卷D201304输血科技术标准操作规程

文件编号：CQJY/CBT/SOPA/0重庆市第九人民医院用血质量管理体系技术性操作规程（依据GB/T19001-2008idtISO9001：2008编制）编制人：艾万辉审核人：徐育云批准人：发布日期：2013年4月30日实施日期：2013年4月30日重庆市第九人民医院输血科文件编号：CBT-SOP版本/修订号：A/0主题内容技术性操作规程生效日期：2013.04.20第2页共64页目录CBT-SOP-01-2013试管法鉴定ABO血型标准操作规程……………………………………………3CBT-SOP-02-2013试管法鉴定RhD血型标准操作规程……………………………………………7CBT-SOP-03-2013微柱凝胶卡式法鉴定ABO正反血型及RhD血型标准操作规程………………9CBT-SOP-04-2013盐水法交叉配血试验标准操作规程………………………………………………13CBT-SOP-05-2013凝聚胺交叉配血试验标准操作规程………………………………………………15CBT-SOP-06-2013微柱凝胶卡式法交叉配血试验标准操作规程……………………………………17CBT-SOP-07-2013新生儿溶血病（HDN）血型血清学检查标准操作规程……………………………20CBT-SOP-08-2013红细胞不规则抗体筛选标准操作规程……………………………………………24CBT-SOP-09-2013孕妇血清中红细胞血型抗体效价测定标准操作规程……………………………27CBT-SOP-10-2013输血相容性检测室内质控标准操作规程…………………………………………29CBT-SOP-11-2013输血科室间质评标准操作规程……………………………………………………32CBT-SOP-12-2013输血科试剂质量管理操作规程……………………………………………………35CBT-SOP-13-2013输血科配制自备试剂的标准操作规程……………………………………………40CBT-SOP-14-2013重庆市第九人民医院临床输血操作规程…………………………………………43CBT-SOP-15-2013细胞洗涤离心机（XTL4.7型）标准操作规程……………………………………46CBT-SOP-16-2013台式低速离心机（XKA-2200型）标准操作规程…………………………………48CBT-SOP-17-2013SANYO的MBR-304DR型冰箱标准操作规程…………………………………51CBT-SOP-18-2013XL-200卧式血液速冻箱标准操作规程…………………………………………53CBT-SOP-19-2013DiaMed-ID-Incubator37SⅠ型孵育器标准操作规程……………………………55CBT-SOP-20-2013ID-Centrifuge12SⅡ卡式离心机标准操作规程…………………………………56CBT-SOP-21-2013XJ-8血液解冻机标准操作规程……………………………………………………57CBT-SOP-22-2013Haier的HXC-358型血库专用血液储存冰箱标准操作规程……………………58CBT-SOP-23-2013FYQ型免疫微柱孵育器标准操作规程……………………………………………60CBT-SOP-24-2013TD-3A血型血清学专用离心机标准操作规程……………………………………62CBT-SOP-25-2013封管热合器标准操作规程…………………………………………………………64重庆市第九人民医院输血科文件编号：CBT-SOP版本/修订号：A/0主题内容技术性操作规程生效日期：2013.04.20第3页共64页试管法鉴定ABO血型标准操作规程1、目的为规范输血科ABO血型鉴定的技术操作，确保鉴定结果准确及临床输血安全有效，依据《输血实验室管理程序》4.1.7条款的要求制定本规程。2、适用范围本文件适用于本院输血科ABO血型鉴定的操作过程的规范化管理。3、方法及原理3.1方法：试管凝集法3.2原理：根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是用已知抗-A和抗-B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗-A或/和抗-B。4、试剂4.1血清抗A（市售）、抗B（市售）、抗A+B（健康O型人血清）；4.25%A、B及0型试剂红细胞盐水悬液；4.3受检者血清或血浆；4.4受检者5%红细胞盐水悬液;5、样本采集及处理用一次性EDTA-K2真空采血管抽取静脉血1ml，将标示有患者姓名、性别、年龄、住院号、病室/门急诊、床号等信息的标签贴在标本管上，由医护人员或专门人员将患者标本送交输血科。6、操作步骤6.1正定型：取洁净小试管3支，分别标明抗A，抗B和抗A+B，用滴管分别加抗A，抗B和抗A+B。分型血清各1滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴，混合。6.2反定型：另取洁净小试管3支，分别标明A，B和O细胞。用滴管分别加入受检者血清1滴于试管底部，再分别以滴管加入A，B和O型5%试剂红细胞悬液1滴，混合。立即以1000r/min离心1min。6.3将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象。如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。7、结果判断：凝集为阳性（+），不凝集为阴性（-），ABO定型结果如下表重庆市第九人民医院输血科文件编号：CBT-SOP版本/修订号：A/0主题内容技术性操作规程生效日期：2013.04.20第4页共64页ABO正反定型结果标准血清+被检者红细胞血检者血型标准红细胞+被检者血清抗A抗B抗A+BA细胞B细胞O细胞+-+A-+--++B+-----O++-+++AB---8、干扰：8.1分型血清质量性能符合要求，用毕后应放冰箱保存，以免细菌污染。8.2试剂红细胞以3个健康者同型新鲜红细胞混和，用生理盐水洗涤1次，以除去存在于红细胞中的抗体及可溶性抗原。8.3试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。8.4操作方法应按规定，一般应先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。8.5按理IgM抗-A和抗-B与相应红细胞的反应温度以4℃为最强，但为了防止冷凝集现象的干扰，一般仍在室温（20～24℃）内进行试验，37℃可使反应减弱。8.6离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防止假阳性或假阴性结果。8.7观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列的区别。8.8判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误。9、凝强度判断:观察结果应仔细，首先注意有无凝集，再按下述情况说明凝集强度：9.14＋：红细胞凝聚成一大块，血清透明清晰。9.23＋：红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。9.32＋：红细胞凝集分散成多个小块，可见游离红细胞。9.41＋：肉眼可见大颗粒，周围有较多红细胞。9.5±：镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多红细胞。9.6混合凝集视场（MF,mixedfield）：镜下可见数个红细胞凝集，大多数红细胞分散分布为MF。阴性（－）：镜下未见凝集，红细胞均匀分布。10、质量控制：单克隆抗-A（B）试剂应在有效期内使用，每批次在使用前应检测特异性及效价，试剂红细胞的质控执行《输血科试剂质控标准操作规程》，每天常规血型鉴定前先做室内质控（具体执行《输血科室内质量控制的标准操作规程》），结果在控后方可将常规检查的报告发出。重庆市第九人民医院输血科文件编号：CBT-SOP版本/修订号：A/0主题内容技术性操作规程生效日期：2013.04.20第5页共64页11、医学解释：11.1血以成为临床上必不可少的治疗手段。输血必须输入ABO同型血，否则输入的红细胞可能迅速被破坏，导致严重的溶血反应，常常威胁生命甚至造成死亡。所以在临床工作中必须杜绝ABO血型不合的血液输入人体，这以显得十分重要。11.2肾、皮肤等器官或组织移植时，必须保证供体与受体之间ABO血型符合，否则将发生排斥反应，造成移植术失败。11.3ABO血型不合所致的新生儿溶血病，可导致流产、死胎或因出生后抢救不及时而致死等。目前早期诊断仍依赖于ABO血型血清学检查。11.4ABO血型在人群中的分布，可用作遗传距离和聚类的分析，现以知道中国人氛围北方、南方两大群，前者以较高B基因，后者以较高O基因为特征。11.5其他：如亲子鉴定，法医学上对可疑血迹、精斑、毛发等ABO血型鉴定。12、最常见的误差来源：12.1自制分型血清抗体效价太低、亲和力不强，造成定型不准。12.2患者纤维蛋白原升高或异常蛋白质血症（如多发性骨髓瘤，巨球蛋白血症），可产生缗钱状假凝集。新生儿脐带血中喊有华顿胶（Whartonjally）或操作中使用了质量差的玻璃管（瓶），误认其脱下的胶状硅酸盐为串钱状凝集。12.3病人输入了高分子血浆代用品或静脉注射造影剂等药物，可引起红细胞聚集，易误认为凝集。12.4血清中存在不规则抗体，如A2和A2B型患者血清内有A1抗体，能凝集A1红细胞。此外还有I抗体等。有些癌症患者（如胃癌、胰腺癌等）血中大量的可溶性A或B物质可中和抗体血清的抗体，从而抑制反应，造成假的不凝集。12.5婴儿尚未产生自己的抗体（出生3~6个月后方逐渐产生），或有从母亲获得的血型抗体，故新生儿不宜用血清作反向定型。12.6老年人血型抗体水平会下降，某些免疫缺陷的人或慢性淋巴细胞白血病、遗传性无丙种球蛋白血症以及有些用了免疫抑制剂的患者，由于免疫球蛋白下降，血型抗体也下降甚至缺如。可出现反向定性错误。12.7用近期内输过血的患者血液做对照红细胞，其红细胞是多种红细胞的混合物。12.8病人红细胞已经被大量抗体包被（如某些自身免疫疾病或新生儿溶血病患者的红细胞），或红细胞悬浮于含高浓度蛋白的介质中，红细胞都回自发地发生凝集。12.9有些人红细胞膜有遗传或获得性异常，易发生多凝集（较罕见）。重庆市第九人民医院输血科文件编号：CBT-SOP版本/修订号：A/0主题内容技术性操作规程生效日期：2013.04.20第6页共64页12.10A或B的弱抗原易判断为不凝集（假阴性），而由细菌引起的获得性类B抗原易误判为阳性。12.11由于患白血病或某些恶性肿瘤（如Hodgkin病）使A或B抗原变弱。婴儿及老年人的红细胞抗原较青壮年弱，在实验室内保存过久的红细胞及部分衰老的红细胞抗原性也会减弱。11.12当用血清配制红细胞悬液时，若血清中有高浓度血型物质则会中和分型血清中的抗体，而不再与红细胞抗原起反应。11.13红细胞被细菌污染。12.14嵌合体（chimera）现象，此处指混和细胞群，见于异卵双生子。如有98%O型红细胞，2%B型红细胞会定为O型，但血清中只有抗A抗体。12.15用了不洁的玻璃器皿或使用了严重污染的血清、红细胞可出现假阳性。试管沾染了洗涤剂会造成假阴性。12.16红细胞与血清的比例不当、过度离心或离心不足可引起假阳性或假阴性。12.17将出现的溶血现象（阳性）误认为阴性结果。12.18温度过高会造成假阴性。因为ABO血型系统的IgM抗体最适温度为4~22℃，如达37℃凝集力即下降。12.19弄错标本、试剂、标签，或出现记录错误。13、相关文件13.1《全国临床检验操作规程》第三版；13.2试剂盒说明书。13.3输血科《输血实验室管理程序》。13.4《临床输血质量管理指南》田兆嵩主编。重庆市第九人民医院输血科文件编号：CBT-SOP版本/修订号：A/0主题内容技术性操作规程生效日期：2013.04.20第7页共64页试管法鉴定RhD血型标准操作规程1、目的为规范输血科RhD血型鉴定的技术操作，确保鉴定结果准确及临床输血安全有效，依据《输血实验室管理程序》4.1.7条款的要求制定本规程。2、适用范围本文件适用于本院输血科RhD血型鉴定的操作过程的规范化管理。3、方法及原理3.1方法：试管凝集法3.