果蝇唾腺染色体标本的制备和观察

果蝇唾腺染色体标本的制备和观察摘要本实验通过用黑腹果蝇的三龄幼虫的唾腺，来观察果蝇的唾腺染色体。目的在于学会辨认果蝇的唾腺的特征和识别各条不同的染色体以及掌握其基本的特征。了解唾腺染色体的作用和意义。１．引言果绳唾睬染色休为多线染色休,形成原因是由于染色休不断复制,但细胞不分裂从而形成了多线染色休,其上每一横纹相当于一个顺反子,横纹的形态特征有着种的特异性和稳定性。因此果蝇唾睬染色休成为了研究染色休结构、基因定位、基因功能的重要实验材料。1881年Ba}biani首次在摇蚊幼虫的唾腺细胞中发现多线染色体.20世纪30年代Painter首先用果蝇唾腺体作为遗传学数据在细胞学上的验证材料,他研究了多线染色体上的横纹跟基因的关联性以及染色体的物种特异性。Bridges也对果蝇唾腺体进行了广泛详细的研究,制成一系列与已有的基因连锁图相对应的果蝇细胞学图。２．实验材料和方法２．１实验材料受精的雌果蝇、盖玻片和载玻片、镊子、解剖针解剖镜和显微镜、醋酸地衣红染液、指甲油生理盐水、香柏油、镜头纸。２．２实验方法２．２．１实验材料的获取和处理（1）三龄幼虫的培养：取20-30只受精的雌果蝇于培养基中，在22摄氏度的恒温冰箱中饲养7天得到肥大的果蝇三龄幼虫。（2）唾腺的剥取和制片：取果蝇三龄幼虫于一滴加了生理盐水的载玻片上，用两根解剖针，一根扎住口器，一根扎住体前1/3处像两端拉唾腺腺体随之而出。唾腺是一对透明的茄子状腺体，外有白色的脂肪组织（不透明）在腺体的前端各延伸出一细管汇合在一起与口器相连，相对于其他组织唾腺最为透明因此在黑色背景下其他组织呈白色,而唾腺是半透明的,辨别时应在明亮的光源下进行，果蝇的唾腺细胞很大，在解剖镜下可以看见其轮廓。幼虫被拉断时唾腺也可能随之被拉出,也可能仍连在口器上,这时可用解剖针轻轻将其挤压出来。拉出的腺体有可能仍为完整的左右对称的长茄状囊体,也可能分开、断裂。去除幼虫其它组织部分，并把唾腺周围的白色脂肪剥离干净。快速的将唾腺染色体转移到另一干净的载玻片上，每片2-3个，然后用醋酸地衣红染液染色10-15分钟，用吸水纸吸去多余的染液盖好盖玻片，敲散细胞，压匀，涂上指甲油。然后镜检。３．实验结果理想情况下，果蝇的唾腺染色体应该是清晰的5条长臂加一条短臂。5条长臂分别为X、2R、2L、3R、3L和短臂4号染色体。X染色体明显的特征是在接近末端有一段永久性的膨突，另外，X染色体和4号染色体都仅仅只有一条臂且X染色体是除了4号染色体之外的最短的一条臂。4号染色体最短，很容易分辨出来；其次2号和3号的染色体的两条臂不容易区别，但是，仔细的看还是有差别的，根据理想的染色体图，我们可以发现，一般情况下3L末端有一个缢缩，杨大翔在“果蝇唾腺染色体的制备与观察实验”的背景知识一文中用图片的形势展示了各条臂的末端的主要的特点，可以根据图示来辨别各条臂。２Ｒ３Ｒ引自杨大翔“果蝇唾腺染色体的制备与观察实验”的背景知识2005４．讨论４．1实验总结做好本次实验，材料很重要。为获得良好的观察材料，我们要使果蝇幼虫处于“养尊处优”的状态，长得肥肥胖胖。用雌果蝇于22摄氏度恒温冰箱中培养7天的到的三龄幼虫的效果最佳，实验用的黑腹果蝇品种最好为野生和黑檀，这两种唾腺染色体大，易观察；在本实验中，我们用醋酸地衣红染液代替了传统的卡宝品红，省去了染色的步骤；在实验中，分离唾腺时由于操作的熟练性，转移时间间隔较长，期间唾腺很容易干燥，我们可以在载玻片上滴加一定量的生理盐水，在染色时吸干就行；压片时盖玻片不能动，有一些人在写关于这个实验时说的是揉动盖玻片，但是这样很容易使染色体断裂，此法不科学。４．2唾腺染色体Painter研究发现，每种生物的唾腺染色体上的条纹是恒定的、特异性的；将突变体的唾腺染色体与野生型的比较,就能将相应的基因定位在唾腺染色体臂上,这代表一个基因在染色体上的实际位置。根据这个性质，Bridges制作了第一张果蝇的唾腺染色体图谱，他规定：第1染色体(X染色体)为1一20区,第2染色体为21一60区(左臂21一40,右臂41一60),第3染色体为61一100区(左臂61一80,右臂81一100),第4染色体为101一102。每一区又分A一F6段,每一段又按照横纹的数目标记数字1、2、3.··…,使每一条横纹都有一定的标号,如6A2是指X染色体的第6区A亚区第2条横纹。现在国际上已经有成熟的果蝇唾腺染色体图谱供研究者参考。果蝇的性别决定是Ｘ、Ｙ型的，但是在雄虫的唾腺染色体中我们没有发现属于Ｙ染色体的臂，那么Ｙ染色体被整合到哪里去了呢，前苏联的女细胞遗传学家Prokofyeva-Belgovskaya(1937)系统地研究了并回答了这个问题。她认为部分Y染色体臂与X臂近染色体中心的区段联合,而臂的其他部分则参与染色中心的形成。与其他臂共同构成染色中心。染色中心由于其形成的是由各染色体的着丝粒中的异染色质共同组成，其上不形成条纹，非常的杂乱无章，不形成固定的条纹，目前也没有研究出什么特定的规律来。参考文献［１］张志达．如何做好,’果蝇唾腺染色体观察”实验．廊坊师专学报(自然科学版)1997年第3期．［２］杨大翔．＂果蝇唾腺染色体的制备与观察实验＂的背景知识．生物学教学2005年(第30卷)第4期．［３］许祖国．遗传学研究的一种重要的实验材料—果蝇唾腺染色休．九江师专学报(自然科学版)1996年12月第15卷第6期．［４］[2]杨大翔遗传学实验第二版,科学出版社2011年1月．附：唾腺染色体在现代遗传学中的作用１.以果蝇为模型研究癌转移机制方面２.唾腺染色体在热休克蛋白研究方面