胚胎质量评估

胚胎质量评估胚胎质量是妊娠成功的关键因素之一，胚胎的发育潜能，即胚胎质量的评估直接影响移植胚胎的筛选和妊娠结局。评估胚胎质量的方法：传统的形态学评估动态观测技术胚胎“组学”评估目前，胚胎质量的评估以传统形态学方法为主，即根据胚胎受精与分裂的规律，在几个特定的时间点，观察胚胎形态，以形态学为标准对胚胎质量进行评估和分级，选择级别最高的胚胎进行移植。一、传统的形态学评估1、原核评分：一般IVF或ICSI后16-18小时观察原核，主要围绕原核及核仁大小、数目和分布情况评估。Scott-Z的评价标准，将原核分成Z1、Z2、Z3和Z4四类。Z1：雌雄原核中核仁数量相等且同时都极化。Z2：雌雄原核中核仁数量相等但同时散在分布Z3：雌雄原核中有相同的核仁数量但一个原核中为极化分布而另一个中为散在分布或者两原核中核仁数量和/或大小不等（数量不等＞1）或核仁过大或过小。Z4：雌雄原核没有连接或大小不等或没有位于合子的中心。z1、z2级原核通常会发育为较优质的胚胎，可获得较高的妊娠率；Z3、Z4级原核发育的胚胎通常发育潜力潜力低下，染色体异常几率增加。在原核的发育过程中，核仁的分布和排列并不是固定的，所以原核期合子形态的评估应与胚胎形态评估联合应用。2、卵裂期胚胎形态的评估包括卵裂速度、卵裂球的大小、形状、一致性、胞浆碎片比例。D2胚胎：细胞数4-6＞6或3210分数43210碎片0%＜10%10-25%26-50%＞50%分数43210卵裂球对称或稍不对称很不对称分数10D3胚胎：细胞数8-10＞10或6-74-52-31分数43210碎片0%＜10%10-25%26-50%＞50%分数43210卵裂球对称或稍不对称很不对称分数10WIH评分：胚胎分数=细胞数评分+碎片评分+对称评分每一个胚胎按其细胞数、碎片程度、对称性记录-C-F-S-，如8CF4S1代表其为8细胞胚胎，碎片评分4分，对称性评分1分。D3胚胎中，8CF4S1为优质细胞胚胎，5CF0S0为一多碎片不对称5细胞胚胎。胚胎分级评分法Ⅰ级：胚胎卵裂球呈圆/卵圆形，大小均匀，形态规则，胞质均匀清晰，透明带完整，无碎片或碎片少于5%。Ⅱ级：卵裂球形态不规则，大小略不规则，胞质可有颗粒现象，碎片10%～20%。Ⅲ级：卵裂球大小明显不均，可有明显的形态不规则，胞质可有颗粒现象，碎片21%～50%，透明带完整。Ⅳ级：卵裂球大小严重不均，胞质可有严重颗粒现象，碎片多于50%；或24小时无细胞分裂。注：I、II、III级胚胎在发育中如果出现以下情况，胚胎评级时在形态学基础上降一级：a、授精后20小时内未见到原核，48小时证实为延迟受精的胚胎。b、取卵后48小时超过8细胞，或72小时未超过5细胞各实验室培养体系、操作方法等不同导致胚胎的发育速度不一致，应参照ESHRE发布Istanbul共识（2011）找出符合各自中心最佳观测点。胚胎观察时间点设置（引自Istanbul共识）观察点观察时间（/小时，受精后）期望值受精17±1原核形成合子23±11细胞发生率50%2细胞发生率20%早卵裂26±1（ICSI）28±1（IVF）2-细胞D2胚胎评估44±14-细胞D3胚胎评估68±18-细胞D4胚胎评估92±2桑葚胚D4胚胎评估116±1囊胚分级评级胚胎形态学特征1好10%碎片细胞大小均匀，与期别相符无多核2中10%-25%碎片大多数细胞大小均匀，与期别相符无多核3差大量碎片（25%）细胞大小与期别不相符有多核现象胚胎的形态学评级（引自Istanbul共识）3、囊胚评估（Gardner标准）主要从囊胚的扩张状态、内细胞团和滋养细胞的发育进行评估首先根据囊胚的扩张和孵出状态分为1-6级：1级：早期囊胚，囊胚腔小于胚胎体积的一半2级：囊胚，囊胚腔大于或等于胚胎体积的一半3级：完全囊胚，囊胚腔充满整个胚胎4级：扩张囊胚，囊胚大于整个胚胎5级：正孵出的囊胚，滋养细胞开始从透明带突出6级：已孵出的囊胚，囊胚完全从透明带孵出然后对3-6级的囊胚进一步评价内细胞团（ICM）和滋养细胞的发育：ICM评分：A：很多细胞，包裹紧密B：少数细胞，疏松结合C：很少细胞滋养层评分：A：很多细胞形成连续上皮B：少数细胞形成疏松上皮C：很少细胞根据这个分级方法，第5天最好的囊胚评分应该是4AA传统的胚胎形态学评分方法，需要将胚胎从培养箱中取出进行观察，这样会因为培养环境改变而不利于胚胎发育。胚胎学动态观察技术可在保证胚胎稳定发育的生长环境下，对胚胎进行全程观测，可以为胚胎学家提供更多胚胎发育过程形态学及动力学信息，减少胚胎评估的主观性。二、动态观测技术获取胚胎发育客观数据，支持准确优选最佳胚胎时差胚胎成像系统（time-lapse）局限性：时差胚胎成像系统价格昂贵，单次观察的标本数量有限等缺点，限制该技术的推广应用。是否可以提高妊娠结局并常规应用与临床尚存争议，需要大量前瞻性研究来证明其有效性基因组学蛋白质组学转录组学代谢组学三、胚胎“组学”评估1、代谢组学通过检测胚胎代谢产物来评估胚胎发育潜能，因具有非侵人性、低风险等优点而成为目前研究热点。胚胎代谢组学评分方法的相关技术平台尚未完全建立，仅有限的几种代谢物可以进行检测并作为评估胚胎发育的指标。只有当多种代谢物可以同时进行检测并全面反应胚胎代谢组学图谱的时候，胚胎代谢组学评分方法的预测价值才能完全体现。2、基因组学胚胎染色体的异常是影响胚胎发育潜能的重要因素。随着分子生物学技术和PGD的发展，囊胚或极体活检结合胚胎全染色体分析的PGS（pre-implantationgeneticscreening）技术开始应用于临床，为诊断单基因疾病提供了有效检测手段，可提高单基因病和染色体异常患者的临床妊娠率和降低自然流产率。随着新一代高通量测序（nextgenerationsequencing，NGS)）技术的出现及其检测费用降低，可实现胚胎的全基因组扩增与测序。NGS技术可以更准确、有效地检测胚胎染色体异常。一旦渡过科研与临床转化阶段，NGS技术将在PGD／PGS技术临床应用中具有广泛的前景。胚胎形态学评分系统仍是应用最广泛的评分方法，其他评估系统已经有所发展，这些方法为胚胎发育潜能评分方法提供了新的方向，将来可能会有一个或多个新兴指标与胚胎形态学评分方法相结合，为早期胚胎发育潜能，即胚胎质量评估方法提供新标准，从而有效地改善ART的临床结局。谢谢！