实验2-小鼠精子畸形试验-20121025

一、目的„精子畸形试验是检测受试化学毒物能否破坏哺乳动物精子正常形态的实验方法„通过该实验，学习和掌握小鼠精子畸形试验的原理和步骤二、原理„精子畸形是指精子的形状异常和异常精子数量的增多;„生殖系统对化学毒物的作用十分敏感,在其它系统还未出现毒性反应之前，生殖系统可能已出现损害作用;„在某些化学毒物、特别是可引起生殖细胞遗传性损伤的化学毒物作用下，睾丸产生的畸形精子数量大增。因此可用检测雄性动物接触化学毒物后精子畸形率的高低,来反映该化学毒物的生殖毒性和对生殖细胞的潜在的致突变性。„化学毒物引起精子畸形的机制尚未完全清楚。一般认为，常染色体上的基因控制精子畸形，Y-性连锁基因控制畸形精子的表现。某些特异的染色体重排，如性、常染色体易位，是化学毒物诱发哺乳动物畸形率增高的主要机制。„精子畸形有可能影响生殖。因此，当受检物引起精子畸形率增高，即使不一定是化合物诱发生殖细胞突变的结果，但也表明受试物直接或间接损害精子，从而可能影响生殖。mousehuman三、实验材料剂1.实验动物体重25~35g小鼠。2.实验器材眼科手术剪、眼科镊子、玻璃平皿、显微镜、纱布、吸管、漏斗、小烧杯、计数器等3.试剂磷酸盐缓冲液、甲醇、伊红染液四、操作步骤（一）动物选择（二）剂量与分组（三）染毒与采样（四）制片（五）阅片（四）制片颈椎脱臼法处死小鼠，剪开腹腔，分离并摘取双侧附睾，将附睾放入盛有约3ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的小平皿中，以眼科剪将附睾剪成小块，用吸管将悬浮液轻轻吹打5～6次，静置3～5min，用四层擦镜纸滤除组织碎片，吸取此精子悬液滴于清洁载玻片上，均匀推片，待玻片晾干后用甲醇固定5min，干燥后（此时也可镜检观察精子形态）再用1%的伊红醇溶液染色1～2h（或30min），流水冲洗，晾干后镜检。制片颈椎脱臼处死小鼠取双侧附睾剪碎附睾3ml磷酸盐缓冲液取悬液滴于玻片上推片擦镜纸过滤甲醇固定5分钟伊红染色30分钟（五）阅片„首先在低倍镜下选择背景清晰、精子分布均匀、重叠较少的区域，然后在高倍镜下观察结构完整的500个精子，计数其中畸形的精子数。五、结果分析与评价„精子畸形形态观察无钩、香蕉形、无定形、双头、胖头、折尾、双尾„计算精子畸形的发生率（头部重叠或全部重叠的精子、无尾精子不进行计数）。„注意鉴别制片过程中人为造成的精子损伤。正常精子胖头精子双头精子双尾精子双尾精子双尾精子香蕉形精子人类精子Thanks!