API-20E-(20100)使用说明

20100/20160API20E只供体外诊断用肠杆菌和其它革兰氏阴性杆菌鉴定系统API20E是肠杆菌科和其它G-杆菌的标准鉴定系统，包括23个标准化微型生化测试和鉴定资料库。可鉴定菌谱名录，请参考鉴定表。原理API20E试验条是由20个含干燥底物的小管所组成。这些测定管用细菌悬浮液接种。培养一定时间後，通过代谢作用产生颜色的变化，或是加入试剂後变色而观察其结果。根据说明表判读反应，参照分析图索引和APILABPlus软件得到鉴定结果。试剂一个ref.20100（25测试）试剂盒包括：－25条API20E试验条；－25个培养盒；－25张报告单－1个封口夹－1份API20E操作说明书一个ref.20160（100测试）试剂盒包括:－100条API20E试验条－100个培养盒－100张报告单－1个封口来－1份API20E说明书附加试剂（不包括在试剂盒内）：－NaCl0.85%悬浮液，5ml(Ref.20230)或SuspensionMedium县浮液，5ml(Ref.20150)－API20E试剂盒(Ref.20120)(TDA,IND,VP1,VP2,NIT1,NIT2和OX)或单一附加试剂:TDA(Ref.70400)JAMES(Ref.70540)VP1(Ref.70420)VP2(Ref.70430)NIT1(Ref.70440)NIT2(Ref.70450)OX(Ref.70460)－Zn试剂(Ref.70380)－石腊油(Ref.70100)－API专用一次性加样管(Ref.70250)－APILABPLUS鉴定结果分析软件－附加试剂安瓿架(Ref.70200)必要时，需要以下附加试剂：APIOFMedium(Ref.50110)－测定其发酵型或氧化型代谢作用；APIMMedium(Ref.51020)－测定兼性厌氧细菌的运动性。所需一般实验室设备－培养箱(35~37°C)－冰箱－本生煤气喷灯或酒精灯－记号笔培养基和试剂成份NaCl0.85%培养基5mlor悬浮基物5mlNaCl8.5g无离子水1000ml无离子水TDA试剂5mlFecl33.4gH2O加至100mlJAMES试剂5mlJ2183化合物(保密)0.5gHCl1N加至100mlS24/25:避免接触皮肤和眼.如与眼接触，必须立即用水冲洗至少10分钟。如与皮肤接触，用肥皂洗和用水冲洗。IND试剂5ml对二苯氨基苯甲醛5gHCL9.25gH2O15.75ml异戊醇75ml危害R10:可燃R20:吸入伤害S24/25:避免皮肤和眼接触VP1试剂5mlKOH40gH2O100ml有毒性R35:引起严重伤害.S2:避免儿童接触.S26:如接触眼睛，立即冲洗，做医疗处置.S27:.立即拿走沾染的衣物S37/39:戴手套，保护眼/脸VP2试剂5mlα-奈酚6g乙醇100ml高度易燃S7:严密容器存放S16:远离火源，不能吸烟.NIT1试剂5ml对氨基苯磺酸0.4g乙酸30gH2O70ml具腐蚀性R34:引起灼伤S2:避免儿童接触S23:避免吸入蒸气S26:若与眼接触，即用水冲洗，并治疗处置.NIT2试剂5mlN,N-二甲基-奈酶胺0.6g乙酸30gH2O70ml具腐蚀性R34:引起灼伤S2:避免儿童接触S23:不能吸入蒸气S26:若与眼接触，即用水冲，并治疗处理.OX试剂5ml四甲基-对-苯撑二胺1g异戊醇100ml危害R10:易燃.R20:吸入伤害.S24/25:避免接触皮肤和眼Zn试剂10g锌粉易燃R15:若接触水可产生依然气体R17:在空气中可自燃S7/8:保存干燥密封的容器S43:若引起火,使用粉末灭火器'不得使用水.试验条的储存试验条采用铝袋包装并附有干燥剂。在开启铝袋後，请使用封口夹(试剂盒已含有)封口，以保证试条的干燥。开启铝袋後，在2-8°C环境下，试验条可享有10个月的有效期(或包装盒上的有效期，以较短时间为准)。附加试剂的储存附加试剂应储於黑暗2-8°C环境下（除TDA,VP1及NIT1可储於2-30°C及Zn可储於8-30°C）直至有效期。当安瓿瓶打开後，所有试剂只有一个月有效期（或包装盒上的有效期，以较短时间为准）。请小心记录开启安瓿的时间。OX和JAMES试剂对光非常敏感：请用箔纸包裹里，只在使用时才从冰箱中取出，同时应避免长时间放至放室温中。附加试剂的使用在使用前，所有附加试剂需达到室温（20-30°C）1.API20E试剂盒：－压下安瓿瓶盖直至和安瓿瓶尖接触。－垂直握住安瓿，用大拇指施加压力於瓶盖斜面以推断安瓿尖。－将安瓿瓶倒置，并保持垂直。－小心拧松瓶盖以滴出试剂。2.TDA,VP1,VP2,NIT1,NIT2和OX附加试剂(附有滴头的安瓿)－根据警告及留意一栏所列方法打开一安瓿试剂。－滴出一滴试剂後小心盖上安瓿。－根据试剂的储藏一栏，储存试剂。3.JAMES附加试剂（不附有滴头的安瓿）－根据警告及留意一栏所列方法打开一安瓿JAMES附加试剂溶液。－使用干燥加样枪将全部溶瓶加入含有冻干成份的滴瓶中。－将滴头插入滴瓶。－小心关紧瓶盖。－摇动滴瓶。－等待5-10分钟直至所有有效成份溶解。－使用试剂後，拧紧瓶盖，根据试剂的储藏一栏，储存试剂。4.Zn附加试剂－打开小瓶－取大约2-3mgZn粉未,使用小刮铲将粉未加入反应小管.－使用试剂後，拧紧瓶盖，根据试剂的储藏一栏，储存试剂。警告及留意事项：只供体外诊断用。合格检验科工作人员应采用无菌操作方法并防范带传染性物质。不应用口吸取标本或试剂。不应使用过期试剂。由冰箱取出後，所有试剂需达室温(20-30°C)方能使用。小心开启安瓿瓶：－用手垂直握住安瓿瓶(白色瓶盖向上)－尽量将瓶盖压下－用大拇指顶住瓶盖上斜面部份－向外施加压力直至瓶盖内瓶尖断裂*无滴头安瓿：小心移开瓶盖*附滴头安瓿：垂直倒置安瓿瓶，挤压瓶盖将所有试剂加入滴瓶所有加样後产品应视之带有污染性，需小心处理。所有病人标本和细菌培养均可能带有污染性，应跟据国际标准处理(NCCLSM29-72:CDCManualBiosafetyinMicrobiological&BiomedicalLaboraties,1993)在完成检测、判读後，所有标本，污染物及试条必须高温高压消毒，烧成灰或在丢弃前浸於消毒水内杀菌。最後鉴定的结果需由合格微生物学家肯定，同时需考虑病史、标本来源、菌落及显微镜下生长形态、其他测试结果，例如药敏结果。使用说明：所有细菌培养及标本需视为带有传染性，只有合格检验师方能操作无菌技术及遵守有关细菌操作注意事项(NCCLSM29-72,ProtectionofLaboratoryWorersfromInfectionsDiseases,TranmittedbyBlood,Bodyflumids,&Tissue-2ndEdition;TentativeGuidelines及BiosefetyinMicrobiological&BiomedicalLaboratories.HHSPublicationNo.CCDC)93-8395,3rdEdition(May1993).或本地规定。)试验条的准备：准备一个培养盒（盘和盖子），倒入约5ml水於盘的蜂窝小凹中，造成一个湿室。记菌株资料於盘的边沿部分。从包装中取出试验条放到盘中。进行Oxidase氧化酶检测:-在玻片上放上张滤纸片。-在滤纸上滴一滴水。-取一个菌落涂在滤纸上。-加一滴OX试剂-如於1至2分钟内呈现深紫色，则为阳性反应。反应结果应记录於结果报告单上成为第21个测试。注意：API20E鉴定菌谱不包括苛养菌，需采用特别步骤排除需特别营养/培养步骤的菌株。接种物的制备：－根据警告及留意一栏所列方法打开一安瓿NaCl0.85%(5ml)或SuspensionMedium(5ml)或使用无杂质无菌5ml盐水/蒸馏水。－以接种针从分离物的平板上挑取已分纯单个菌落至悬浮基物中。－仔细研刀以达到均一的细菌悬液注意：大多数弧菌均嗜盐，如怀疑菌株为弧菌，请使用NaCl0.85%(5ml)medium悬浮液。试验条的接种用吸管将细菌悬液充满檬酸CIT、VP各GEL管；其它管仅充满管部(不是杯部)；ADH、LDC、URE、ODC和H2S，则用矿物油覆盖；盖上盖子，孵育於35~37°C18~24小时。於周未孵育：API20E的生化反应需於孵育18-24小时後判读，如无法进行试条需於温箱取出并置於2-8°C直至可以进行判读。判读试条在35~37°C培养18~24小时後，参考说明表判读其结果；记录由自发代谢作用而产生的结果於报告单上；如果葡萄糖是阳性并且/或3个或3个以上测定是阳性的话：加试剂观察结果；-VP测定：各加1滴VP1和VP2试剂，至少等待10分钟，浅粉或红色表明阳性结果，记录於报告单。如浅粉红色在10至12分钟内出现，判断结果为阴性。-TDA测定：加一滴TDA试剂，深褐色为阳性反应，记录於报告单上。-IDN测定：加一滴James试剂。反应立即发生：粉红色出现在整个反应应管者为阳性，记录於报告单上。或加一滴吲哚试剂，等2分钟，出现红色环表明为阳性反应。-NO2测定：各加一滴Nit1和Nit2试剂於葡萄糖管内，待2~3分钟後，红色表示阳性，阴性反应（黄色）可能由於还原至N2（有时还有气泡）：加2-3mg锌粉到葡萄糖管，5分钟後，如果管保持黄色表示N2阳性记录於报告-在MacConkey(McC)培养基上的生长；相应的反应编码，则得到一个个位数的编码。举例：单。如果测定变粉红，这明是阴性；硝酸盐仍留管内，被锌粉还原。-葡萄糖氧化型(OF-O)；-葡萄糖发酵型(OF-F)。根据相同的原理，将此测试能有效帮助对革兰氏阴性，氧化酶阳性杆菌的鉴定。注意：Nitrate还原及Indole测试需在最後进行，因为以上反应会产生氧体，影响其他反应判读。在加入有关试剂後，请小心勿调换培养盒。9如果萄萄糖是阴性，并且阳性测定的数目少於2个或等於2个，先不加试剂：-接种2个APIOF培养基证葡萄糖的代谢类型；5315173-57日勾维肠杆菌-划一个MacConkey平板；查照分析图形索引和APILAB软件，查照/输入编号後，可得以下信息：-被鉴定出的种名；-接种1个APIM培养基测定运动性或用显微镜直接观察；-重新培养24小时；-鉴定百分数，T索引是由模式（典型）图形而得；-如上述那样加入试剂；-如有与鉴定相反的测定结果，一般可看该种的阳性反应%；-记录试验条和补充试验的结果於告单，参考说明表。-鉴定质量的评价；鉴定废物处理－用分析图形检索或APILABPlus软件：所得反应的类型必须以数字化形式记录在报告单，每3个测定为一组，每个以1、2和4标明，在每组中，阳性反应以相应的数字相加，由API20E的20个测定可得一个7位数。氧化酶反应构其第21个反应，如阳性则为4。使用後，所有的安瓿，试验条和培养盒在处置之前都必须高压灭菌，烧成灰或浸泡於杀菌剂中。局限性－API20E鉴定系统能准确鉴定在鉴定范围（请查阅鉴定表）内的菌种，但不能用於鉴定/排除鉴定范围外的菌种。有时，7位数检索编码还不足以区分菌株，需要进行一些补充试验：－由於API技术和传统技术的不同，有可能出现不同生化反应结果。-NO3盐还原到亚硝酸盐(NO2)；-亚硝酸盐还原到氮(N2)；－所有沙门氏菌/沙雷氏菌鉴定需血清鉴定确认。-运动性(MOB)；质量控制培养基、试验条和试剂在生产的不同阶段都已进行严格的系统性质量控制。对愿意进行自我质量控制者，推荐以标准菌株，所得结果如下：ONPGADHLDCODCCITH2SURETDAINDVPGELGLUMANINOSORRHASACMELAMYARANO2N21.+−V−V−−−−−+−−−−−−−−−−−2.++−++−−−−+−++−+++++++−3.−−−+V+++−−V+−−−−V−−−+−4.+−+−+−V−V−V−++++++++++−5.+−++−−−−+−−++−++−+−++−1.Stenotrophomonasmaltophilia(嗜麦芽糖寡养单胞菌)ATCC513312.Ente