临床微生物学检验第五版第9章不发酵革兰阴性杆菌

第9章不发酵革兰阴性杆菌不发酵革兰阴性杆菌概述•定义：一大群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧、无芽胞的革兰阴性杆菌；多为条件致病菌。鲍曼不动杆菌革兰染色不发酵革兰阴性杆菌•假单胞菌属(Pseudomonas)•产碱杆菌属(Alcaligenes)•不动杆菌属(Acinetobacter)•莫拉菌属(Moraxella)•无色杆菌属(Achromobacter)•金氏杆菌属(Kingella)•黄杆菌属(Flavobacterium)•艾肯菌属(Eikenella)•土壤杆菌属(Agrobacterium)•黄单胞菌属(Xanthomonas)•丛毛单胞菌属(Comamonas)常见不发酵革兰阴性杆菌的初步分群鉴定试验假单胞菌属无色杆菌属黄杆菌属不动杆菌属产碱杆菌属丛毛菌属莫拉菌属氧化酶+++/--+++/-O/F试验O/-OOO/----动力+/-+/-+/--++-注：+：90%以上阳性；-10%以下的阳性；+/-：约70%为阳性；O：为氧化。不发酵革兰阴性杆菌第一节假单胞菌属（Pseudomonas）•一、概述1．分类2．临床意义3．微生物检验(1)检验程序(2)鉴定(3)药物敏感性试验(AntibacterialSusceptibilityTest)假单胞菌属1．分类•假单菌属按rRNA同源性分群，现把马勒伯克霍尔德菌属，嗜麦芽窄食单胞菌属从假单胞菌属分出。•一群需氧、不发酵葡萄糖，•无芽胞，有鞭毛；•氧化酶阳性的革兰阴性杆菌；•多为条件致病菌。假单胞菌属2．临床意义•假单胞菌属分布广泛，人类不发酵菌感染中，假单胞菌占70％～80％，主要为铜绿假单胞菌。假单胞菌属3．微生物检验(1)检验程序(2)培养鉴定•革兰阴性、无芽胞、专性需氧。•有端鞭毛或丛鞭毛。•生长温度范围广，最适生长温度为35℃。•产生各种水溶性色素：绿脓素、脓玉红素、荧光素、脓褐素(3)药物敏感性试验按CLSI（ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute）推荐，分为4组：A、B、C、Ｄ／Ｕ。•致病机制粘附素：黏附结构成分多糖似荚膜物质毒素内毒素：LPS毒力因子外毒素：A阻止真核细胞蛋白质合成S干扰吞噬杀菌作用绿脓素：具有氧化还原活性，催化超氧化物和过氧化氢产生有毒基团酶类弹性蛋白酶:丝氨酸蛋白酶（Las-A）降解弹性锌金属蛋白酶（Las-B）蛋白磷脂酶C:分解脂质和卵磷脂，损伤组织细胞铜绿假单胞菌（P.aeruginosa)铜绿假单胞菌（P.aeruginosa)3．微生物检验（1）检验程序（2）显微镜涂片革兰阴性，长短不一，单鞭毛。铜绿假单胞菌革兰染色铜绿假单胞菌（P.aeruginosa)•血平板上毛玻璃样，金属光泽，生姜味•可产生多种色素•荧光素与绿脓素铜绿假单胞菌产荧光素铜绿假单胞菌（P.aeruginosa)铜绿假单胞菌产绿脓素铜绿假单胞菌（P.aeruginosa）（3）分离培养与鉴定：标本可接种于血琼脂平板培养基和选择性培养基，生长温度25℃～42℃。生化鉴定：氧化酶阳性、还原硝酸盐、分解尿素、精氨酸酶阳性。铜绿假单胞菌（P.aeruginosa)（4）抗原检测：血清学分型、噬菌体分型。（5）核酸检测：质粒指纹图分析、脉冲场凝胶电泳分析（PFGEpulsedfieldgelelectrophoresis）、基因芯片、PCR技术、16SrDNA分型鉴定技术。铜绿假单胞菌（P.aeruginosa)（６）检验结果分析与报告：诊断一定要与临床表现相结合。治疗过程中，3～4天后重复药敏测试。耐药机制：1.产酶金属酶，OXA酶。2.外膜蛋白的改变（Outermembraneproteins，OMP）为主要机制。3.主动泵出机制对喹诺酮类。MexA-MexB-OprM及MecC-MexD-Oprj4.整合子1类，3类。铜绿假单胞菌（P.aeruginosa)第二节伯克霍尔德菌属•属于rRNA第II群。•洋葱伯克霍尔德菌(Burkholderiacepacia)•马勒伯克霍尔德菌(Burkholderiamallei)•伪马勒伯克霍尔德菌(Burrkholderiapseudomeuei)克霍尔德菌属一、临床意义1．洋葱伯克霍尔德菌•医院感染的常见病原菌之一；•引起败血症、肺炎、伤口感染、脓肿等；•囊性纤维化和慢性肉芽肿患者呼吸道感染的机会致病菌。克霍尔德菌属一、临床意义2．马勒伯与伪马勒伯克霍尔德菌•鼻疽病与类鼻疽病的病原体；（肺鼻疽病、皮肤鼻疽病、内脏脓肿、菌血症、脓毒血症）。•人类感染是经伤口、黏膜、呼吸道。•急性患者可有高热、衰竭等全身症状。•为人兽共患病原菌；可能成为生物恐怖的细菌。伯克霍尔德菌属二、微生物检验1．显微镜涂片•革兰阴性杆菌•无芽胞、无荚膜。•洋葱伯克霍尔德菌革兰染色洋葱伯克霍尔德菌革兰染色伯克霍尔德菌二、微生物检验2．抗原检测•马勒伯克霍尔德菌与伪马勒伯克霍尔德菌荧光直接法染色镜检，可快速诊断。伯克霍尔德菌属二、微生物检验3．分离培养与鉴定•需氧菌；生长温度35℃。（血琼脂、麦康凯）•洋葱伯克霍尔德菌生长较缓慢；含铁培养基上可产生亮黄色色素•马勒鼻伯克霍尔德菌无鞭毛无动力，42℃不生长•伪马勒鼻伯克霍尔德菌一端有丛鞭毛(1~4根)，4℃不能生长•生化鉴定第三节嗜麦芽窄食单胞菌•一、分类•属于假单胞菌科的rRNA同源群Ⅴ。•嗜麦芽窄食单胞菌（S.maltophilia）和S.africana。嗜麦芽窄食单胞菌二、临床意义•为条件致病菌。•呼吸道、泌尿道、伤口等部位感染，菌血症及心内膜炎。•在不发酵菌引起的感染中，仅次于铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌，居临床分离阳性率的第三位。嗜麦芽窄食单胞菌三、微生物检验1．显微镜涂片•革兰阴性，端鞭毛，(1~8)根，•有动力、无芽孢、无荚膜。嗜麦芽窄食单胞菌革兰染色嗜麦芽窄食单胞菌三、微生物检验2．分离培养与鉴定（１）分离培养：•生长温度为35℃，4℃不长，•血琼脂、普通培养基。•菌落中等大小、圆形、光滑、湿润、产生不溶血的黄色色素。嗜麦芽窄食单胞菌麦康凯培养基菌落嗜麦芽窄食单胞菌三、微生物检验2．分离培养与鉴定（２）生化鉴定•氧化酶阴性；•液化明胶、水解七叶苷；•赖氨酸脱羧酶阳性。氧化分解麦芽糖。嗜麦芽窄食单胞菌四、药物敏感试验及结果解释•治疗首选磺胺类：TMP/SMZ；喹锘酮类：环丙氟派酸或替卡西林/棒酸。•泰能(Imipenem)天然耐药。•药敏试验纸片法仅有三种抗生素：左氧氟沙星、米诺环素、复方磺胺有折点。其他药敏试验应选用肉汤、琼脂稀释法作MIC，或采用E-TEST的方法。第四节不动杆菌属一、分类•醋酸钙不动杆菌(A.calcoaceticus)•洛菲不动杆菌(A.lwoffi)•溶血不动杆菌(A.haemolgticus)•鲍曼不动杆菌(A.baumannii)•琼氏不动杆菌(A.junii)•约翰逊不动杆菌(A.johnsonii)不动杆菌属二、临床意义•为条件致病菌•在不发酵菌的感染中仅次于假单胞菌，近年呈上升趋势。不动杆菌属三、微生物检验1．检验程序2．显微镜涂片•革兰阴性杆菌，多为球杆状，常见成对排列•无芽胞，无鞭毛•鲍曼不动杆菌革兰染色鲍曼不动杆菌革兰染色不动杆菌属四、微生物检验2．分离培养与鉴定•专性需氧菌•生长温度为35℃•普通培养基，麦康凯、血平板均生长•氧化酶阴性，动力阴性，硝酸盐试验阴性不动杆菌属四、微生物检验•鲍曼不动杆菌菌落•在血琼脂培养基可形成圆形、灰白色、光滑、边缘整齐、直径2~3mm的菌落•洛菲不动杆菌菌落•小，直径为1~1.5mm鲍曼不动杆菌麦康凯培养基菌落不动杆菌属五、药物敏感试验及结果解释•Kirby-Bauer法做药敏试验，药物的选择与假单胞菌抗生素的分组相同。•鲍曼氏不动杆菌，对全部氨基青霉素、一代二代头孢菌素和一代喹诺酮类抗生素天然耐药。第五节产碱杆菌属一、分类•粪产碱杆菌(A.faecalis)•皮乔特产碱杆菌(A.Piechaudii)•粪产碱杆菌亚型(A.faecalistypeⅡ)•木糖氧化产碱杆菌(A.xylosoxidans)•脱硝亚种(Subsp.denitrificans)•木糖氧化亚种(Subspxylosoxidans)产碱杆菌属二、临床意义•人体的正常菌群•医院感染的病原菌之一产碱杆菌属三、微生物检验1．显微镜涂片•革兰氏阴性杆菌•周鞭毛、有动力粪产碱杆菌革兰染色产碱杆菌属三、微生物检验2．分离培养与鉴定•最适生长温度为25℃~35℃，•普通培养基上生长粪产碱杆菌麦康凯培养基菌落产碱杆菌属三、微生物检验•pH至8.6为本菌特点•氧化酶阳性•触酶阳性•不分解任何糖类•O-F基础培养呈碱性•脲素酶阴性•不液化明胶粪产碱杆菌O-F基础培养呈碱性第六节黄杆菌属一、分类•短黄杆菌(F.breve)•脑膜炎败血性黄杆菌(F.meningospticum)•芳香黄杆菌(F.odoratum)•水田黄杆菌(F.mizutaii)•嗜糖黄杆菌(F.multrivorum)•嗜醇黄杆菌(F.spiritivorum)•嗜温黄杆菌(F.thalpophilum)•薮内黄杆菌(F.gaduuchiae)•Ⅱb群黄杆菌(F.groupⅡb)•Ⅱe群黄杆菌(F.groupⅡe)•Ⅱh群黄杆菌(F.groupⅡh)•Ⅱi群黄杆菌(F.groupⅡi)黄杆菌属二、临床意义•是条件致病菌•医院感染的常见菌之一•引起败血症、新生儿及婴幼儿的化脓性脑膜炎黄杆菌属三、微生物检验1．显微镜涂片•革兰阴性杆菌•无鞭毛、无动力、无荚膜、无芽胞脑膜炎败血性黄杆菌革兰染色黄杆菌属三、微生物检验2．分离培养与鉴定•需氧代谢•氧化酶、触酶、磷酸酶阳性脑膜炎败血性黄杆菌菌落黄杆菌属三、微生物检验2．分离培养与鉴定•血琼脂培养基•生长温度为35℃•菌落：光滑、有光泽、边缘整齐，淡黄色，也有的呈黄色或棕黄色脑膜炎败血性黄杆菌血培养菌落黄杆菌属四、药物敏感试验及结果解释•临床经验用药可选磺胺及大环内脂类的红霉素。•临床上常见的脑膜炎败血黄杆菌及芳香黄杆菌等对广谱抗菌药有耐药性，所以最好根据药敏试验选择用药。第七节莫拉菌属一、分类•莫拉菌属(Moraxella)属莫拉菌科（Moraxellaceae）•医学上重要的莫拉菌有：–腔隙莫拉菌（M.lacunata）–卡他莫拉菌（M.catarrhalis）–非液化莫拉菌(M.nonliquefaciens)–奥斯陆莫拉菌(M.osloensis)–亚特兰大莫拉菌(M.atlantae)–狗莫拉菌(M.canis)–林肯莫拉菌(M.lincolnii)莫拉菌属二、临床意义•引起眼结膜炎、气管炎、肺炎、脑膜炎、脑脓肿、心包炎、心内膜炎及泌尿生殖系统炎症。莫拉菌属三、微生物检验1.显微镜涂片•革兰阴性球杆菌，•呈双短链状排列，具有多形性。非液化莫拉菌革兰染色莫拉菌属三、微生物检验•2.分离培养与鉴定•营养要求较高。•生长温度32℃~35℃。•血琼脂平板上生长良好。•针尖大小的圆形凸起、光滑、半透明、边缘整齐不溶血的菌落。非液化莫拉菌血培养菌落莫拉菌属三、微生物检验•2.分离培养与鉴定•鉴定•氧化酶阳性•触酶阳性•无动力•不分解任何糖类•吲哚试验阴性莫拉菌属四、药物敏感试验及结果解释•对青霉素类敏感•对头孢类、四环素类、喹诺酮类、氨基糖甙类药物均为敏感•脑炎或脑膜炎、脑脓肿应注意药物通过血脑屏障的问题第八节军团菌属一、分类•军团菌属(Legionella)属于军团菌科（Legionellaceae）•常见的与人类疾病有关的军团菌：–嗜肺军团菌（Legionellapneumophila）–米克戴德军团菌（L.micdadei）–长滩军团菌（L.longbeachae）–杜莫夫军团菌（L.dumoffii）–波兹曼军团菌（L.bozemanii）军团菌属二、临床意义•引起肺炎型和非肺炎型（庞蒂亚克热Pontiacfever）感染。•肺炎型:多器官损害，肺部、消化道及神经系统症状及体征，致死率高。•医院感染可高达23%。慢性心、肺、肾病变、艾滋病或接受免疫抑制剂者易发本病，且死亡率高