临床微生物学检验第五版第26章肝炎病毒

第26章肝炎病毒简介（1）•肝炎病毒（hepatitisvirus）：以侵害肝脏为主的一组病原体•病毒性肝炎感染率和发病率非常高•属于法定乙类传染病•五种：甲型、乙型、丙型、丁型和戊型肝炎病毒简介（2）•甲型肝炎病毒hepatitisAvirus,HAV•乙型肝炎病毒hepatitisBvirus,HBV•丙型肝炎病毒hepatitisCvirus,HCV•丁型肝炎病毒hepatitisDvirus,HDV•戊型肝炎病毒hepatitisEvirus,HEV传染源粪便血液/血源性物质/体液血液/血源性物质/体液血液/血源性物质/体液粪便传播途径粪-口经皮肤/经黏膜经皮肤/经黏膜经皮肤/经黏膜粪-口慢性感染否是是是否肝炎病毒类型ABCDE基因组类型ssRNAdsDNAssRNAssRNAssRNAHAV分类•Picornaviridae(小RNA病毒科)•Hepatovirus(肝RNA病毒属)HAV临床意义•粪-口途径传播•污染食物、水源、海产品及食具等•只有急性期，终身免疫•1988年上海HAV流行HAV生物学特性（1）HAV生物学特性（2）VPg：病毒基因组连接蛋白HAV生物学特性（3）•基因组–单股正链RNA–5′NCR－ORF－3′NCR组成–ORF分为P1、P2和P3三个功能区HAV实验诊断（1）－标本采集•免疫学检查：血清或血浆•HAV抗原检测：粪便•病毒颗粒观察–肝活检组织HAV实验诊断（2）－显微镜检查•粪便–直接电镜技术–免疫电镜技术–固相免疫电镜技术HAV实验诊断（3）－免疫学检测•抗体检测–IgM型：常用IgM抗体捕捉ELISA检测法–IgG型：双份血清，用于流行病学调查、既往感染或疫苗接种效果评价•抗原检测–ELISA夹心法–难以常规开展HAV实验诊断（4）•核酸检测–核酸分子杂交–逆转录PCR（RT－PCR）HAV实验诊断（5）－报告及解释•在判断急性、新近或者既往感染–病毒抗原或核酸–IgM型抗体–IgG型抗体HBV分类•Hepadnaviridae(肝DNA病毒科)•Hepadnavirus(正嗜肝病毒属)HBV临床意义•血源性传播–输血、注射、外科和牙科手术、针刺等•母婴垂直传播–宫内传播–分娩时微小皮损处传播–产后母婴密切接触•性传播急性乙肝感染的转归高发地区：以围产期和婴幼儿感染为主低发地区：以成人感染为主围产期感染痊愈~10%慢性化~90%婴幼儿感染痊愈20~50%慢性化50~80%成人感染痊愈95%慢性化5%HBV生物学特性（1）•大球形颗粒，Dane颗粒•小球形颗粒•管形颗粒HBV生物学特性（2）HBVvirionTheinfectiousvirioniscalledtheDANEparticleBothcomprisedofHBsAgHBV生物学特性（3）•不完全闭合环状双链DNA•S、C、P和X4个ORFs–S基因–C基因–P基因–X基因HBV生物学特性（4）基因分型（A-H型，共8型）–A型常见于欧洲、北美和非洲–B型和C型流行于亚洲–D型见于全世界–E型分布在非洲–F型见于南美和阿拉斯加–G型见于北美–H型存在于中美HBV实验诊断（1）－标本采集•免疫学检查：血清或血浆•核酸检测–血清最佳–抗凝剂？HBV实验诊断（2）－免疫学检测•HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc以及抗-HBcIgM•方法–ELISA(enzyme-linkedimmunosorbentassay，最常用，定性)–免疫层析法（胶体金或硒标法）–发光免疫分析(定量)–反相间接血凝试验(少用)HBV实验诊断（3）－ELISA•利用抗原和抗体特异性结合•方法–间接法:测定抗-HBs–夹心法：测定HBsAg和HBeAg–竞争法：测定抗-HBc和抗-HBeHBV实验诊断（4）－核酸检测•核酸杂交–探针•PCR–引物–TaqDNA聚合酶–dNTPDenaturation(940)Annealing(500-550)Extension(680-740)30cycles产物理论上=2nHBV实验诊断（5）－报告及解释HBsAg抗-HBsHBeAg抗-HBe抗-HBc临床意义急性或慢性感染(大三阳)+-+-++++乙肝后期或慢性感染(小三阳)--++---潜伏期或急性乙肝早期--+++乙肝康复,有免疫力------++-+乙肝康复,有免疫力疫苗接种或乙肝康复,有免疫力SymptomsHBeAganti-HBeTotalanti-HBcIgManti-HBcanti-HBsHBsAg0481216202428323652100AcuteHBVInfectionwithRecoveryTypicalSerologicCourseWeeksafterExposureTitreHDV分类和临床意义•Arenavirudae(沙粒病毒科)•Deltavirus(δ病毒属)•与HBV密切相关，属于缺陷病毒，其组装依赖HBsAg•传染途径：静脉吸毒、家庭密切接触、输血等•同步感染和重叠感染HDV生物学特性（1）•缺陷病毒HDV生物学特性（2）•基因组–单股负链RNA病毒–9个ORF，其中ORF5编码HDAgHDV实验诊断（1）－标本采集•免疫学检查：血清或血浆•核酸检测：血清最佳–抗凝剂？HDV实验诊断（2）－免疫学检测•HDV抗原–去垢剂处理去除HBsAg后–荧光免疫或ELISA检测•抗HDVIgM–采用捕捉法ELISA•抗HDV总抗体–采用竞争法检测HDV实验诊断（3）－核酸检测•RNA是病毒存在的直接证据•RT－PCR•核酸杂交法HDV实验诊断（4）－报告及解释•HDAg–主要见于急性丁型肝炎早期–在慢性HDV中，可呈波动性反复阳性•HDV抗体•HDVRNA：HDV存在及复制的指标HCV分类和临床意义•Flaviviridae(黄病毒科)•Hepacivirus(肝病毒属)•占输血后肝炎的80%~90%•传播途径：血液传播、性接触传播、母婴传播、家庭内接触传播等，但约半数途径不明•20多个基因型，Ⅰ~Ⅵ型常见–欧美各国流行者多为Ⅰ型–亚洲和我国流行者主要为Ⅱ型HCV生物学特性（1）•球形，由包膜、衣壳和核心组成HCV生物学特性（2）•单股正链RNA•一个ORF，9个基因区HCV实验诊断（1）－标本采集•免疫学检查：血清或血浆•核酸检测：血清最佳–抗凝剂？HCV实验诊断（2）－免疫学检测•筛选试验–ELISA法–以C22、C33和NS5区蛋白作为包被抗原•确认试验–RIBA(重组免疫印迹法)–主要用于ELISA初筛检测可疑者HCV实验诊断（3）－核酸检测•RNA是HCV感染的直接证据•RT-PCR•bDNAHCV实验诊断（4）－报告及解释•抗-HCV是非保护性抗体•抗-HCV阳性仅表明HCV感染•HCVRNA是HCV早期诊断最有效指标抗-HCV筛选、确认实验和HCVRNA检测结果的临床意义（1）筛选试验结果补充实验及结果报告临床意义阴性不适合抗-HCV阴性未感染过HCV阳性(高S/CO值)不做抗-HCV阳性既往或现症HCV感染阳性RIBA阳性抗-HCV阳性既往或现症HCV感染阳性RIBA阴性抗-HCV阴性未感染过HCV阳性RIBA不确定抗-HCV不确定抗HCV和感染状态不能确定；再查抗HCV（1个月）或做HCVRNA实验抗-HCV筛选、确认实验和HCVRNA检测结果的临床意义（2）筛选试验结果补充实验及结果报告临床意义阳性NAT阳性抗-HCV阳性HCVRNA阳性活动性HCV感染阳性RIBA阳性NAT阴性抗-HCV阳性HCVRNA阴性抗HCV指示既往或现症HCV感染；一次HCVRNA阴性不能排出活动性HCV感染阳性RIBA阴性NAT阴性抗-HCV阴性HCVRNA阴性未感染过HCV阳性RIBA不确定NAT阴性抗-HCV不确定HCVRNA阴性未感染过HCV，抗-HCV筛选结果可能是假阳性HEV分类和临床意义•Hepeviridae(肝炎病毒科)•Hepevirus(肝炎病毒属)•粪-口途径传播•污染食物、水源、海产品及食具等•只有急性期，终身免疫•1986~1988年新疆南部HEV流行HEV生物学特性（1）HEV生物学特性（2）•基因组–单股正链RNA病毒–3个ORFHEV实验诊断（1）－标本采集•免疫学检查：血清或血浆•核酸检测：血清最佳–抗凝剂？HEV实验诊断（2）－免疫学检测•抗体检测–IgM型：诊断的重要指标，常用IgM抗体捕捉ELISA检测法–IgG型：双份血清，用于流行病学调查、既往感染或疫苗接种效果评价HEV实验诊断（3）－核酸检测•RT-PCR检测–血清–胆汁–粪便•难以临床常规开展HEV实验诊断（4）－报告及解释•判断急性、新近或者既往感染–病毒抗原或核酸–IgM型抗体–IgG型抗体