几种抗氧化剂含量的测定

几种抗氧化剂含量的测定一、实验目的1.掌握抗坏血酸（AsA）含量的测定。二、实验原理抗坏血酸（AsA）测定的原理：（1）AsA生理生化作用抗坏血酸是植物细胞重要的抗氧化剂，通过清除体内的自由基和活性氧（H2O2）等，使机体免受氧化损伤。（2）AsA含量的测定方法a、2,6-二氯靛酚滴定法b、2,4-二硝基苯肼分光光度法c、荧光分光光度法d、近红外分光光度法e、电位滴定法f、钼蓝比色法g、2,2-联吡啶分光光度法（3）二联吡啶法测定AsA含量的原理三、实验材料和主要试剂实验材料：菠菜叶片实验试剂：5%TCA溶液、150mmol/LNaH2PO4(PH7.4)溶液、10%TCA溶液、44%H3PO4、4%2,2-二联吡啶；3%FeCl3。四、实验步骤（一）AsA含量的测定1、标准曲线的制作配制浓度为1mmol/L的AsA标准母液，分别配制成0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7mmol/L的AsA标准液。分别取0.2mlAsA标准液，分别加入0.2mlNaH2PO4（PH7.4）溶液、0.2mlH2O，混匀，30s后，分别加入0.4ml10%TCA溶液、0.4mlH3PO4溶液、0.4ml2,2-二联吡啶溶液，0.2ml3%FeCl3溶液，37℃，60min，测A525nm。以AsA浓度为横坐标，以OD值为纵坐标，制作标准曲线。2、提取称2.5g菠菜叶片1份，将样品剪碎加入10ml5%TCA,研磨，15000xg离心10min，上清液定容至25ml。3、测定分别取0.2ml上述制备的上清液和去离子水，分别加入0.2mlNaH2PO4（PH7.4）溶液、0.2mlH2O，混匀，30s后，分别加入0.4ml10%TCA溶液、0.4mlH3PO4溶液、0.4ml2,2-二联吡啶溶液，0.2ml3%FeCl3溶液，37℃，60min，在525nm下测定OD值。根据标准曲线计算样品中AsA的含量。五、实验结果AsA标准浓度对应OD值表AsA标准浓度00.10.20.30.40.50.60.7OD值00.1020.2390.3660.5010.6550.7820.9AsA含量标准曲线y=1.3095x+0.0012R2=0.980800.20.40.60.8100.51AsA浓度(mmol/L)OD值系列1线性(系列1)抗氧化剂含量（ug/gFW）＝抗氧化剂浓度（ug/ml）*提取液体积（ml）/样品的重量（g）抗氧化剂浓度（ug/ml）=（3.214*17.613+0.0012）/1.3095=43.23ug/ml抗氧化剂含量（ug/gFW）43.23*25ml/2.500g=432.3（ug/gFW）六、分析和讨论1.抗氧化剂由植物体合成，待植物被破坏易被氧化，在实验中需迅速操作，防止抗氧化剂被氧化。2.还原型谷胱甘肽是植物细胞内另一种重要的抗氧化剂。它含有活性的巯基，极易被氧化。GSH可以预知不饱和脂肪酸生物膜组分及其他敏感部位的氧化分解，防止膜脂过氧化，从而保持细胞膜系统的完整性，延缓细胞的衰老和增强植物抗逆性。3.活性氧对许多生物功能分子有破坏作用，包括引起膜的过氧化作用。其中，植物体中也有防御系统，降低或消除活性氧对膜脂的攻击能力，即为抗氧化剂。这些抗氧化剂是天然的非酶自由基清除剂。