槐米中芦丁的提取分离与鉴定(1)

天然药物化学实训项目一槐米中芦丁的提取分离与鉴定实训目的能够运用碱溶酸沉法和结晶法的操作技术对槐米中的芦丁进行提取分离能够运用酸水解的操作技术对槐米中芦丁进行水解能够运用纸色谱、薄层色谱法和化学法鉴别芦丁、槲皮素和糖类化合物得到两个单体化合物OHOOHOOHOHOH5733'4'实训结果芦丁槲皮素OHOOHOOOHOHOOHOHOHCH2OOOHOHOH项目一芦丁的提取分离与鉴定子项目一槐米中芦丁的提取子项目二槐米中芦丁的精制子项目三水解芦丁得到槲皮素子项目四芦丁和槲皮素的鉴别相关内容介绍芦丁的提取分离与鉴定槐花槐米槐花为豆科植物槐SophorajaponicaL．的干燥花及花蕾相关内容介绍芦丁的提取分离与鉴定性能：苦，性微寒。功效：凉血止血、清肝泻火应用：用于便血、痔血、血痢、崩漏、吐血、衄血、肝热目赤、头痛眩晕等。主要含有芦丁、槲皮素，还含少量皂苷类及多糖、粘液质等。近代研究表明槐米含芦丁可高达23.5%，槐花开放后降至13.0%。相关内容介绍芦丁的提取分离与鉴定芦丁OHOOHOOOHOHOOHOHOHCH2OOOHOHOH性状：浅黄色粉末或极细微淡黄色针状结晶。溶解度：在冷水中1:10000，沸水中1:200；冷乙醇中1:200，沸乙醇中1:60。沸甲醇中1:7。酸碱性：芦丁分子中具有较多酚羟基，显弱酸性，易溶于碱液中，酸化后又可析出。相关内容介绍芦丁的提取分离与鉴定芦丁OHOOHOOOHOHOOHOHOHCH2OOOHOHOH用于治疗毛细管脆弱引起的出血病，并用作高血压的辅助治疗剂。相关内容介绍芦丁的提取分离与鉴定槲皮素性状：黄色针状结晶（稀乙醇）。溶解度：冷乙醇中1:300，热乙醇中1:23。可溶于甲醇、丙酮、乙酸乙酯、冰乙酸、吡啶，不溶于水、氯仿、乙醚、苯和石油醚等。OHOOHOOHOHOH5733'4'思考问题1、加入硼砂目的是什么？2、为什么要加入石灰水，在芦丁的提取中能起到什么作用？3、酸沉pH值为什么不宜过低？子项目一槐米中芦丁的提取那个天然产物的实验，要算下得率,粗芦丁重量/槐米的重量；精制芦丁的重量/粗芦丁的重量；并且计算下，每克芦丁分子中槲皮素和糖所占的百分比。所需的试剂和设备1、样品：槐花米试剂：硼砂、CaO、浓盐酸仪器：每一组需要：电炉、1000ml烧杯、小烧杯、500ml烧杯、玻璃棒、pH试纸、玻璃漏斗、滴管公共需要：棉花、天平子项目一槐米中芦丁的提取搅拌下加入石灰乳加0.4%硼砂沸水200ml槐花米（25g）调节pH8-9加热保持微沸20min趁热用棉花滤过滤液残渣在60-70度下，用浓盐酸调pH3-4静置提取芦丁的提取分离与鉴定补充水分，保证pH值2010.11月，实验结果：食品091班30克槐米制得的粗芦丁大约5－8克不等。思考问题先进行项目二，冷却后等沉沉析出时候，再讨论项目31、以热水重结晶法精制芦丁的依据是什么？2、重结晶的操作要点有哪些？子项目二槐米中芦丁的精制和水解需要的仪器设备每组需要抽滤设备（需要1000ml的抽滤瓶）、滤纸、玻璃棒、1000ml烧杯、加热回流设备（电热套、冷凝管、烧瓶）、小烧杯、浓硫酸、浓盐酸第一次实验所得滤液滤液沉淀（粗品芦丁）重结晶抽滤，少量水洗涤沉淀至中性取粗制芦丁3g,加蒸馏水400ml,煮沸10分钟后，趁热抽滤残渣滤液冷却（可以用流动水快速冷却）静置精制芦丁（备用）芦丁的提取分离与鉴定提取与精制抽滤，干燥、称重食品091班得到的精制芦丁大约（粗芦丁4克精制后大约？）减压抽滤装置减压过滤操作减压过滤也就是抽滤,利用抽气泵使抽滤瓶中的压强降低,达到固液分离的目的.装置:布式漏斗,抽滤瓶,胶管,抽气泵,滤纸过程:1、安装仪器,检查布式漏斗与抽滤瓶之间连接是否紧密，抽气泵连接口是否漏气；2、修剪滤纸，使其略小于布式漏斗，但要把所有的孔都覆盖住，并滴加蒸馏水使滤纸与漏斗连接紧密；3、将固液混合物转移到滤纸上；4、打开抽气泵开关，开始抽滤。5、过滤完之后，先抽掉抽滤瓶接管，后关抽气泵。（防止倒吸）思考问题1、芦丁是？苷（N-苷、O-苷、S-苷orC-苷?2、苷键的裂解可以用什么方法？最常用的方法是？影响酸水解速度的因素有哪些？2、芦丁水解后的产物是什么？3、如何进行苷类酸水解操作，如何分离得到苷元成分？子项目三水解芦丁得到槲皮素子项目三水解芦丁得到槲皮素芦丁的提取分离与鉴定精制芦丁1.5g加入2%硫酸或者(1mol/lHCL)100ml，加热回流30min(从有液滴滴下开始计时），放冷静置，抽滤沉淀滤液粗品槲皮素作糖的检识用注意观察整个过程的现象！(溶液澄明度和颜色的变化)为什么出现这种情况？水解抽滤洗涤沉淀干燥称重具体做法：芦丁水解方法：取精制芦丁1.5g，研细后置于250ml圆底烧瓶中，加入2％硫酸或（1mol/lHCL)100m1，加热回流30min，瓶中浑浊液逐渐变为澄清的棕黄色液体，最后生成鲜黄色沉淀。放冷沉淀，抽滤，保存滤液（应为澄清无色液体），作为糖的检查，沉淀物为芸香苷苷元（槲皮素），用蒸馏水洗至中性，抽干水分，晾干，称量。得粗制槲皮素，再用乙醇重结晶得精制槲皮素。1mol/lHCL配法:取约90毫升浓盐酸定容至1000毫升注意观察现象：未加热时，瓶内为混悬液（芦丁不溶于冷水），加热后，混悬液逐渐变为澄清液（芦丁易溶于热水），继续加热，有鲜黄色沉淀析出（槲皮素不溶于水）滤液处理：取芦丁水解后的滤液15m1，加氢氧化钡粉中和至中性（搅拌下进行）滤去白色的硫酸钡沉淀(漏斗滤纸），滤液在沸水浴上蒸干后，加1－2ml乙醇溶解，作为糖的供试液。（如果加氢氧化钡加过量后可以加少量的硫酸回调pH)硫酸可以同时沉淀Ba2+Ba2++SO42-========BaSO4↓使芦丁水解后的滤液更纯净学生做的结果：芦丁的得率大约是：20-25%精制芦丁的得率是大约87%槲皮素占芦丁分子是：13%到20思考问题1、纸色谱的原理及操作要点？2、黄酮类化合物有哪些显色方法，各针对哪类黄酮？3、黄酮类薄层色谱中，经常用到的吸附剂有哪几类？各自的原理有什么不同？4、黄酮类薄层色谱中常用到AlCl3乙醇溶液显色？显色后一般呈什么颜色？5、薄层色谱的操作要点有哪些？子项目四芦丁和槲皮素的鉴别所需要的药品和设备：氢氧化钡、葡萄糖、鼠李糖、正丁醇、乙酸、苯胺、邻苯二甲酸盐、无水乙醇、甲醇、乙酸乙酯、甲酸、AlCl3、镁粉、浓盐酸、α-萘酚溶液、浓硫酸、三氯化铁、紫外灯、新华1号滤纸、点样毛细管、水浴锅、硅胶G预制板11块、分液漏斗喷雾器几个每组需要：1个蒸发皿、玻璃漏斗、玻璃棒、10ml试管8支、2个小烧杯、胶头滴管需要配制的试剂:1苯胺—邻苯二甲酸试剂配法：苯胺0.93g和邻苯二甲酸1.66g溶于100ml水饱和的正丁醇中。（我们实验需要配100ml）(用分液漏斗中加入50ml水和100ml正丁醇震摇后静置取上层即为水饱和的正丁醇）210%α-萘酚乙醇溶液25ml32%三氯化铁乙醇溶液20ml4、展开剂：醋酸乙酯-甲酸-水（8：1：1）（我们实验需要配300ml5、5组配一瓶配200ml正丁醇-乙酸-水（4：1：5）放到分液漏斗中，平衡后取上层备用配两瓶6、2%AlCl3乙醇溶液100ml7、硅胶预制板，用之前105度烘半个小时。子项目三芦丁和槲皮素的鉴别芦丁的提取分离与鉴定水解所得滤液20ml用饱和Ba(OH)2调PH值至中性，折叠滤纸过滤残渣滤液蒸干，放冷加2-3ml乙醇溶解供试品溶液纸色谱糖的鉴定糖的纸色谱鉴定标准品：葡萄糖、鼠李糖展开剂：正丁醇-乙酸-水（4：1：5）上层液显色剂：苯胺—邻苯二甲酸试剂。105℃烘10min显色(显棕色或棕红色斑点)芦丁的提取分离与鉴定新华一号滤纸标本缸倒入缸内约30毫升的展开剂糖的纸色谱鉴定标准品：葡萄糖、鼠李糖展开剂：正丁醇-乙酸-水（4：1：5）放到分液漏斗中，平衡后取上层备用。显色剂：苯胺—邻苯二甲酸试剂。105℃烘10min显色(显棕色或棕红色斑点)芦丁的提取分离与鉴定试验记录：１２３当溶剂走到溶剂前沿6－8cm即可，约需40分钟粘附纸色谱，并计算斑点的Ｒf值芦丁的提取分离与鉴定定性反应芦丁供试品溶液：取精制芦丁约5mg，用5ml甲醇（无水乙醇）使溶液，备用。槲皮素供试品溶液：取粗槲皮素约5mg，用5ml甲醇（无水乙醇）使溶液，备用。其余试剂：镁粉、浓盐酸、10%α-萘酚溶液、浓硫酸、2%三氯化铁乙醇溶液准备3支试管（一个空白管，样品用蒸馏水代替，一个是芦丁、一个是槲皮素）试剂试验现象结论及解释芦丁槲皮素盐酸-镁粉反应Molish反应FeCl3反应试验记录定性反应盐酸-镁粉反应将样品溶液1ml，先滴加1－2滴浓盐酸再加入少许镁粉振摇，1-2min内，观察颜色变化。（注意顺序）Molish反应将样品溶液1ml，加入与样品等体积10%α-萘酚溶液，倾斜试管，摇匀，沿管壁滴加适量浓硫酸（约2ml），至分层注意观察两界面产生的变化。（不要摇动）黄酮母核苷类芦丁的提取分离与鉴定FeCl3反应酚羟基将样品溶液1ml，加入1～2滴2%Fecl3溶液，观察现象。薄层色谱鉴别样品：分别取精制的芦丁、槲皮素适量，加95%乙醇溶解成每1ml含1mg的溶液，备用。展开剂：醋酸乙酯-甲酸-水（8：1：1）显色剂：2%AlCl3乙醇溶液，105℃加热至斑点清晰，置紫外灯(365nm)下观察。颜色直接观察AlCl3喷雾Rf值日光UV日光UV样品芦丁槲皮素芦丁的提取与定性反应实验记录注意：硅胶预制板，用之前105度烘半个小时。实验规则1、预习实验内容：要明确实验目的与要求。对处方中药物性质、配制原理、操作步骤、操作关键等，做到“心中有数”，并合理安排实验时间。2、遵守实验纪律：应保持实验室内肃静，不得无故迟到或早退，不得擅离实验操作岗位，甚至高声谈笑。如发生差错事故或异常现象，应随时报告指导教师，查明原因，及时解释。注意安全，严防火灾、烧伤或中毒事故发生。3、杜绝差错事故：称取药品时，要在拿取、称量和放回时进行核对。称量完毕应盖好瓶塞，放回原处。实验成品应写明名称、规格、配制者、配制时间及班组号，交实验指导教师验收。实验规则4、爱护仪器药品：实验仪器、药品应妥善保管、存放和使用。如有破损缺少，必须立即报告实验指导教师，并填写仪器药品报损表，然后到准备室补领。实验小组合用的仪器药品，每次实验前应检查核对后再取用。实验指导教师对破损缺少的仪器药品应查明原因，按本院校对仪器药品破损处理办法提出处理意见。实验规则打破玻璃器皿和试备要赔偿！5、保持室内整洁：学生进入实验室必须穿戴工作衣帽。实验完毕应将本组实验台、实验架等整理洁净方可离开。实验小组轮流值日，主要负责实验室内、走廊地面、门窗的卫生整洁，以及废物缸的清倒工作，将水、电门窗关好，经指导教师验收后再离开实验室。6、写好实验报告：实验报告是考查学生分析总结实验资料能力和写作能力的重要方面，亦是评定实验成绩的主要依据实验规则实训报告格式参照书P139和P216页，具体要求老师再规定！