动物细胞的原代培养

动物细胞的原代培养－－组织块法无菌室下风口上风口液氮罐安全柜着装操作者进入无菌室前先用肥皂洗净双手，然后用1‰新洁尔灭浸泡消毒5分钟将小白鼠断颈处死，然后用75%酒精或1‰新洁尔灭浸泡消毒，迅速进入无菌室。将小白鼠置超净工作台上，打开腹腔用眼科剪和镊，将肾外膜剪破，并将其剥向肾门，去肾外膜及脂肪，剪碎组织接种组织块移入培养箱中（注意贴有组织块的一面朝上），静止2～3小时，然后将细胞培养瓶轻轻翻转，继续静止培养。观察24～48小时后若培养液变成黄色且混浊，表示已被污染；若培养液变成紫色，一般细胞生长不好，则培养液pH过高；若培养液显为橙黄、橘红且清澈，一般显示细胞生长良好。在相差显微镜下观察，若此时见细胞自组织边缘长出。继续培养3～5日，再换部分或全部培养液，待多数组织块的生长晕相接，小心挑掉组织块，继续培养3～4天，细胞贴满细胞培养瓶壁时便可进行传代培养。骨髓瘤细胞的培养骨髓瘤细胞消化数分钟中止消化、吹散细胞收集细胞、离心计数细胞传代37℃、5％CO2培养小鼠的免疫实验市售绵羊血血球计数板计数，调整细胞浓度抓小鼠的方法腹腔注射免疫尾静脉免疫皮下免疫足垫免疫脾脏免疫－1所需器具称重脾脏免疫－2注射麻药脾脏免疫－3打结固定小鼠脾脏免疫－4酒精消毒去毛碘酒消毒脾脏免疫－5剪开外皮剪开腹膜找到脾脏脾脏免疫－6注射抗原脾脏免疫－7注射双抗缝合伤口每隔15天重复注射作加强免疫，共重复2次第三次免疫之后10天，将小鼠断尾取血，用ELISA方法，检测血清效价。取脾细胞融合前3天加强免疫一次，以活化B淋巴细胞TheEnd