含量测定方法与验证版

第一节定量分析方法的分类与特点定量分析方法的计算–药典对药物的含量限度的表示方法•原料药：多以%表示，有二种情况–①按原料药本身形式计算其含量–例：阿司匹林（P.11）按干燥品计不得少于99.5%–对氨基水杨酸钠按干燥品计不得少于99.0%–凡未规定上限的，药典凡例中规定，其含量上限不得超过101.0%。–②由于药物组成不定，需以另一种稳定形式计算含量–例：氢氧化铝[Al(OH)3]以含三氧化二铝（Al2O3）计，不得少于48.0%•制剂：制剂的含量限度表示方法有三种情况–①按标示量计算–标示量即规格量，生产厂家的处方量。它是以标示量为100%，将测得含量与之相比较，求出相对于标示量的百分含量。–例：维生素B1注射液含维生素B1应为标示量的95.0%～105.0%–干酵母片含蛋白质不得少于标示量的40.0%–②直接用%含量规定范围（主药含量微）–例：复方碘溶液–含I应为4.5%～5.5%–含KI应为9.5%～10.5%–复方氯化钠注射液–含总Cl-量0.52%～0.58%–含KCl量0.028%～0.032%–含CaCl2·2H2O0.031%～0.035%–③以重量规定含量范围（多为复方制剂）–例：复方炔诺酮片–炔诺酮0.54～0.66mg/片–炔雌醇31.5～38.5μg/片–复方磺胺甲噁唑片–SMZ0.360～0.440g/片–TMP72.0～88.0mg/片2020/5/205一、容量分析法——滴定法aA+bBcC+dD（A——被测药物；B——滴定液）（一）、滴定度的概念–T---与1ml规定浓度的标准溶液所相当的被测物的mg数。（二）、滴定度的计算–T=MA×mB×a/b（mg/ml）（三）含量计算1、直接滴定法原料药以%表示的制剂样品%=V×F×T/W×100%F=N实/N理2、间接滴定法（1）、剩余滴定法中须做空白样品%=（V空白－V测)样×F×T/W×100%（2）、生成物滴定法aA+bB=cC（生成物）+dD，cC+eE=fF+gG找到A与E的关系，计算滴定度（p.146）（自学）•相当于标示量%的计算公式–片剂：–V×F×T/W×平均片重/标示量×100%–针剂：–V×F×T/W/标示量（g/ml）×100%•以重量/片计的计算公式–V×F×T/W×平均片重=重量/片司可巴比妥钠胶囊含量测定：精密称取内容物0.1385g，置碘量瓶中，加水10mL，振摇使溶解，精密加溴滴定液（0.05mol/L）25mL，再加盐酸5mL，立即密塞并振摇1分钟，暗处静置15分钟后，加碘化钾试液10mL，立即密塞，摇匀，用硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L，F=0.992）滴定，至近终点时加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正。已知：样品消耗硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L）17.05mL，空白试验消耗25.22mL，每1mL溴滴定液（0.05mol/L）相当于13.01mg的司可巴比妥钠。计算本品相当于标示量的百分含量（规格0.1g，20粒胶囊内容物重2.7506g）？(p.90－生成物滴定法)2020/5/209司可巴比妥钠的滴定度计算1摩尔司可巴比妥钠与1摩尔溴相当T=MA×mB×a/b＝260.2×0.05×1/1＝13.01mg/mlNNHNaOCH3OOCH2CH3Br2NNHNaOCH3OOCH3CH2BrBrBr2KIKBrI2I2Na2S2O3NaINa2s4o6+(过量定量)+2(剩余)2++22+(25.22－17.05)×13.01×0.992×2.75060.1385×0.1×1000×20×100%精密量取维生素C注射液4mL（相当于维生素C0.2g），加水15mL与丙酮2mL，摇匀，放置5分钟，加稀醋酸4mL与淀粉指示液1mL，用碘滴定液(0.05mol/L)滴定至溶液显蓝色，并持续30秒钟不退。已知：注射液规格2mL:0.1g，消耗0.05mol/L碘滴定液（F=1.005）22.45mL，维生素C的分子量为176.12，问：（1）丙酮和稀醋酸分别起什么作用？（2）每1mL碘滴定液(0.05mol/L)相当于多少mg的维生素C？（3）求本品相当于标示量的百分含量？2020/5/2012维生素C1摩尔维生素C与1摩尔碘相当T＝0.05×176.12×1/1＝8.806mg/mlT×V×F维生素C标示量％＝4×0.05×100％8.806×22.45×1.005＝4×0.05×1000×100％＝99.34％OOOHOHOHHCH2OHOOOOOHHCH2OHI2H+CC++2HI二、光谱分析（一）、UV法1、标准对照法（一点法）–A样/A标=C样/C标，–样品%=A样/A标×C标×F/W×100%–F=稀释倍数–W=取样量2、百分吸收系数法（A=E1%cm×C×L）–C%=A/E1%cm–样品%=A/E1%cm×F/W–F=稀释倍数和浓度换算因子–W=取样量3、标准曲线法（y=bx＋a）–由标准曲线或回归方程求出C样，再根据F，W求出样品%。4、计算分光光度法–双波长法，差示法均可应用比尔定律的公式，以△A代替吸收度A。差示分光光度法原理：利用被测物在两种不同溶液中吸收光谱发生了特征性变化，而共存干扰物在该两种溶液中未引起光谱变化，测定两种溶液的吸收度差值（ΔA值），根据ΔA与被测物浓度C的线性关系进行定量测定。方法：一定量+酸→一定体积（测定）→A测同样量+碱→同样体积（参比）→A参A测－A参=△A样∵干扰物在两种溶液中吸收光谱无变化，即△A杂=0，∴△A样只与样品浓度C呈线性关系。供试品220240260280nmΔA•pH10溶液，240nm•pH13溶液，255nm•酸性溶液，无maxΔA样=ApH13-ApH10ΔA标=ApH13-ApH10C样=ΔA样/ΔA标×C标•特点：具备一般分光光度法简易、快速、直接读数的优点;无需事先分离，又能消除干扰;提供一个近似理想的参比溶液。ΔA2020/5/2017（二）、FLU法以荧光强度△R代替吸收度A1、对照品溶液与空白溶液的荧光强度之差（ΔR对）2、供试品溶液与空白溶液的荧光强度之差（ΔR样）ΔR样C样＝×C对ΔR对称取己酸孕酮0.0105g,加无水乙醇溶解后,置10ml容量瓶中,稀释至刻度,摇匀。吸取1.00ml,置100ml容量瓶中,加无水乙醇稀释至刻度,置1cm吸收池内进行测定,根据下列数据,求出按干燥品计算的己酸孕酮百分含量。A=0.390,E1%1cm=3930.390×10393×0.0105×100%=含量%复方磺胺甲噁唑片中磺胺甲噁唑（SMZ）的含量测定：精密称取本品（每片含SMZ为0.4g）10片，总重量为5.5028g。精密称取SMZ对照品0.0501g、片粉0.0756g，按双波长分光光度法测定SMZ含量。在257nm波长处测得：对照品溶液的吸收度A对为0.330，供试溶液的吸收度A样为0.372。在304nm波长处测得：对照品溶液的吸收度A对为0.009，供试溶液的吸收度A样为0.021。计算SMZ的含量相当于标示量的百分含量。257nm304nm对照品供试品0.3300.3720.0090.0210.372-0.0210.05015.50280.330-0.0090.0756100.4××××100%=99.69%对乙酰氨基酚片剂溶出度测定：取标示量为0.3g的本品6片，依法在1000mL溶剂中测定溶出度。经30分钟时，取溶液5mL滤过，精密吸取续滤液1mL，加0.04%氢氧化钠溶液稀释至50mL，摇匀，在257nm波长处测得每片的吸收度分别为0.345，0.348，0.351，0.359，0.356和0.333，按其百分吸收系数为715计算出各片的溶出量。限度为标示量的80%。并判断其溶出度是否符合规定。0.345×50×1000715×0.3=80.4%片1：片2……复方苯巴比妥散中苯巴比妥的测定主要成分：苯巴比妥，阿司匹林原理：在pH5.91和pH8.04条件下，阿司匹林及水解产物水杨酸等的紫外吸收光谱重合，ΔA=0，而苯巴比妥在此两pH条件下的差示光谱在240nm处ΔA值最大，因此可测定此波长处的ΔA值，采用标准曲线法定量。方法：取样品0.12g，加无水乙醇20ml，振摇，加水至200ml，取5ml两份，分别用pH5.91和pH8.04的缓冲液稀释至50ml，以试剂为空白，在240nm处测定吸收度，代入回归方程计算含量。三、色谱分析（HPLC和GC）•内标法：–F=A内/A标×C标/C内–样品%=A样/A内×F×C内×稀释倍数/W×100%–或C样=R样/内/R标/内×C标–（R代表峰面积比值）•外标法（同光谱法）:–标准曲线法–标准对照法(一点法)–系统适用性试验•柱效（理论板数）n=5.54(tR/Wh/2)2•分离度R=•拖尾因子T=•重复性取对照品或样品溶液，连续进样5次，测得峰面积相对标准差RSD应小于2.0%2(tR2-tR1)W1+W2W0.05h2d1(R≥1.5)(T=0.95～1.05)T=W0.05h/2d1d1hW0.05h0.05hHPLC测定复方SMZ片中SMZ含量，以SG为内标，测得标准液中：SMZ峰高14.90cm，浓度8.0mg/mL，SG峰高13.80cm，浓度4.0mg/mL。样品液中：SMZ峰高11.92cm，SG峰高16.20cm，浓度4.0mg/mL。求样品液中SMZ的浓度为多少？（进样量均为5l）13.8×8.014.9×4.0F=样品（mg/mL）=11.92×4.016.2=1.852×F=5.45用HPLC法测得某药保留时间为12.54min，半高峰宽3.0mm（纸速5mm/min），计算柱效？N=5.54（12.54/3.0）2？N=5.54[12.54/（3.0/5）]2？N=2420丙酸睾酮含量测定采用高效液相法：取本品对照品适量，精密称定，加甲醇定量稀释成每1mL中约含1mg的溶液。精密量取该溶液和内标溶液（1.6mg/mL苯丙酸诺龙甲醇溶液）各5mL，置25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，取10L注入液相色谱仪，记录色谱图。另取本品适量，同法测定，内标法计算含量。已知对照品溶液为1.052mg/mL，样品溶液为1.032mg/mL，测得对照液中丙酸睾酮和内标准的峰面积分别为54678和61258，样品液中丙酸睾酮和内标准的峰面积分别为52213和61228，计算丙酸睾酮的含量？52213/6122854678/61258×1.052/1.032=？97.4%第二节样品分析的前处理方法一、概述含金属药物有：富马酸亚铁、葡萄糖酸锑钠、枸橼酸铋钾、葡萄糖酸锌、酒石酸锑钾等。含卤素药物有：泛影酸、三氯叔丁醇、碘番酸、磺溴酞钠等。根据所含金属或卤素在分子中结合的牢固程度，分析前采用不同方法进行预处理。不经有机破坏处理的分析方法直接测定法金属原子不与碳直接相连的或C-M键结合不牢固的有机金属药物，在水溶液中电离，可选用适当方法直接测定。例：富马酸亚铁——在热的稀矿酸中溶解，释放出亚铁离子，用硫酸铈滴定液直接滴定。CHCOOCHCOOFeHClFe2+葡萄糖酸锑钠——为组成不定的五价锑化合物，采用间接碘量法测定锑的含量，在酸性条件下，葡萄糖酸锑钠与碘化钾试液作用，Sb5+可氧化KI，析出I2，用Na2S2O3滴定液滴定。枸橼酸铋钾、葡萄糖酸锌——EDTA滴定法测定含量。经水解后测定法本法适合于卤素与脂肪碳链相连者，经加热回流使其水解，有机结合的卤素转变成无机的卤素离子，然后用适当方法进行测定。例：三氯叔丁醇的含量测定CCl3－C(CH3)2－OH+4NaOH3NaCl然后用银量法测定氯化钠含量。回流注意沉淀转化（加有机溶剂）Fe3+的水解（酸性中滴定）NaCl+AgNO3AgCl剩余AgNO3+SCN-AgSCNSCN-+Fe3+Fe（SCN）2+终点时AgClAg++Cl-+SCN-AgSCN硬脂酸镁——与定量硫酸标准溶液共沸