实验一---徒手切片的制作

实验须知1．遵守实验室制度，维护实验室安全，不违章操作，严防爆炸、着火、中毒、触电、漏水等事故的发生。若发生事故应立即报告指导教师。2．实验前作好预习，明确实验内容，了解实验的基本原理和方法，安排好当天计划，争取准时结束。实验过程应养成及时记录的习惯——实验中应如实记录原始数据和实验现象，并严格遵守实验规则。3．实验室中保持安静，不许大声喧嚷，不许抽烟、不迟到、不随便离开，实验台面应保持清洁，使用过的仪器应及时清洗干净，存放在实验柜内，废弃的固体和滤纸等丢入废物缸内，绝不能丢入水槽、下水道和窗外，以免堵塞和影响环境卫生。4．公用仪器及药品用完后立即返还原处，破损仪器应填写破损报告单，注明原因。节约用水、用电、药用试剂。严格药品用量。5．保持实验室内整洁，学生采取轮流值日，每次实验完毕，负责整理公用仪器，将实验台、地面打扫干净，倒清废物缸，检查水、电和门窗是否关闭。实验分组每个桌面坐7个人，2或3个人为一小组，7个人为一大组。实验报告要求1、实验前认真预习实验内容，毋须写预习报告，合理安排好实验时间。2、实验完成后，根据实验内容写一份真实的实验报告。下一次实验时以班级为单位上交上一次的实验报告。3、请假者，请及时上交实验报告。徒手切片的制作医学与生命科学学院徒手切片法用手直接拿刀片把植物新鲜材料切成薄片，所作的切片通常不经染色或经简单染色后，制成临时的水装片用于观察，亦可以通过脱水与染色制成永久制片。优点简单、方便；不需要复杂设备；不经化学药物处理，基本上保留了植物活体的状态。局限性难以把过硬或者过软的材料制成薄片，对需制作连续切片且厚度要求在几微米时该法更无能为力。徒手切片的制作一、实验材料及器材的准备二、实验材料的处理三、握夹持物和持刀四、切片五、制片六、注意事项实验器材的准备1、锋利的刀片2、洁净的载玻片、盖玻片3、盛清水的培养皿4、毛笔、镊子等1、软硬适中、便于手持的材料，一般截成小块（长2～3cm，切片断面不超过3～5mm2）。2、过于柔嫩的器官，可选用胡萝卜根或土豆块茎作为夹持物。夹持物截成规范的小块，再用刀从一端的中线纵向劈开（不要劈到底），以夹住材料。如新鲜叶片，切去叶柄、叶尖和叶缘后，切成长度和宽度都小于夹持物劈缝的长方块，再放入夹持物劈缝中。3、有些叶片可以卷成圆筒再进行切片。实验材料的处理用左手的拇指和食指捏紧夹有叶片的夹持物，并使其劈缝与自己本身平行，拇指要稍低于食指，以免被刀割破。夹持物上端要略高于手指，但勿过高，以防切割时夹持物和刀摇动。右手拿刀将刀片平稳地放在左手食指上，与材料切面平行。握夹持物和持刀这是切片的关键阶段。沾水的刀口保持水平对着夹持物,自左前方向右后方，以均匀、快捷的动作，斜着向后进行连续拉切。切时用臂力而不用腕力。如此循环多次，切下许多薄片后，把切下的薄片，迅速用毛笔刷入清水中备用。切片用毛笔挑选透明的薄片，制临时装片。选片临时装片技术首先将载玻片、盖玻片用纱布拭擦干净，拭擦玻片动作要轻，手指用力要均匀，否则易拭破。在载玻片中央，滴加一、二滴清水，然后用毛笔取培养皿中切好的材料置于载玻片上，将盖玻片轻轻盖上，盖盖玻片时，用镊子夹起盖玻片，使载玻片一边先放下，接触一边水，然后再轻轻放平，以免水中产生气泡，影响观察。如仍有气泡，可用镊子轻轻加压盖玻片，将气泡赶出。如水分过多，可用滤纸条将水吸干，如水分不足，可在盖玻片边沿用滴管加水少许。使材料浸没水中，盖玻片紧贴载玻片，这样装片制成。将切下的薄片放在载玻片上时，要先在玻片中央加一滴水，把材料放到水滴中，然后用镊子夹住盖玻片，将盖片的一侧先接触到载玻片中央的水滴，然后用镊子顶住盖片的另一侧，慢慢放下，使盖玻片与载玻片之间充满水，如有气泡，要掀起盖片，重新放置。徒手制作的切片可以直接在光镜下观察，也可以经过简易的组织化学染色，以使结构看得更清楚，同时可观察到细胞各部分的化学成分。染色的方法是将切片放在载玻片上后，用吸水纸吸去多余的水分，滴上一滴染料，经过1～2min后，用水冲洗一下，盖上盖玻片，在显微镜下观察。1.取材选取待观察的植物材料初步切取大约3cm长的小块再依切片的具体要求，将组织块修整为0.5cm的材料块。2.切片以左手夹住材料，用右手平稳地握住刀片。切片时，使刀片与材料的断面保持平行，刀口自左上方斜向右下方，动作要均匀有力。材料与刀片须常以水湿润。切下的薄片立即用毛笔蘸水后粘取移入盛有清水的培养皿内。3.选片切片完整，在培养皿中选择薄而均匀且切面完整的组织切片，捞在载玻片上作临时水装片，然后置于显微镜下观察，如结构能被清晰地显示出来，则可制成永久保存封片。临时装片制作步骤1、在切片前，要不断地用水湿润材料和刀片。2、夹持物上端要保持表面平整。3、切片时，双手应该保持活动状态，不要使它们紧靠身体或实验台。4、用力不要过猛，不能用刀片挤压材料或来回切割材料。5、动作要敏捷，材料要一次切下，不要追求切片形状的完整。速度要快，才能切得又薄又平。注意事项