上海生物样本库-最佳实践规范及标准操作流程-文件汇编

最佳实践规范及标准操作流程文件汇编V2.01上海生物样本库最佳实践规范及标准操作流程文件汇编（第二版）2010年5月最佳实践规范及标准操作流程文件汇编V2.011上海生物样本库质量管理体系文件文件名称血液样本采集操作规程编号SOP-SC-008-01批准人批准日期实施日期血液样本采集操作规程1.目的规范组织样本库采集人体血液样本的活动。2.适用范围本规程适用于使用真空采血管采血法采集人体血液样本的活动过程。3.定义和术语3.1知情同意保证被收集者了解并理解研究的目的和内容，并自愿同意参加试验的原则。知情同意具有国际性，是对所有进行人体研究或人体取样调查的研究人员的伦理要求。在以人为研究/试验对象的科研领域，收集者必须获得研究对象/参与者的知情同意，保护被收集者合法权益的同时保护收集者免于诉讼。3.2知情同意书知情同意书，是每位被收集者表示自愿参加某一项试验而签署的文件。知情同意的具体体现是知情同意书的签署。知情同意书由收集者和被收集者共同签署，一式两份。正本由收集者保存，被收集者保存副本。3.3真空采血管采血法将有头盖胶塞的采血试管预先抽成不同的真空度，利用其负压自动定量采集静脉血样。3.4血清和血凝块指在凝血过程中，血浆中的纤维蛋白原转变为不溶的血纤维。血纤维交织成网，将很多血细胞网罗在内，形成血凝块。血液凝固后，血凝块又发生回缩，并释放出淡黄色液体，称为血清，其中已无纤维蛋白原。3.5血浆最佳实践规范及标准操作流程文件汇编V2.012血浆是离开血管的全血经抗凝处理后，通过离心沉淀，所获得的不含细胞成分的液体，其中含有纤维蛋白原。3.6白细胞白细胞是血液中的一类细胞，人体血液及组织中的无色细胞，有细胞核。根据形态特征可分为粒细胞、淋巴细胞核单核细胞。3.7枸橼酸钠(柠檬酸钠)枸橼酸能与血液中的钙离子结合形成螯合物，从而阻止血液凝固。3.8乙二胺四乙酸二钾（EDTA·K2）抗凝机制与枸橼酸钠相同。用EDTA·K21.5-2.2mg可阻止1ml血液凝固。3.9肝素一种含有硫酸基团的黏多糖，相对分子质量为15000，与抗凝血酶Ⅲ结合，促进其对凝血因子和凝血酶活性的抑制，抑制血小板聚集从而达到抗凝。4.职责4.1临床护理人员按照标准操作规程采集血液。4.2样本管理员样本管理员由专业的病理医（技）师或受过专业培训的医技人员担任，协助和进行样本采集处理的工作，记录样本采集处理的过程。工作过程中不应影响正常的诊断和治疗活动。5.设备和器材5.1个人防护装备手套、口罩、实验防护服、护目镜及其它相关防护装备。5.2设备血液样本运输箱。5.3采血针系统软接式双向采血针系统(头皮静脉双向来血式)，一端为穿刺针，另一端为刺塞针。5.4真空采血管血液样本搜集推荐使用一次性真空采血器，采血器应遵照国家WS/T最佳实践规范及标准操作流程文件汇编V2.013224-2002技术规范。准备非抗凝管和抗凝管各一管，共两管：分别是5ml非抗凝管，和5ml抗凝管。常用彩色真空采血容器用途如下，具体操作时可以根据样本的用途来选择非抗凝管和抗凝管。用途盖子颜色促/抗凝剂使用要求红色无凝块形成约需30min金黄色分离胶/凝块激活剂需颠倒混匀5次，使血液与激活剂充分接触。凝块完全形成后离心分离血清橘黄色凝血酶需颠倒混匀8次淡蓝色枸橼酸钠须颠倒混匀，血液与抗凝剂比例为9：1绿色肝素钠、肝素锂等根据实验需要，选择不同类型肝素分离血浆紫色EDTA需颠倒混匀6-8次表1常用彩色真空采血管的用途5.5试剂30g/L碘酊、75%医用酒精。6.主要流程6.1知情同意6.1.1样本的捐赠者应在手术前签订《知情同意书》，该《知情同意书》签署时应有第三人在场，确保签字的真实，确信病人已经了解知情同意的内容。6.1.2知情同意书应贴上事先准备好的条形码标签（标签的编码规则见《条码标签设定使用规范》）并在《血液样本采集纪录表》中记录该条码标签的编号。6.2器材和标签准备6.2.1样本管理员应在采血前根据《知情同意书》的编码，通过样本信息管理系统自动分配打印初始条形码标签和《血液样本采集纪录表》。标签的规则见《条码标签设定使用规范》。6.2.2样本管理员应在采血前准备血液样本运输箱，采血针系统，以及贴有初始条形码标签的非抗凝和抗凝的真空采血管。6.3血液采集6.3.1选择静脉：捐赠者取坐位，前臂水平伸直置于桌面枕垫上，选择容易固定、明显可见的肘前静脉或手背静脉，幼儿可用颈外静脉采血。最佳实践规范及标准操作流程文件汇编V2.0146.3.2消毒：用30g/L碘町自所选静脉穿刺处从内向外、顺时针方向消毒皮肤，待碘町挥发后，再用75%乙醇以同样方式脱腆，待干。6.3.3采血:拔除采血穿剌针的护套，以左手固定捐赠者前臂，右手拇指和食指持穿刺针，沿静脉走向使针头与皮肤成30°角，快速刺入皮肤，然后成5°角向前刺破静脉壁进入静脉腔，见回血后将刺塞针端(用橡胶管套上的)直接刺穿入非抗凝真空采血管盖中央的胶塞中，血液自动流入试管内，收集5ml左右的全血后，将刺塞端拔出，刺入抗凝真空采血管再收集5ml左右的全血。达到采血量后，松压脉带，嘱捐赠者松拳，拔下刺塞端的采血试管。将消毒干棉球压住穿刺孔，立即拔除穿刺针，嘱捐赠者继续按压针孔数分钟。6.3.4样本管理员立即按照5.4表1的使用要求对不同真空采血管进行处理。6.3.5条件允许的情况下应立即进行血液成份的分离。参见《血浆样本分离操作规程》、《白细胞样本Ficoll分离操作规程》、《血清样本分离操作规程》和《血凝块样本分离操作规程》。如需转运后再分离，应使用血液样本运输箱低温运送。6.3.6样本管理员在《血液样本采集纪录表》中记录非抗凝和抗凝的真空管中血液状态的简单描述、以及样本采集和分离的时间。6.4数据录入6.4.1样本管理员在采集处理工作结束后将《血液样本采集纪录表》所记录的信息输入样本信息管理系统中。6.4.2填写完的《血液样本采集纪录表》应归档保存。6.5注意事项6.5.1容器不洁净、接触水、强力震荡、操作不慎等可引起溶血，应避免。6.5.2使用真空采血器前应仔细阅读厂家说明书，严格按说明书要求操作，血液采集应使用一次性的针头和针管，防止交叉污染和感染。6.5.4刺塞针端的乳胶套能防止拔除采血试管后继续流血污染周围，达到封闭采血防止污染环境的作用，因此不可取下乳胶套。6.5.5使用前不要松动一次性真空采血试管盖塞，以防采血量不准。6.5.6血液采集的过程应迅速准确，减少捐赠者的痛苦。用作样本库保存的血液最好和常规化验一起抽取，以减少捐赠者的不适。最佳实践规范及标准操作流程文件汇编V2.0156.5.7尽量选粗大的静脉进行穿刺。6.5.8止血带结扎时间应该小于1分钟，如超过2分钟，大静脉血流受阻而使得毛细管内压增高，分子质量小于5000的物质逸入组织液，或缺氧引起血液成分的变化。这种情况下的血液不应该采集。7.相关文件《样本采集控制程序》SOP-SC-001-01《血浆样本分离操作规程》SOP-SC-009-01《白细胞样本分离操作规程》SOP-SC-011-01《血清样本分离操作规程》SOP-SC-012-01《血凝块样本分离操作规程》SOP-SC-013-01《血液样本储存操作规程》SOP-SC-016-01《条码标签设定使用规范》SOP-IT-001-01《样本信息管理系统用户手册V3.0》8.参考标准与文献BiorepositoryProtocols,AustralianBiospecimenNetwork,2007CommonMinimalTechnicalStandardsandProtocols,WHO全国临床检验操作规程第3版真空采血管及其添加剂WS/T224-2002最佳实践规范及标准操作流程文件汇编V2.0169.附件附件一:血液样本采集处理流程图：白细胞WhiteCells血清(0.5mlx5)Serum血凝块Grume不加抗凝剂(5ml)WithoutAnticoagulants血浆(0.5mlx5)Plasma加抗凝剂(5ml)Anticoagulants采血(10ml)Bloodcollection知情同意InformedConsent进一步处理FurtherProcess使用Use运输Transportation申请Application储存Storage