实验——DNA的粗提取与鉴定

实验DNA的粗提取与鉴定目的要求1.了解实验原理。2.学会DNA的粗提取和鉴定的方法，观察提取出来的DNA物质。3．通过本实验培养实验操作能力和观察能力。实验原理1.DNA在NaCl溶液中的溶解度，是随着NaCl的浓度的变化而改变的。当NaCl的物质的量浓度为0.14mOl／L时,DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。2.DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。3.DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。注意事项1.步骤3析出含DNA的黏稠物中，蒸馏水要沿烧杯内壁缓缓加入，不能一次快速倒入。2.实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌，但是在不同的步骤中玻璃棒的用法不同。实验用具鸡血细胞液（5～10mL）；体积分数为95％的冷酒精，蒸馏水，质量浓度为0．1g／mL的柠檬酸钠溶液，物质的量浓度分别为2mol／L和0．015mol／L的NaCl溶液，二苯胺试剂；烧杯（100mL，1个，50mL，500mL，各2个），漏斗，试管（20mL，2个），玻璃棒，滴管，量筒（100mL，1个），纱布，镊子，滤纸，铁架台，铁环，三角架，酒精灯，石棉网，载玻片，试管夹。课时安排一课时课前准备制备鸡血细胞液，方法是：将质量浓度为0.1g／mL的柠檬酸钠溶液100mL，置于500mL烧怀中，注入新鲜的鸡血（约180mL），用玻璃棒搅拌，使其充分混合，以免凝血。静置于冰箱内一天，使血细胞自行沉淀。（也可以用离心机离心2min（转速1000转/分）。用吸管吸去上清液。板书（提前写好）DNA的粗提取与鉴定实验原理：1.析出溶解在NaC1溶液中的DNA。2.用冷酒精提取出含杂质较少的DNA。3.DNA在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。方法步骤：1．提取细胞核物质：顺时针方向搅拌，稍快，稍重。5min2．溶解DNA：3．析出含DNA的黏稠物：蒸馏水300mL，逆时针方向搅拌，缓慢4．过滤：取黏稠物5．再溶解：顺时针方向搅拌，较慢。3min6．过滤：取滤液。7．提取出含杂质较少的DNA，逆时针方向搅拌，稍慢。5min8．DNA的鉴定：沸水浴5min教学过程引言：上节课我们通过几个验证性实验，证明了DNA是主要的遗传物质。那么DNA是什么样的物质呢？今天我们就通过实验将它提取出来，进行观察和鉴定。首先请一位同学说一说实验原理。（答：略）问：通过预习，你知道选用什么实验材料？课前准备是怎样做的？（答：鸡血细胞液。制备方法：略。）问：在制备鸡血细胞液时，所用的柠檬酸钠有什么作用？（答：防止血液凝固。）制备过程中，一定要用刚宰杀的鸡的新鲜血，并且要与抗凝剂充分混合，防止凝血。我们采用静置一天的方法，获得鸡血细胞液。下面大家在动手做实验之前先要明确几个需要注意的问题：1．要严格按照实验指导的方法步骤去操作。2．实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌，使用时玻璃棒不要碰到烧杯底，在不同的步骤中玻璃棒的用法不同，每一步的用法参照黑板上的指导去操作。3．在DNA的鉴定中，所用的二苯胺是一种有毒性的试剂，大家在使用时注意不要让药液接触到皮肤或身体的其他部位，也不要近距离观察。下面在实验进行过程中，要思考每一操作步骤要达到什么目的。（教师巡视，指导）在进行步骤1时，利用搅拌的5分钟做如下提问：问：为什么要加蒸馏水？加入蒸馏水后细胞将会怎样？（答：让细胞内溶液的浓度大于周围溶液的浓度，细胞会吸水以至胀破。）问：为什么要用力搅拌？（答：可以加速血细胞和细胞核的破裂。）所以下一步骤过滤将滤去的是细胞膜和核膜等物质。（在进行步骤3时，要向全班明确。）这一步骤是这个实验成败的关键，注意加蒸馏水的方法和使用玻璃棒的方法，千万不能太快太猛，防止打碎DNA。（教师巡视，指导）观察滤取出来的黏稠物的颜色。有的同学提取的黏稠物较少，原因可能是在溶解DNA时不充分，也可能是析出黏稠物时搅拌的快了。（教师巡视，指导）将黏稠物再溶解时一定要充分，多搅拌。以免有DNA损失。（教师巡视，指导。）加入冷酒精时动作要慢。当玻璃棒上出现丝状物缠绕时，继续慢慢搅拌。至不再增加时，取出吸干上面的水分。仔细观察丝状物呈什么颜色？（答：黄色。）这些丝状物要用二苯胺鉴定。使用二苯胺时要注意不要接触到药液。进行沸水浴时，在实验室较为通风的地方集体进行。（利用沸水浴的5min）问：步骤3中加入蒸馏水的目的？与步骤1有什么区别？（答：步骤3中加蒸馏水是使NaCl溶液的浓度逐渐降至0．14mol／L，使DNA的黏稠物析出。而步骤1加蒸馏水是为了让细胞吸水胀破。）很好。问：步骤7为什么要加50mL的冷酒精？（答：因为DNA不溶于冷酒精，而其他物质可以溶解在酒精中，使含杂质较少的DNA丝状物可以析出。悬浮于溶液中。）现在大家从水浴锅中拿出试管，比较两个试管中溶液的颜色有什么不同？（答：有丝状物的试管变成蓝色，另一试管还是原来颜色。）问：这一鉴定结果说明什么问题？（答：提取出的丝状物是DNA。）那么你看到的丝状物的粗细是不是DNA分子的直径呢？（答：不是。DNA分子直径只有2nm。丝状物是多个DNA分子聚在一起形成的）下面请同学们将实验用具，按原样摆放整齐，实验桌要保持清洁。课下将实验报告册填好。今天我们通过实验将DNA提取出来进行了观察和鉴定，那么DNA的化学组成，分子结构和复制是怎样的？我们下节课再继续研究。