体外诊断试剂盒定性产品技术审评要点概述

.8中国医疗器械信息|ChinaMedicalDeviceInformation专题·临床检验ThematicForum·ClinicalLaboratory北京市二类IVD试剂主要以生化试剂和免疫试剂为主，目前这两类产品占到日常审核量的80%左右。免疫试剂按测量结果可划分为定性和定量两种，其中定量试剂的审评工作目前可以参考2011年发布的《临床化学体外诊断试剂（盒）产品技术审评规范》，而定性产品评价目前在国内没有统一的要求，因此定性IVD相关的审评规范的制定对于审核员对相关产品的审核尺度把握以及引导企业良性发展均具有重要的意义。下面就我们在日常审核中所把握的一些基本原则进行简要概述。体外诊断试剂(盒)定性产品技术审评要点概述孙嵘薛玲于泳北京市药品监督管理局医疗器械技术审评中心（北京100061）内容提要：定性体外诊断试剂的技术审评目前在国内没有统一执行标准。本文从适用范围、命名组成、主要技术指标、临床要求和标签说明书等方面，对定性体外诊断试剂的审评工作中遵循的一些基本原则进行简要概述。审评的规范化将有助于相关审核人员把握技术审评工作的基本要求和尺度，指导生产企业的产品注册工作，明确其产品定位。关键词：体外诊断试剂定性审评OverviewoftheEvaluationPointsoftheQualitativeInVitroDiagnosticReagentsSUNRongXUELingYUYongBeijingDrugAdministrationMedicalDeviceEvaluationCenter(Beijing100061)Abstract:Evaluationofthequalitativeinvitrodiagnosticreagentsiscurrentlynouniformimplementationofstandardsinmycountry.Abriefoverviewofsomebasicprinciplestofollowintheevaluationofqualitativeinvitrodiagnosticreagentsdescribesinthispaperaboutthescopeofapplication,compositionandnomenclature,majortechnicalindicators,clinicalrequirements,labelandpackageinsert.Thestandardizationoftheevaluationwillcontributetotherelevantauditstafftograspthebasicrequirementsandscaleofthetechnicalreviewprocess,guidetheregistrationofmanufacturersofproductsandclearproductpositioning.Keywords:invitrodiagnosticreagents,qualitative,evaluation1.适用范围本文所述适用于依据《体外诊断试剂注册管理办法》（试行）管理类别为Ⅱ类的、在医学实验文章编号：1006-6586(2012)04-00中图分类号：R446文献标识码：A收稿日期：2012-03-01作者简介：孙嵘，免疫学博士，北京市药品监督管理局医疗器械技术审评中心临检科副主任科员，主要负责IVD产品及临床检验类医疗仪器的标准复核、注册审评以及体系考核等相关工作。.9ChinaMedicalDeviceInformation|中国医疗器械信息临床检验·专题ClinicalLaboratory·ThematicForum室进行定性检测所使用的体外诊断试剂（盒）。其中所述“定性”是指只给出阴性或阳性（有反应或无反应、是或非、有或无、正常或异常）两种可能的结果。至于定量、半定量检测试剂（盒）以及已有中华人民共和国国家标准和行业标准的产品不在本文讨论范围之内。2.试剂盒命名、组成及用途2.1试剂（盒）命名的原则试剂（盒）名称由三部分组成。第一部分：被分析物的名称；第二部分：用途，如检测试剂盒、检测试纸；第三部分：方法或原理，如酶联免疫吸附试验法、胶体金免疫层析法等。例：肌钙蛋白I检测试纸（胶体金免疫层析法）、抗角蛋白抗体检测试剂盒（间接免疫荧光法）。2.2试剂（盒）的组成如单试剂，双试剂，多试剂；试纸；微孔板等。2.3工作原理试剂（盒）通过各自不同的反应原理，最终通过仪器检测或肉眼观测，对被分析物做出是或不是、有或无、阳性或阴性、有反应或无反应、检出或未检出的结果判定。2.4产品的预期用途试剂（盒）的预期用途为对临床样本中被分析物的定性检测。2.5产品适用的相关标准（1）GB/T191包装储运图示标志；（2）YY/T0316医疗器械风险管理对医疗器械的应用；（3）YY0466医疗器械用于医疗器械标签、标记和提供信息的符号。3.产品的主要技术指标3.1外观目测检查，符合生产企业规定的正常外观要求（一般要求试剂无杂质、无絮状物，外包装完整无破损，标签清晰可辨）。3.2净含量（如适用）用通用量具测量，液体试剂的净含量应不少于标示值。3.3膜条宽度（免疫层析法适用）随机抽取一条试纸，使用游标卡尺测量其宽度，应不低于2.5mm。3.4液体移行速度（免疫层析法适用）按说明书进行操作，从试纸浸入样本液开始用秒表计时，直至液体达到图1所示的C区和D区之间的交界线时停止计时，所用的时间记为t，用游标卡尺测量A+B+C区的长度，记为L，则L/t为移行速度，结果应不低于10mm/min。3.5临界值重复测定处于临界值水平的被分析物时，理论上应得到50%阳性和50%阴性的结果。小幅增加被分析物浓度/水平，对样本进行多次检测，预期将得到相对较大的阳性结果和较小比例的阴性结果。同样地，小幅减少被分析物浓度/水平，预期会得到相对较大的阴性结果和较小比例的阳性结果（见图2）。在定性试验中进行临界值的确定有许多种方法，如以阴性对照均值加上两倍或三倍标准偏差作为临界值、以百分位数法单侧95%或99%来确定临界值、使用ROC曲线（receiveroperatingcharacteristic）设定临界值等。临界值的验证可以通过制备在临界值上下20%左图1..10中国医疗器械信息|ChinaMedicalDeviceInformation专题·临床检验ThematicForum·ClinicalLaboratory右浓度的样本进行。一般来说，临界值上下20%左右为95%区间。可以进行重复检测，看检测结果是否满足95%的阴性和95%的阳性，从而判断临界值的确定是否合适。“临界值”是定性IVD产品最重要的性能指标，目前大多数生产企业仍在使用“检出限/最低检出限”。我们出于临床的实际需要考虑，经过与业内专家的多次讨论，最终决定采用“明确临界值，并给出95%区间”这样一个最能体现产品性能的方案。具体要求如下：（a)对临界值增加一定浓度的样本检测次数≥20，结果的阳性率应≥95%。（b)对临界值减少一定浓度的样本检测次数≥20，结果的阴性率应≥95%。注1：建议使用国家参考品，并提供相关证明文件。如果使用的样本是企业自配，应明确原料的来源（包括生物学来源）、基质、配制方法及赋值方法。注2：相对临界值增加或减少的“一定浓度”原则上应保持一致且不宜过高（建议控制在30%以下），并明确。注3：应考虑是否符合临床实际诊断意义。3.6抗干扰性干扰物质可能是内源性或外源性的，可以从多方面影响分析过程，如化学效应、物理效应、基质效应、非特异性、交叉反应性等，使得在分析时产生干扰。免疫类产品应包括脂血、溶血、黄疸、类风湿因子等常见干扰物。应明确潜在干扰物质不引起干扰的最高浓度，检测含有最高浓度/水平的干扰物质的阴性样本3次，结果应满足企业规定的要求（即干扰标准）。干扰标准表示干扰物质引起的最大容许的影响，通常是基于可能影响医师对患者的诊断、治疗或处治的真实值的偏差。注1：建议使用国家参考品，应当是被金标准确定过的、和/或成熟方法检测的，和/或经临床确认的阴性样本。如果使用的阴性样本是企业自行配制的，那么应明确基质、配制方法及赋值方法。注2：干扰物质的选择应当科学合理，并且其应当有可能存在于待测样本中。注3：一定要注意抗体的特异性，应注明其交叉反应，说明其特异性。例如，NT-proBNP定性检测试剂（盒），因为NT-proBNP与ANP、CNP在靠近羧基端的位置存在同源序列，那么应当验证在企业声称的特定ANP、CNP水平下，检测阴性样本时不产生假阳性结果。注4：如法规、标准或权威参考资料有明示的干扰物质，则应进行分析。3.7S/CO值重复性（适用时）S/CO值用于表示检测样本（sample）与临界值（cutoff）的吸光度比值，通常S/CO≥1判为阳性，1为阴性。适用于如ELISA或化学发光法等有定量检测方法的产品。要求如下：检测临界值附近水平样本20次，其重复性CV值应满足企业声明（CV值原则上应≤15%）。3.8HOOK效应（适用时）亦称钩状效应。抗原抗体反应时，抗原抗体须在一定比例范围内才能出现最大凝集，抗原过量或抗体过量都会导致两者交联度降低，从而导致凝集程度与实际浓度不符的现象，在凝集曲线上表现为类似抛物线的形状。所以强阳性样本可能会出现假阴性结果。HOOK效应适用于如双抗体夹心法等已明确可能出现此效应的方法学产品。要求如下：检测临床可见最高浓度的强阳样本3次，结果应不出现阴性。3.9批间差抽取三个批次的试剂/试纸，每个批次至少图2..11ChinaMedicalDeviceInformation|中国医疗器械信息临床检验·专题ClinicalLaboratory·ThematicForum40人份，按3.5临界值的检验方法检测，各浓度反应结果应一致。3.10稳定性目前稳定性试验有做效期稳定性验证的，也有做加速试验的。考虑到加速试验并无明确可靠方案直接推导产品有效期，故我们一直采用效期稳定性验证。（1）试剂（盒）在规定贮存条件下保存至有效期末，超过有效期一定时期内进行检测，产品的性能应至少符合临界值、S/CO值重复性、HOOK效应的要求。（2）开瓶稳定性（如适用）试剂（盒）开瓶之后，在规定的贮存条件下保存至开瓶有效期末，超过有效期一定时期内进行检测，要求同上。3.11其他上述性能为产品的主要技术指标，适用时，企业可根据产品特点增加其他技术要求。4.产品的临床要求试剂（盒）按照《体外诊断试剂注册管理办法》（试行）及《体外诊断试剂临床研究技术指导原则》、《北京市第二类体外诊断试剂临床试验指导原则》进行临床试验。执行的基本原则至少包括以下几个方面：（1）研究者应考虑临床研究用样本，如血液、羊水、胸水、腹水、组织液、胸积液、组织切片、骨髓等的获得或研究结果对受试者的风险性，应提交临床机构伦理委员会确认的文件及受试者的知情同意书。对于例外情况，如客观上不可能获得受试者的知情同意或该临床研究对受试者几乎没有风险，可不提交伦理委员会的审评意见及受试者的知情同意书，但临床研究者应提供有关伦理事宜的说明。（2）在两家省级医疗卫生单位完成临床研究，对于特殊使用目的的产品，可以在市级以上疾病控制中心、专科医院或检验检疫所、戒毒中心等单位开展临床研究。（3）新诊断试剂（盒）应与该诊断疾病的金标准针对临床样本进行盲法同步比较；已有同种批准上市的试剂（盒）应与已批准上市产品针对临床样本进行比对试验。（4）临床样本的要求：综合不同地区人种、流行病学背景、病原微生物的特性等因素选择研究单位，一般临床研究的总样本数至少为200例，新诊断试剂（盒）1000例。通常阴/阳样本比例应适当，不应过于悬殊。（5）试剂（盒）变更申请中需进行临床研究的方法：采用变更前试剂（盒）与变更后试剂（盒）进行比对试验的方法，证明变更前后试剂（盒）达到变更前试剂(盒）的质量水平。（6）一致性的数据分析：阳性、阴性和总符合率；适用时与金标准结果比对敏感度、特异度等。参照《北京市第二类