沉香茶提取物的体外抗氧化和体内降血脂作用评价

现代食品科技ModernFoodScienceandTechnology2013,Vol.29,No.61198沉香茶提取物的体外抗氧化和体内降血脂作用评价陈地灵1，吴祎2，林励2，帅欧2，汪科元3，张鹤鸣1，刘颂豪1（1.华南师范大学药物研究院，广东广州510631）（2.广州中医药大学中药学院，广东广州510006）（3.广东君元药业有限公司，广东广州510623）摘要：本文以广东大面积种植的白木香叶为原料制成的沉香茶为研究对象，采用体外抗氧化法测定其水浸液的抗氧化能力，体内高血脂小鼠模型评价其降血脂作用。实验结果显示沉香茶水浸液具有较强的体外抗氧化能力和体内降血脂能力。其水浸液具有清除羟自由基（OH）、超氧阴离子（O2-）、DPPH自由基（DPPH）以及络合亚铁离子（Fe2+）和还原磷钼酸的能力，IC50分别为700.45±38.04、58.03±4.4、16.24±2.4、70.69±2.8、215.46±14.27mg/mL；能明显降低高血脂症小鼠血清中TC、TG水平和升高HDL-C水平，与模型组比较，差异具有显著性（P0.05）。关键词：沉香茶；自由基；抗氧化活性；降血脂；保健功能文章篇号：1673-9078(2013)6-1198-1201EvaluationoftheinvitroAntioxidantActivityandinvivoBloodLipid-loweringCapabilityofChenxiangTeaExtractsCHENDi-ling1,WUYi2,LINLi2,SHUAIOu2,WANGKe-yuan3,ZHANGHe-ming1,LIUSong-hao1(1.SouthernInstituteofPharmaceuticalResearch,SouthChinaNormalUniversity,Guangzhou510631,China)(2.CollegeofChineseMateriaMedica,GuangzhouUniversityofTCM,Guangzhou510006,China)(3.GuangdongJunYuanPharmaceuticalCo.,LTD,Guangzhou510623,China)Abstract:ThisexperimentstudiedthechengxiangteaextractsfromtherawmaterialsofleavesofAquilariasinensis(Lour.)Gilg.Itsradicalscavengingactivity,reducingpowerandmetalchelatingactivityweredeterminedtoassaystheinvitroantioxidantactivity,andhyperlipidemiamodelmicewereusedtoevaluatethebloodlipid-reducingcapacityofthewater-extractsfromChenxiangtea.TheresultsshowedthatthewaterextractsfromChenxiangteahavestrongfreeradicalscavengingactivity,effectivereducingpowerandchelatingability,withtheirIC50valuesbeingof700.45±38.04,58.03±4.4,16.24±2.4,70.69±2.8and215.46±14.27mg/mL,respectively.TheteaextractscanreducethelevelsofTGandTCandincreasethelevelofHDL-Cinhyperlipidemiamodelmiceserum.Comparedwiththemodelgroup,thedifferencesweresignificant(P0.05).Keywords:Chenxiangtea;freeradicals;antioxidantactivity;reducebloodlipid;healthfunction沉香为瑞香科植物白木香[Aquilariasinensis(Lour.)Gilg]含有树脂的木材，为著名的行气止痛中药[1]。目前广东省广为种植，其面积已近20万亩。然而，由于白木香需十年左右才能通过刺激逐步形成沉香，产生经济效益的时间较长。为此，人们开始对白木香其他部位进行综合利用研究。已发现白木香叶中含有多糖、氨基酸、黄酮及其苷类、酚类等，这些化收稿日期：2012-11-28基金项目：国家发改委高新技术产业化项目（国发办2011-56）；惠州市科技计划项目（2010BO20010005）作者简介：陈地灵，男，博士后，研究方向：中药现代化研究；合作导师，刘颂豪，中国科学院院士通讯作者：林励，男，研究员，博士生导师，研究方向：中药资源开发利用与新药研究学成分具有多种生理活性[2~8]。目前已有白木香叶制成的沉香茶问世[9~11]，为更好地评价此类产品的功能性质，作者对沉香茶提取物的抗氧化活性和降血脂活性进行了研究，以期为沉香叶的综合开发利用提供科学依据。1材料与方法1.1仪器SartoriusBP211D电子分析天平（d=0.00001g），德国；XS225A型分析天平（d=0.0001g），瑞士；DFY-200型粉碎机，浙江温岭市大德中药机械有限公司；HH-4型数显恒温水浴锅（上海浦东物理光学仪器厂）；KQ-500型超声波清洗器（频率40KHz；功率500W），江苏省昆山市超声仪器有限公司；TDL-2B现代食品科技ModernFoodScienceandTechnology2013,Vol.29,No.61199离心机，Anke公司；ELX808多功能酶标仪（Bio-tek），美国；Agilent8453E型紫外可见光分光光度计，Agilent公司，美国。1.2试药三羟甲基氨基甲烷（Trihydroxymethylaminomethane，Tris，newprobe批号PB110711）；邻苯三酚（Aladdinchemistryco.Ltd，批号C1207030）；抗坏血酸（SigmaAldrichChemicalCo.(USA)，批号20100226）；三氯乙酸（Trichloroaceticacid，TCA，天津市福晨化学试剂厂，批号20100201）；硫代巴比妥酸（2-Thiobarbituricacid，TBA，aladdinchemistryco.Ltd，批号49837）。沉香茶，批号20121027，市售；阳性对照药物辛伐他丁（Mercksharp&Dohmepty.Ltd，批号H20080360）；总胆固醇（Totalcholesterol，TC）单试剂型测定试剂盒，浙江东欧诊断产品有限公司；甘油三酯（Triglyceride，TG）单试剂型测定试剂盒，浙江东欧诊断产品有限公司；高密度脂蛋白胆固醇（High-densitylipoproteincholesterol，HDL-C）测定试剂盒，浙江东欧诊断产品有限公司；其余试剂均为分析纯1.3动物KM小鼠，SPF级，合格证号：SCXK（粤）2008-0020购于广州中医药大学实验动物中心。1.4实验方法1.4.1体外抗氧化能力的测定1.4.1.1样品溶液的制备取适量沉香茶，加10倍量沸水浸泡30min，滤过，即得沉香茶供试品溶液。并取市售绿茶和红茶各适量，同法制得对照样品溶液。1.4.1.2脱氧核糖法测定清除·OH能力参照文献[12]方法，在532nm处测定吸光值A1（以蒸馏水代替TBA作为空白调零），同时用1mL蒸馏水代替样本溶液时的吸光度A0作为阴性对照，按以下公式计算抑制率，并计算IC50。·OH清除率=(1-A1/A0)×100%1.4.1.3碱性邻苯三酚法测定清除超氧阴离子能力参照文献[12]方法，在420nm处测定光密度，记录数据。按以下公式计算抑制率，并计算IC50。抑制率=(A2-A1)/(A2-A0)×100%注：A0为对照，A1样品，A2样品空白。1.4.1.4清除DPPH·能力测定[13]参照文献[13]方法，在517nm波长处的吸光度，按下公式计算DPPH清除率，并计算IC50。DPPH·清除能力=[1-(A样品-A对照)/A空白]×100%1.4.1.5Fe2+络合能力测定[13]取1mL不同质量浓度样品溶液（0~40mg/mL）与3.7mL甲醇和2mmol/LFeSO4·7H2O0.1mL混合，反应30s后，加入5mmol/L亚铁嗪0.1mL，混合均匀后室温下反应10min，在波长562nm处测得样品吸光度。以样品本身溶剂为空白样本，每个样品平行3次，取平均值，并计算IC50。络合能力%=(A样品-A0)/A0×100%注：A0是空白样本吸光度，A样是样品吸光度。1.4.1.6磷钼酸测定抗氧化能力试管中加入0.14mL不同浓度样品液，4mL试剂液（0.16mol/L硫酸0.28mmol/L磷酸钠和4mmol/L钼酸铵），混匀后置于95℃水浴中恒温90min，在695nm波长下测其吸光度A。空白液用0.14mL溶剂代替样品液。所有测定平行进行3次。空白调零：试管中依次加入1mL3.00mol/LH2SO4溶液，1.0mL0.14mmol/LNa3PO4溶液和1.0mL0.02mol/L钼酸铵溶液。再用蒸馏水定容至5.0mL，摇匀。加塞于95℃水浴中加热90min。取出冷却后，备用。实验管：试管中依次加入1mL3.00mol/LH2SO4溶液，1.0mL0.14mmol/LNa3PO4溶液和1.0mL0.02mol/L钼酸铵溶液。再加入1.0mL不同浓度的样品，再用蒸馏水定容至5.0mL，摇匀。加塞与95℃水浴加热90min，取出冷却后用空白调零在695nm波长下测定。抑制率=[(A0-A样)/A0]×100%注：A0是对照吸光度，A样是样品吸光度。1.4.2体内降血脂活性评价取KM种小鼠48只，18~22g，雌雄各半，喂养普通饲料10d，眼内眦取血测定其正常血清TC，TG和HDL-C含量，根据TC水平，采用分层随机抽样的方法将小鼠分为4组，每组12只，雌雄各半，尽量保持体重和TG均衡。依次分组为普通饲料空白对照组、高脂饲料模型组、沉香茶水提物组、辛伐他丁阳性药物对照组。灌胃给于药物，辛伐他丁剂量按照人体推荐用量折算，沉香茶水浸提物剂量按生药量计100mg/d，基础饲料空白组饲养普通饲料，其他组均饲养高脂饲料（由广东省实验动物中心研制）。实验至15d和36d分别采血测定血清TC，TG和HDL-C含量，采血前禁食16h，其测定方法均为按试剂盒检测说明严格进行。2结果与讨论2.1体外抗氧化能力测定结果活性氧化群（ROS）随着细胞的有氧呼吸而产生，现代食品科技ModernFoodScienceandTechnology2013,Vol.29,No.61200它是生命体正常代谢的产物，具有信号转导作用，人体中含有非酶促的生物分子和蛋白质生物体，作为抗氧化剂和自由基清除剂，对机体起保护作用，而在各种辐射、有害化学物质（尤其是环境污染）暴露等条件下，身体中都会产生大量的内源性活性氧自由基，最终会引起机体扩散性疾病的发生如：恶性的肿瘤，风湿性关节炎，白内障，帕金森氏症和阿尔茨海默氏症，高血压，糖尿病，动脉粥样硬化等[14~15]。因此除了机体自身抗氧化外，需日常多摄入的抗氧化补充剂如：抗坏血酸、胡萝卜素、维生素E、黄酮类和酚类等天然的生物活性化合物，这类活性成分能提供电子对，螯合金属催化剂，激活抗氧化酶，抑制氧化，同样能清除活性氧自由基，防止自由基引起的变异。基于上述天然抗氧化剂良好的作用效果，激发了人们从药用植物中提取的生物活性物质进行探索的兴趣。近年来，合成药物因副作用而受到限制，寻找代替合成药物的天然抗氧化活性物质日趋重要，黄酮类化合物具有降低