植物体内游离脯氨酸的测定

植物体内游离脯氨酸含量的测定实验目的：植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植株体内的水分状况，本次实验目的是了解植物体内水分亏缺与脯氨酸积累的关系。植物在正常条件下，游离脯氨酸含量很低，但遇到干旱、低温、盐碱等逆境时，游离脯氨酸便会大量积累，并且积累指数与植物的抗逆性有关。因此，脯氨酸可作为植物抗逆性的一项生化指标。原理采用磺基水杨酸提取植物体内的游离脯氨酸，不仅大大减小了其他氨基酸的干扰，快速简便，而且不受样品状态（干或鲜样）限制。在酸性条件下，脯氨酸与茚三酮反应生成稳定的红色缩合物，用甲苯萃取后，此缩合物在波长520nm处有一最大吸收峰。脯氨酸浓度的高低在一定范围内与其消光度成正比。方法1．标准曲线制作表1各试管中试剂加入量管号0123456标准脯氨酸量(ml)H2O(ml)冰乙酸(ml)显色液(ml)脯氨酸含量(μg)022300.21.82320.41.62340.81.22381.20.823121.60.423162.002320（1）取7支具塞刻度试管按表1加入各试剂。混匀后加玻璃球塞，在沸水中加热40min。（2）取出冷却后向各管加入5ml甲苯充分振荡，以萃取红色物质。静置待分层后吸取甲苯层以“0”管为对照在波长520nm下比色。（3）以消光值为纵坐标，脯氨酸含量为横坐标，绘制标准曲线，求线性回归方程。2．样品测定（1）脯氨酸提取取不同处理的剪碎混匀小麦叶片0.2～0.5g（干样根据水分含量酌减），分别置于大试管中，加入5ml3%磺基水杨酸溶液，管口加盖玻璃球，于沸水浴中浸提10min。（2）取出试管待冷却至室温后，吸取上清液2ml，加2ml冰乙酸和3ml显色液，于沸水浴中加热40min，下一步操作按标准曲线制做方法进行甲苯萃取和比色。脯氨酸（μg/gFW或DW）=（3）结果计算：从标准曲线中查出测定液中脯氨酸浓度，按下式计算样品中脯氨酸含量的百分数。式中C—提取液中脯氨酸浓度（μg），由标准曲线求得；V—提取液总体积（ml）；a—测定时所吸取的体积（ml）；W—样品重（g）。思考题1.植物体内游离脯氨酸测定有何意义？2.当改变萃取剂时，比色应做哪些改变？如何选择最适波长？如何选择最佳萃取剂？