自动清零），把这一点作为你数据作图的第一点；然后用该比色皿装上样品进行正常监测。实验三常用玻璃仪器的使用1实验目的和要求掌握玻璃仪器正确的使用方法2实验内容移液管、烧杯、三角瓶、容量瓶、分液漏斗、滴定管等使用方法。实验四主要仪器使用方法1实验目的和要求掌握天平、酸度计、移液枪、离心机、干燥箱、干燥器、水浴锅、制冰机正确的使用方法2实验内容2.1天平的使用（电子天平的使用方法）2..1.1首先，水平调节水泡应位于水平仪中心。⑴接通电源，预热30分钟。⑵打开关ON，使显示器亮，并显示称量模式0.0000g⑶称量按TAR键，显示为零后。将称量样品放入盘中央，待读数稳定后，该数字即为称物体的质量。⑷去皮称量按TAR键清零，将空容器放在盘中央，按TAR键显示零，即去皮。将称量样品放入空容器中，待读数稳定后，此时天平所示读数即为所称样品的质量。2.1.2称量方法⑴直接称量法用来直接称量固体样品的质量。如小烧杯。要求：所称样品洁净、干燥，不易潮解、升华，并无腐蚀性。方法：天平零点调好以后，关闭天平，把被称样品用一干净的纸条套住(也可采用戴专用手套)，放在天平左盘中央。调整砝码使天平平衡，所得读数即为被称样品的质量。⑵固定质量称量法用于称量指定质量的试样。如称量基准物质，来配制一定浓度和体积的标准溶液。要求：试样不吸水，在空气中性质稳定，颗粒细小（粉末）。方法：先称出容器的质量，关闭天平。然后加入固定质量的砝码于右盘中，再用牛角勺将试样慢慢加入盛放试样的容器中，半开天平进行称重。当所加试样与指定质量相差不到10mg时，完全打开天平，小心地将盛有试样的牛角勺伸向左边称量盘的容器上方约2～3cm处，勺的另一端顶在掌心上，用拇指、中指及掌心拿稳牛角勺，并用食指轻弹勺柄，将试样慢慢抖入容器中，直至天平平衡。此操作必须十分仔细。⑶递减称量法用于称量一定质量范围的试样。适于称取多份易吸水、易氧化或易于和CO2反应的物质。方法：①用小纸条夹住已干燥好的称量瓶，在用台秤上粗称其质量。②将稍多于需要量的试样用牛角匙加入称量瓶，在台秤上粗称。③将称量瓶放到天平左盘的中央，在右盘上加适量的砝码或圈码使之平衡，称出称量瓶及试样的准确质量（准确到0.1mg），记下读数，设为m1g。关闭天平，将右盘砝码或圈码减去需称量的最小值。将称量瓶从拿到接受器上方，右手用纸片夹住瓶盖柄，打开瓶盖。将瓶身慢慢向下倾斜，并用瓶盖轻轻敲击瓶口，使试样慢慢落入容器内（不要把试样撒在容器外）。如估计倾出的试样已接近所要求的质量时(可从体积上估计)，慢慢将称量瓶竖起，并用盖轻轻敲瓶口，使粘附在瓶口上部的试样落入瓶内，盖好瓶盖，将称量瓶放回天平左盘上称量。若左边重，则需重新敲击，若左边轻，则不能再敲。准确称取其质量，设此时质量为m2g。则倒入接受器中的质量为(m1–m2)g。重复以上操作，可称取多份试样。2.2酸度计的使用2.2.1酸度计是对溶液中的氢离子活度产生选择性响应的一种电化学传感器。理论上，溶液的酸度可以这样测得：以参比电极、指示电极和溶液组成工作电池，测量出电池的电动势。用已知pH的标准缓冲溶液为基准，比较标准缓冲溶液所组成的电池的电动势，从而得出待测试液的pH值。因此酸度计也叫pH计2.2.2组成酸度计由电极和电动势测量装置组成。电极用来与试液组成工作电池；电动势测量部分对电池的电动势产生响应，显示出溶液的pH。多数酸度计还兼有毫伏档，可以直接测电极电位。若配合适的离子选择电极，还可以测定溶液中某离子的活度（浓度）。实验室中广泛使用的pHS-3C型酸度计是一种精密数字显示酸度计。其测量范围宽，重复误差小。PHS-3C型pH计由主机、复合电极组成。pHS-3C型酸度计（上海雷磁）主机上有五个按钮，它们分别是：选择、定位、斜率、温度和确定按钮。2.2.3使用步骤2.2.3.1检查酸度计的接线是否完好。接通电源，按下背面的电源开关，预热30min后方可使用。2.2.3.2取下复合电极上的电极套，注意不要将电极套中的饱和KCl溶液撒出或倒掉。用蒸馏水冲洗电极头部，用滤纸吸干残留水份。2.2.3.3定位在测量之前，首先对pH计进行校准，我们采用两点定位校准法，具体的步骤如下：a.打开电源开关，按“pH/mV”按钮，使仪器进入pH测量状态；b.用温度计测量被测溶液的温度，读数，例如25ºC。按“温度”旋钮至测量值25ºC，然后按“确认”键，回到pH测量状态。c.调节斜率旋钮至最大值。d.打开电极套管，用蒸馏水冲洗电极头部，用吸水纸仔细将电极头部吸干，将复合电极放入pH为6.86的标准缓冲溶液，使溶液淹没电极头部的玻璃球，轻轻摇匀，待读数稳定后，按“定位”键，使显示值为该溶液25ºC时标准pH值6.86，然后按“确认”键，回到pH测量状态。e.将电极取出，洗净、吸干，放入pH为4.01的标准缓冲溶液中，摇匀，待读数稳定后，按“斜率”键，使显示值为该溶液25ºC时标准pH值4.01，按“确认”键，回到pH测量状态。f.取出电极，洗净、吸