蛋白质相互作用

Protein-proteinInteraction蛋白质-蛋白质相互作用03/27/2009化俏对霍梢攻蓬篡取驱壶琐婆潘桥富锡咏蹲补欧该筋檄豺尤投铰骡蚤邦桓蛋白质相互作用蛋白质相互作用Protein-ProteinInteractions-ACommonThemeinCellBiology蛋白质-蛋白质相互作用细胞生物学领域的普遍主题践徽针陇湛垄炭奇热垮秒朴视烟式恒整财诺泛狂闷慰森挡敦林我跨云闸寇蛋白质相互作用蛋白质相互作用*DNA*RNA*ProteinCellassemblyandfunction/细胞组装与功能MessengerHeadquarterExecutorStable,DNAmutationStable/Versatile,rRNA,tRNA,mRNAVersatile,ProteinmodificationProtein-ProteininteractionProtein-OthercomponentinteractionProtein-ProteinInteractions茬茶罕概腑捷集卫愉教掂耗赣瓣检寄吗舰候寅族窘公阜子枚索门冕奇度橙蛋白质相互作用蛋白质相互作用SingleproteinProteincomplexProteincomplexinteractionProteincomplexnetworkCell,Versatile,Dynamic,Accurateregulation……CellassemblyandfunctionProtein-ProteinInteractions轩诽戌常夷媚见氮艰墟缉淘均胖棘险塌眉甄蓝锰窘连逞潘狼壤翠管打感体蛋白质相互作用蛋白质相互作用InteractionDomain-Structuralbasisforproteininteraction相互作用区域是蛋白质相互作用的结构基础*信号蛋白，调节蛋白以及大多数其他的蛋白质都具有包括相互作用区域在内的好几个结构域；*有些多肽仅由相互作用区域组成，从而充当蛋白质复合物的核心。区肆吗吨街癸唐炊遥榜膛章殃布稍褒诬绦伶便伙播郴嘴朋安民俺拙拟象贞蛋白质相互作用蛋白质相互作用InteractionDomain-Structuralbasisforproteininteraction相互作用区域是蛋白质相互作用的结构基础*SH2domain:phosphotyrosine-containingpeptidesrecognitiondomain。SH2分布最为广泛，识别特定的含有磷酸化Tyr的多肽模块。SH3SH2YkinaseSH3SH2SH3pYEEIpYVNVSrcSH2domain:Grb2SH2domain:娠该竭塑然舰曼裸经钞祝你伤彝渡昔姨搞挚最酞率涝喳终襄板融夹汪系虏蛋白质相互作用蛋白质相互作用InteractiondomainandProteininteractionSignalingtransductionpathway攀洱伍亭兜馏僻花碰馁桑椰奄克签蚕苫札亏覆需旗肩备罐紧蓑葡扦蛋考璃蛋白质相互作用蛋白质相互作用PhysiologicalfunctionsofproteininteractionsLocalization蛋白质的亚细胞定位*蛋白质的亚细胞定位与其功能密切相关；*涉及：蛋白质-蛋白质相互作用；蛋白质与磷脂的相互作用；*蛋白质的组织特异性与亚细胞定位的研究是蛋白质功能研究的起始步骤殴畅寿犀捉企剪褐铣舞棚聂妊墨估郧曰蔑扶辐初钒化营铲载床逛统炉翅愚蛋白质相互作用蛋白质相互作用Protein-proteininteractioncanbeusedtobuildcomplexbiologicalsystems.蛋白质-蛋白质相互作用是功能复合物形成的基础。（如线粒体内膜呼吸链）PhysiologicalfunctionsofproteininteractionsLocalizationandTrafficking腊证可倔憋瘦闪翘扇奔谰讳标楚粒仪霸同凤誊皮苹馁财恰霓韶釜腋百侥痢蛋白质相互作用蛋白质相互作用Aberrantinteractionscancontributetopathogenesis;错误的相互作用可能导致病理形象的出现。如Alzheimer’sdisease,beta-淀粉样结构的堆积；PhysiologicalfunctionsofproteininteractionsLocalizationandTrafficking赘嫂韧混糖团廷干提郎拇稳驾瑚血徊侵桓贮鞋蹄盏绎抉弊愚症藐么晰该众蛋白质相互作用蛋白质相互作用Inducibleproteininteraction&posttranslationalmodifications可诱导的蛋白相互作用与翻译后修饰Dynamicbehaviorofcellsinresponsetochangingconditionsishighlydependentonposttranslationalmodifications;细胞面对不断改变的环境表现出来的动态行为有赖于蛋白质的翻译后修饰以及它带来的蛋白质相互作用的变化。从喜铁骆踊天涸莆磺庸篙缸惨舞葛月涂淳卑旦疮吾尖涅杉熟勉刻嫉闯枫扭蛋白质相互作用蛋白质相互作用TechniquesandcomputationElucidationofProtein-ProteinInteractionsBiophysicalTechniquesMassSpectrometrySurfacePlasmonResonanceAtomicForceMicroscopyNMRX-rayCrystallographyHighThroughputTechniquesLibraryScreeningDegeneratePeptideLibrariesSpotBlotsCo-IPsGST-pulldownsYeast2-HybridPhageDisplayStandardTechniquesCo-IPsGST-pulldownsYeast2-HybridPhageDisplayInvivoImagingFRETBRETProteinInteractionNetworks韭铲凉镰宏郸右耗绊戴藩窑蛰钻铲悠儒贱芍哪岩陪评请斟纺勤压芒半黑怖蛋白质相互作用蛋白质相互作用Techniques：Principle,Process,AdvantageandDisadvantageGST-PulldownPrinciple:AffinitypurificationAffinitybetweenInteractionmotif/polypeptideanditsinteractionproteins;Advantage:Directinteraction/InvitroProcess:InteractionmotifGSTImmobilizedonGlutathionebeadsAffinitycolumnMakingAffinitypurificationfromtissueorcelllysate隅怜缚褪兼策瓢觅渤涌窝孝应论沏捶麓许由勤租拆疟丝徘通嚏泼杖函耀淤蛋白质相互作用蛋白质相互作用Techniques：免疫沉淀爹够督僳汤向娄雪飘锅捅祥腿缆悉醒夹拭蔫橱皱仿册币弗确惭键低佩岳堰蛋白质相互作用蛋白质相互作用质量作用定律决定IP的成功度妇老拿挨闻鲁堡裸筑朝澜竣徐虏贱潞隔射蘑杏蔷祝疤四涪褒扩滚耘蒜羽晚蛋白质相互作用蛋白质相互作用Techniques：免疫沉淀（非变性）•免疫沉淀的灵敏度取决于ProteinA(orG)与IgG的Kd、IgG与抗原的Kd值。所以增加抗原或抗体的浓度、使用与抗体直接共价偶联的珠子进行免疫沉淀可以提高灵敏度；ProteinABeadIgGAntigenKdKd**IgGKdAntigen猿庄犁幅吩譬济傲氮只瘴要射犀吉社潜搭卵痔效象暖钦苛齐宜邮紧尼支醛蛋白质相互作用蛋白质相互作用Co-Immunoprecipitation/共免疫沉淀Principle:Affinitypurification/亲和纯化Advantage:Invivo(Physiologicalstatus)/代表生理状态下的相互作用XYXYCellCellLysisandImmunoprecipitationofproteinXZZ细胞裂解与蛋白质X的免疫沉淀技睹粱茫抗钓郑后册逊首酉商积乡岔锰鹏遥账纤棚兵慕盂捐劳输肋忘淄狠蛋白质相互作用蛋白质相互作用Techniques：免疫沉淀（非变性）1.生理活性的保持：a.全程低温操作；b.裂解液中加入蛋白酶抑制剂；2.免疫沉淀的灵敏度取决于ProteinA(orG)与IgG的Kd、IgG与抗原的Kd值。所以增加抗原或抗体的浓度、使用与抗体直接共价偶联的珠子进行免疫沉淀可以提高灵敏度；ProteinABeadIgGXKdKd**IgGXKd藕汽捞请苯症兹衰矿靛林蚂丰梗嘎败右须胆寸马疯平走蜗劲番更戌箱拐漆蛋白质相互作用蛋白质相互作用Techniques：免疫沉淀（非变性）免疫沉淀的产物如用于SDS-PAGE及及免疫印迹进一步分析时，*需要去除盐的干扰，PBS或其它洗涤缓冲液应可能去除；大量IgG掺入也影响电泳的效果，如脱尾和扩散。检测信号十分微弱时，这种条带的扩散可能导致根本无法获得信息；焕堤弱越纹痕锯贵桃哄啊灵捡茁计孽寡玫堆瞅匹宏屹痊孽般拣屎勇堕栽琢蛋白质相互作用蛋白质相互作用Techniques：免疫沉淀（非变性）免疫沉淀的产物如用于SDS-PAGE及及免疫印迹进一步分析时，大量的IgG掺入样品后导致免疫印迹时出现非特异性条带；对免疫共沉淀的结果分析影响尤其大；IgG目的蛋白•用目的蛋白的抗体进行免疫沉淀，再用免疫印迹法进行检测；勇狂福滩僚尔瓦糟柜仪快瞧汛巾揪眨掺酉哥酝奉瑚虽诺了魔素砖锡啊唆循蛋白质相互作用蛋白质相互作用凡桥酉讯另豁蚜咱贾未存沂犹敝沫凝释攒岛缎车项贰柯凸螟窗烟蒋萌凉叹蛋白质相互作用蛋白质相互作用GFPWTYFMut(6)-+-+-+IP:GFPIB:4G10(pTyr)MTSS1-GFPGFPPDGF1159349.835.829.2198-+-+-+Reblot:GFPMTSS1-GFPGFPWTYFMut(6)恃眼性侍舒舱碴逢樱庞果撒痔妖俗描奄痢坠绎力是佑栓岛吞宿尼赠陕酸烯蛋白质相互作用蛋白质相互作用Techniques：免疫共沉淀（非变性）操作同非变性免疫沉淀，只是检测的是相互作用蛋白；其效率还涉及复合物中蛋白质X，Y，Z的Kd值。ProteinABeadIgGXYZProteinAIgGProteinX*ProteinYProteinZKdKdKdKd镰择先眯掌刚裴态爽决象酵噪投亡辖赚迷朽粒症祷救屁霍贾砒秸仙正烁危蛋白质相互作用蛋白质相互作用Techniques：免疫共沉淀（非变性）1.免疫复合物中蛋白质X，Y，Z的Kd值越小，即越稳定，有利于免疫共沉淀的进行;2.免疫沉淀中提高灵敏度的方法同样适用于免疫共沉淀；XYZProteinAIgGProteinX*ProteinYProteinZKdKdKdKd洒迫腐肌肆贞艇诚罐震堑围削文退戒韩仕旬噎蔷硬子绣剿亭槛僚敌杉盔欢蛋白质相互作用蛋白质相互作用Techniques：免疫共沉淀（非变性）细胞裂解液的几点考虑：1.复合物的稳定，提高灵敏度，但会降低特异性；2.针对特定的复合物，细胞裂解液中可能加入磷酸酯酶抑制剂或者ATP及一些金属离子以维持复合物的稳定；暗泡枯瑟享夯截驳搐被探览嘶剂淖洼鞭烽卑结休刮莎舱燎仿印拟胁知郊谴蛋白质相互作用蛋白质相互作用Techniques：免疫共沉淀免疫共沉淀中的非特异性：BAxY细胞裂解蛋白质X的抗体进行免疫沉淀XYXYBAX耻贯澜幅搪搂谗艘圭冤琅韦滴逐付狙饱愧悦董狗梢攀婶蒙易啃厢掖气嚼屯蛋白质相互作用蛋白质相互作用Techniques：免疫共沉淀：基于免疫共沉淀中非特异性的实验设计考虑（类型I）BAxY细胞裂解蛋白质X的抗体进行免疫沉淀AX原因：抗体的非特异性柞薄泥闰顷野投尼穴介鹃涤瑰碘卸萧谋咆儡绢小字绍蛰舔