免疫实验诊断-PPT课件

免疫学实验诊断.临床免疫学检查及意义免疫学检查由于具有特异性和敏感性，在实验诊断中应用越来越广泛。常应用于体液免疫、细胞免疫、感染免疫、肿瘤免疫、变态反应、移植免疫等相关疾病诊断和预后观察。免疫学检查意义：应用免疫学理论和技术研究疾病的病因、发生、发展和转归，帮助疾病诊断和预防治疗。AntigenB-lymphocytephagocyteT-lymphocytePrimedTLcytokinePlasmacellantibodyTmemorycellBmemorycellReviewimmuneresponseNKcomplementTumormarker其它做免疫学检查思考点特异性、灵敏性性别、年龄检测物质性质地域性时效性免疫抑制剂等药物影响介绍常用免疫学检测方法凝集沉淀试验流式细胞技术ELISA发光物标记技术生物芯片技术快速金标技术免疫印迹PCR第一节：免疫球蛋白检测免疫球蛋白合成、分泌及特性：合成分泌特性IgG脾和淋巴结中浆细胞抗细菌、抗病毒、抗毒素可通过胎盘、可被动免疫IgA肠系淋巴组织中浆细胞抗细菌、抗病毒、抗毒素，尤其分泌型在消化道、呼吸道等管腔抗感染IgM脾和淋巴结中浆细胞感染后最早出现，杀菌、溶菌、溶血、凝集作用明显IgE粘膜固有层中浆细胞分泌参与I型变态反应IgGIgAIgMIgE特性主要特性生理变化IgG占总Ig70-80%，能通过胎盘，次级免疫应答孕期含量与母体基本相同，出生3-4月最低，16岁前达成人水平IgA分为血清和分泌型，血清型占总Ig10-15%，SIgA与局部抗感染相关新生儿含量很低，16岁前达成人水平IgM初级免疫应答，可以五聚体形式存在，占总Ig5-10%20周起合成，新生儿为成人10%，8-10岁达成人水平IgE血清中含量最低Ig，占总Ig0.002%新生儿含量极低，12岁前达成人水平IgGIgAIgMIgE病理变化增高降低IgG慢性感染、慢性肝炎、肝硬化、淋巴瘤、和某些自身免疫性疾病（如SLE)，免疫增殖疾病（如MM）先天免疫缺陷，获得性免疫缺陷（如肾病综合征，营养不良，甲亢），使用免疫抑制剂，重链和轻链病等IgA慢性感染、慢性肝炎、肝硬化、淋巴瘤、和某些自身免疫性疾病（如SLE)，免疫增殖疾病（如MM），肾病IgA降低见于呼吸道反复感染者，先天免疫缺陷，获得性免疫缺陷（如肾病综合征，营养不良，甲亢），重链和轻链病等IgM同IgG外宫内感染可急剧增高基本同IgGIgE同IgG外过敏性疾病可明显增，寄生虫感染，间质性肺炎等，特异性IgE增高与过敏原相关基本同IgGIgG亚类检测IgG亚类分为4种，血液中含量IgG1IgG2IgG3IgG4，最高和最低可差10倍以上，亚类增高或减低通常与总IgG相关，但有些患者亚类异常，而总IgG正常或与亚类异常情况反相。IgG1缺失常见于免疫缺陷疾病，导致反复感染IgG2缺陷为IgG亚类缺陷中最常见者，且多见于儿童，可引起呼吸道反复感染IgG3缺陷见于成人反复性呼吸道感染IgG4缺陷与IgG2和IgA缺乏有关。IgG4水平升高见于异位性皮炎、哮喘和某些寄生虫疾病。M蛋白检测临床意义M蛋白或称单克隆免疫球蛋白，是由一种单克隆B细胞异常增殖时产生，一般不具抗体活性。阳性主要见于1.多发性骨髓瘤2.巨球蛋白血症3.重链病4.半分子病5.恶性淋巴瘤6.良性M蛋白血症蛋白电泳第二节：补体检测（complement）补体是主要由巨噬细胞分泌存在于新鲜血液中具有酶样活性的球蛋白，补体不耐热易降解，故补体检测须用新鲜血清。补体有C1-C9(经典途径）及BF、DF、PF（旁路途径）和补体调节因子组成。临床常作总补体活性（CH50）和单一因子C3、C4、BF及C1q检测。总补体溶血活性（CH50)检测增高急性感染、急性组织损伤、恶性肿瘤和风湿病早期，补体增高常与其它血浆蛋白改变相伴随。降低自身免疫性疾病SLE的活动期急性肾小球肾炎冷球蛋白血症等严重肝病变先天性缺乏SRBCAbSRBCc3、c4、c1q、B因子检测参与途径降低增高C3经典、旁路1）合成障碍2）消耗过多3）先天缺乏1）急性炎症2）急性组织损伤3）排异反应C4经典C1q经典B因子旁路第三节细胞免疫检查簇分化抗原CD（Clusterofdifferentiation）:细胞在发育分化过程中，细胞表面抗原物质发生变化，CD抗原即指细胞变化过程中不同时期产生的抗原。目前临床CD4（TH）与CD8（TS）检测应用广泛。簇分化抗原检测方法目前较多采用流式细胞仪技术进行分析，流式细胞免疫分析技术为特异抗体加标记技术加单细胞检测。特点：特异性、灵敏性高、检测精密度均较以前手工操作高很多。流式细胞仪检测简介淋巴细胞表面标志检测E玫瑰花形成实验TCSRBCSRBCSRBCSERT细胞表面标志检测CD3（总T细胞）、E玫瑰花试验检测临床意义增高：甲亢、淋巴细胞性甲状腺炎、重症肌无力、器官移植后排异反应减低：AIDS、胸腺发育不良、联合免疫缺陷、也可见于放疗和化疗及免疫抑制类药物治疗CD4、CD8检测临床意义CD4+增高：类风湿关节炎活动期，自身免疫疾病CD4+减低：AIDS等病毒感染、免疫抑制剂治疗、严重创伤、大手术等CD8+增高：传染性单核细胞增多症和巨细胞病毒感染急性期、慢性乙型肝炎CD8+降低：部分自身免疫性疾病、Ⅰ型糖尿病等B细胞表面标志检测B细胞表面抗原和表面受体检测临床意义表面抗原CD19、CD20、CD21、CD22CD19增高：B细胞系统恶性肿瘤CD19降低：体液免疫缺陷疾病CD21为EB病毒和CD3受体CD20在B细胞激活后逐步降低CD22在B细胞激活时逐步增高SmIgB细胞表面特异性标志SmIg增高：B细胞恶性增殖相关疾病，如慢淋、毛细胞白血病、巨球蛋白血症。SmIg降低：体液免疫缺陷相关疾病CD4/CD8测定临床意义CD4/CD8测定临床意义增高：多见于自身免疫性疾病，如类风关活动期、多发性硬化症、SLE、器官移植后排异反应、膜性肾小球肾炎等降低：AIDS、瘤型麻风病、恶性肿瘤发作期、传染性单核细胞增多症、巨细胞病毒感染急性期、血吸虫病等。淋巴细胞功能检测T淋巴细胞转化试验意义细胞生物学功能的体外试验，应用于免疫缺陷、增强、移植等。实验要求较高。转化率增高：Down氏综合症转化率降低：细胞免疫功能低下或缺陷相关疾病NK细胞活性测定意义NK细胞无需抗原刺激可直接杀伤靶细胞，可释放IFN-r、TNF-B和GM-CSF,在机体抗肿瘤和抗感染免疫中发挥重要作用增高：感染早期，器官移植干扰素等免疫增强剂治疗降低：恶性肿瘤，免疫缺陷疾病，使用免疫抑制剂。细胞因子检查细胞因子种类繁多，功能复杂，多种因子可具有相同功能，各种细胞因子间可互相作用，细胞因子功能同时受到细胞因子受体功能影响，因此在选择检测项目和结果分析时要综合考虑。细胞因子产生细胞靶细胞对靶细胞主要作用IL-2TLTLNKBL促进生长和细胞因子产生促进生长和活化生长及抗体合成IL-6MC、TL、内皮细胞TL&BL成熟BL肝脏辅助刺激济生长急性期反应物（纤维蛋白原）TNFMC、TLPMN内皮细胞丘脑下部肝脏肌肉脂肪TL&BL活化（炎症）活化（炎症、凝集）发热急性期反应物（血清淀粉样A蛋白）分解蛋白（恶病质）辅助刺激剂IFN纤维母细胞、MC所有NK抗病毒，抑制细胞增殖，加强MHC1类表达和活化肿瘤标志物的概念一般而言，TM是指存在于肿瘤细胞内或肿瘤细胞表达及脱落的物质，或是宿主对肿瘤反应而产生的物质。由于肿瘤发生、发展原因至今尚未完全解决，提示肿瘤的标志也并未完全明确，所以肿瘤标志物概念还有待补充和修正。Tumormarkersaresubstances,usuallyproteins,thatareproducedbythebodyinresponsetocancergrowthorbythecancertissueitself.Sometumormarkersarespecific,whileothersareseeninseveralcancertypes.Manyofthewell-knownmarkersarealsoseeninnon-cancerousconditions.Consequently,thesetumormarkersarenotdiagnosticforcancer.第四节：肿瘤标志物本质广义上肿瘤标志物是指与肿瘤发生、发展、消亡相关的各种物质。包含遗传物质（如致癌或抑癌基因）、病毒（如EBV-IgA与鼻咽癌)、酶（NSE)、激素（HCG)和临床应用广泛的一些肿瘤抗原（CEA、AFP)等。肿瘤细胞本身产生的肿瘤标志物常分为两类：1）当理化、病毒、遗传等因素引起正常细胞内基因突变而发生癌变时，癌变细胞内及表达在其表面的蛋白质等成份发生某种变化，形成肿瘤抗原，这种抗原可以表达在正常细胞，而肿瘤细胞表达高，也可因肿瘤导致组织结构变化，肿瘤抗原进入血液，如PSA；或仅在胚胎组织中表达，正常成人细胞中不表达，在发生肿瘤时又重新表达，如AFP、CEA。2）由肿瘤细胞产生的特殊抗原，这种抗原在性质上与正常细胞所表达的抗原不同。癌基因的发现证明正常细胞有癌基因存在，只是处于不表达状态，其一旦被激活，就失去正常调控，使细胞发生癌变。而由于癌基因表达产物与肿瘤抗原的关系至今未完全清楚，所以目前未发现很特异的肿瘤抗原（基因理论和动物实验得到证实）。肿瘤标志物的分类血清胚胎抗原肿瘤相关糖脂及糖蛋白激素肽、酶、蛋白等瘤标志物目前有100多种。尚未有统一全面的分类标准。常分为血清/血浆肿瘤标志物和组织肿瘤标志物。组织分化标志转移潜在性标志癌基因及抑癌基因增殖标志理想肿瘤标志物的要求TM特性要求与临床意义灵敏含量与肿瘤病情相符部位特异肿瘤特异早发现早诊断判断复发区分良性与恶性鉴定肿瘤类型器官部位特异病程和治疗观察TM检测临床意义辅助临床早发现、早诊断帮助区分区分良性与恶性肿瘤协助临床肿瘤类型鉴定及肿瘤部位鉴别帮助临床对肿瘤病程判断治疗效果观察，提前判断复发几种肿瘤标志物检测意义标志物性质相对特异肿瘤其它肿瘤其它疾病AFP甲胎蛋白胚胎类糖蛋白原发性肝细胞癌睾丸癌、畸胎瘤肝炎、肝硬化等CEA癌胚抗原胚胎类糖蛋白直肠癌、结肠癌、胃癌、胰腺癌乳腺癌、肺癌等肠道息肉、炎症，肝、肺等炎症PSA前列腺额特异抗原具有酶样活性蛋白前列腺癌肾癌、膀胱癌前列腺肥大和炎症、泌尿生殖系统疾病CA15-3糖蛋白乳腺癌肺癌、肾癌等肝、肠等非肿瘤疾病CA125糖蛋白卵巢癌乳腺癌、胰腺癌等卵巢囊肿、肝炎等CA199糖蛋白胰腺癌胃癌、结肠癌等急性胰腺炎、肝硬化等几种肿瘤标志物检测意义标志物性质相对特异肿瘤其它肿瘤其它疾病CA72-4糖蛋白胃癌结肠癌、卵巢癌SCC糖蛋白鳞状上皮细胞癌抗原胚胎类糖蛋白子宫颈癌肺癌、鼻咽癌肝炎、结核TPA组织多肽抗原胚胎类糖蛋白支气管癌膀胱癌肝炎PAP前列腺酸性磷酸酶酶前列腺癌前列腺肥大或炎症NSE神经元特异性烯醇化酶酶小细胞肺癌其他非小细胞肺癌、神经内分泌肿瘤等血小板和红细胞中存在肿瘤标志物的选择建议TM肝癌①AFP②CEA③CA19-9④AFU⑤SF胰腺癌①CA19-9②CA242③CA50④CA125⑤CEA胃癌①CEA②CA19-9③CA72-4④PG⑤CA242⑥结直肠癌①CEA②CA19-9③CA72-4④CA242⑤TPS肺癌①NSE②CEA③CYFRA21-1④TPS乳腺癌①CEA②CA15-3③Her-2/neu④TPS女性生殖系统肿瘤①宫颈癌HPV,SCC②卵巢癌CA125③生殖细胞癌HCG前列腺癌①PSA②PSM③PACP恶性淋巴瘤①LDH②β2-MG③CA125④TNFα脑胶质瘤①NSE②BEHAB③GFAP④VEGF鼻咽癌①VCA-IgA②EA-IgA③SCC④TPS骨转移肿瘤①骨吸收指标②骨形成指标同一肿瘤多种肿瘤标志物选择1000255075100灵敏度%假阳性率（1-特异度）%AFP检测CEA检测0255075无意义试验ROC曲线人类具有完善的免疫系统，正常情况下，免疫