黄连中小檗碱的提取

黄连中小檗碱的提取、精制、鉴定及含量测定黄连为毛茛科黄连属植物黄连（coptischinensisEraneh）、三角叶黄连（coptisdeltoidcaC．YchengetHsiao）或云连（coptiteetoidesC.Y.cheng）的干燥根茎。黄连具有清热燥湿、清心除烦，泻火解毒的功效。黄连的有效成分主要是生物碱，已分离出的主要生物碱有小檗碱（berberine）、掌叶防己碱（palmatine）、黄连碱（jatrorrhizine）等。其中小檗碱含量最高，可达10%左右，是以盐酸盐的状态存在于黄连中。小檗碱有很强的抗菌作用，已广泛地应用于临床，掌叶防己碱也作药用，其抗菌性能和小檗碱相似。一、目的要求1、从黄连中提取小檗碱的原理和方法，以及小檗碱精制方法。2、学习渗漉法提取天然产物的方法。3、熟悉握小檗碱的化学性质和鉴定方法。二、实验原理小檗碱为黄色针状结晶，mp为145℃，游离的小檗碱能缓缓溶于水（1：20）及乙醇中（1：100），易溶于热水及热醇，难溶于乙醚，石油醚、苯、三氯甲烷等有机溶剂，其盐在水中溶解度很小，尤其是盐酸盐。盐酸盐为l：500，枸橼酸盐1：125，酸性硫酸盐1：100，硫酸盐l：30，但在热水中都比较容易溶解。小檗碱常以季铵碱形式存在，碱性强（pka11.53），能溶于水中，其水溶液有三种互变形式。季铵式（红棕色）醇式（黄色）醛式（黄色）小檗碱（黄连素）掌叶防己碱又称巴马亭，为黄色结晶，溶于水、乙醇、几乎不溶于三氯甲烷、乙醚等有机溶剂。盐酸掌叶防已碱为黄色针状结晶，并有强烈的黄色荧光。易溶于热水或热乙醇，在冷水中的溶解度也比盐酸小檗碱大。掌叶防己碱本实验是利用小檗碱属于季铵碱，其游离型在水中的溶解度最大。而它们的盐类以含氧酸盐在水中溶解度较大，不含氧酸盐难溶于水，其盐酸盐在水中溶解度则更小。利用此性质结合盐析法，可从黄连中提取小檗碱。再利用两种生物碱极性不同，采用柱色谱分离。三、仪器与试剂1、试剂：黄连粗粉50g，2%硫酸溶液，苯，乙酸乙酯，甲醇，异丙醇，氨水，饱和石灰水，氯化钠。2、仪器：粉碎机，渗漉筒，烧杯，硅胶G-CMA-Na薄层板，真空干燥箱。四、实验步骤：1、提取分离黄连粗粉50g加0.3％H2SO4500ml（超过药材0.2cm），浸渍20分钟，装入渗漉筒，30分钟，滤过药渣滤液加石灰乳调PH值至中性放置10分钟，抽滤滤液加HCl调PH2～3，加滤液体积10％的NaCl，放置过夜，抽滤盐酸小檗碱粗品2、精制盐酸小檗碱粗品加饱和石灰水，趁热过滤滤液加盐酸调ph至1-2，冷却。放置，析晶析出大量黄色沉淀常压过滤沉淀蒸馏水洗结晶，过滤，三次沉淀80℃以下干燥1小时称重，计算提取率（精制的盐酸小檗碱）3、鉴定检识实验（1）取自制精制盐酸小檗碱0.05g溶于50ml热水中，加入10%NaOH溶液2ml，混合均匀后，于水浴上加热至50℃，加入丙酮5ml，放置，即有柠檬色丙酮小檗碱结晶析出。抽滤，水洗后，干燥，测mp。（2）取自制精制盐酸小檗碱少许，加稀盐酸2ml待溶解后，加漂白粉少许，即显樱红色。（3）取自制精制盐酸小檗碱少许，加水1ml待溶解后，加浓硝酸1~2滴，即产生绿色硝酸小檗碱沉淀。（4）取自制精制盐酸小檗碱少许，加水1ml待溶解后，加锌粉少许，再分数次加入浓硫酸数滴，每隔10min加1次，观察其黄色是否消退。薄层色谱检识吸附剂：硅胶G-CMC-Na薄层板对照品：盐酸小檗碱甲醇溶液样品：不同色带的甲醇溶液展开剂：CHCl3-MeOH-冰醋酸（7：1：2）检视：先在紫外灯光（365nm）下观察荧光，再喷改良碘化铋钾试剂。记录图谱并计算Rf值五、注意事项1.渗漉速度不可太快；2.精制时加饱和石灰水后要趁热过滤。六、思考题1、提取分离过程中加NaCl起什么作用？2、根据盐酸小檗碱的性质，还可以用其他方法进行提取与分离？3、小檗碱属于哪一类生物碱，可以用盐酸水溶液提取吗？