第三章 人源性生物制品

LOGO生化制品技术LOGO第三章人源性生物制品生化制品技术一、人源性生物制品特点与种类（一）人源性生物制品特点:1.效价高、疗效可靠（纯化生物制品效价提高）2.安全性好、不易产生副反应（防止感染）3.稳定性好（相对原料）4.资源有限（通过现代生物技术解决）第四章人源性生物制品（二）人源性生物制品种类:目前可作为生产原料的人体成分限于血液、尿液、胎盘、毛发等。1.血液制品（全血、血蛋白、血细胞）2.尿液制品（尿激酶、尿抑胃素、HCG）3.胎盘制品（人胎盘丙种球蛋白、胎盘白蛋白、HCS）4.人体液体细胞中的活性成分（IFN，细胞因子、白介素）血液制品血液制品：由健康人的血或血浆，特异性免疫人血浆分离、纯化或由基因工程技术制备的血蛋白或血细胞等成分。（1）全血来源：采血后添加抗凝剂（枸橼酸盐-葡萄糖溶液）使用：主要用于补充红细胞和血容量（失血超过40%），作用迅速。缺点：保存时间短，使用受限（裂解残留物），免疫反应，传播疾病主张成分采血，成分输血：按照“缺什么，补什么”的原则输用，以达到治疗病人的目的。纯度高，针对性强，提高输血疗效并减少体循环负担减少输血的不良反应和病毒的传播一血多用，充分利用宝贵的血液资源2.血液成分制品、“少浆血”常用2、浓缩红细胞常用4、滤过红细胞常用5、年轻红细胞少用6、照射红细胞少用白细胞1、白细胞2、粒细胞去淋巴细胞血小板1、单（机）采血小板2、浓缩血小板---表1人血液成份及其制品-----------------------------------------------------------------------------------------------血液成份（无形）血浆制品备注-----------------------------------------------------------------------------------------------·血浆1、普通冷冻血浆2、新鲜冷冻血浆白蛋白1、白蛋白制品球蛋白1、静注丙种球蛋白多用2、肌注丙种球蛋白少用凝血因子VIII1、人凝血因子VIII浓缩剂多用2、重组人因子VIII制剂少用3、猪凝血因子VIII浓缩剂---表1人血液成份及其制品-----------------------------------------------------------------------------------------------血液无形成份血浆制品备注-----------------------------------------------------------------------------------------------凝血因子II、VII、1、凝血酶原复合物（PCC）2、人因子IX浓缩剂IX、X3、重组人凝血因子IX4、转基因因子IX制剂纤维蛋白原1、纤维蛋白原制剂2、冷沉淀（因子I）抗凝血酶1、抗凝血酶制剂其他（特殊免疫相应制剂球蛋白、转铁蛋白等）---①“少浆血”指红细胞比容（Hct）在53%~60%并剩有部分血血浆的血液。适用于•血容量丢失在20%~25%（1000~1500ml）的出血。•慢性贫血，如再障、缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血、肾性贫血、消化道失血所致贫血等。②浓缩红细胞（压积红细胞）指Hct在70%~80%和剩有少量血浆的血液。适应证同“少浆血”。（1）红细胞制剂②浓缩红细胞（压积红细胞）浓缩红细胞可以在全血有效保存期内任何时间分离出部分血浆制备而成，一般用二联袋采集的全血制备浓缩红细胞。（1）用二联袋采集1单位或2单位全血于主袋内；（2）将全血在4℃±2℃离心，离心力5000×g,离心7分钟，沉淀红细胞；（3）取出离心后全血，将部分血浆分入空的转移袋内（4）用热合机切断塑料袋间的连接管，制备成浓缩红细胞。③洗涤红细胞指用生理盐水洗涤三次的红细胞，本品中仅含1%的血浆蛋白和20%的白细胞。适用于下列疾病伴贫血免疫性疾病；自身免疫性溶血性疾病；阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）；输血性溶血反应；新生儿溶血病的换血疗法；④照射红细胞、冻红细胞、年轻红细胞主要为浓缩白细胞适应证：各种原因所致中性粒细胞低于0.5×109/L，虽然中性粒细胞在0.5×109/L以上，但伴有高烧或感染，特别是单用抗生素不能控制者。新生儿败血症（2）白细胞制品剂量：有效输注量是每天至少1010个中性粒细胞。不良反应：非溶血性输血反应，如寒战、发热、呼吸困难，甚至出现肺水肿和休克等。注：粒细胞离体很快失去功能，高效抗生素及细胞集落刺激因子出现、白细胞制品应用减少。白细胞还用于生产干扰素（一）制品的种类1、浓缩血小板悬液（PC）400ml新鲜全血分离制成的PC，规定内含4.8×1010个血小板，容量50~70ml。2、单采血血小板一般每袋含2~3×1011个血小板。（3）血小板制品浓缩血小板：1）全血采集于三联袋或四联袋主袋内；2）采后4-6小时内，于22℃±2℃存放或轻度离心，以离心力1220×g离心5分钟或700×g离心10分钟，使红细胞下沉，大部分血小板保留于血浆中为PRP层；3）将上层PRP分入第二转移袋内；4）把第三袋内的红细胞保存液加入主袋压积红细胞内，用热合机热合切断主袋与第3转移袋之间的连接塑料管。在主袋与第2血袋间塑料管内留取红细胞与血浆为血样品管；）把第2PRP袋协同第三转移袋重度离心，温22℃±2℃，以离心力4650×g，离心6分钟，或3000×g，离心20分钟，使血小板下沉于底部形成沉淀；6）分离上层少血小板血浆进入第3转移袋内，留下20-30ml(1单位全血所分出的血小板）或50-70ml（2单位全血所分血小板）血浆于第二血小板袋内；7）制备的血小板应放入血小板保存箱内。血细胞分离机采集血小板目前各种型号的血细胞分离机已广泛应用采供血机构和医院。严格按照细胞分离机的操作程序进行操作，能获得高浓度和高纯度的血小板。血小板制品输注适应证：•再障、急性白血病和恶性肿瘤行强烈化疗、放疗后血小板低于20×109/L，或有其他危及生命的严重出血倾向者。•心肺旁路手术行体外循环和骨髓移植患者于移植前血小板降至50×109/L以下者。•急性免疫性血小板减少，在分娩、手术、创伤或有危及生命的严重出血时。•原发性或继发性血小板功能异常症，在有自发性出血倾向或在分娩、创伤、手术时。•大量输注贮存血液或药物所致血小板减少性出血。（4）血浆制品血浆：常用的血浆种类包括新鲜液体血浆、新鲜冷冻血浆（FFP）、普通冷冻血浆、冷沉淀这四种。前种是从采血之日起5天内从全血中制备的血浆，但缺少因VIII、因子V和血小板；后种是采血后6小时之内制备的血浆，但缺乏血小板。1）新鲜液体血浆：制备工艺：①用三联袋采集全血，于采后6小时内经第一次5000×g的离心力离心7分钟，分出上层血浆。再将血浆第二次以5000×g的离心力离心5分钟，分出清除红细胞成分的血浆即为新鲜液体血浆；②制备浓缩血小板后所得到的少血小板血浆和制备血小板、白膜后剩余的少血小板血浆可用作新鲜液体血浆。适用于：扩容、补充凝血因子）新鲜冰冻血浆(freshfrozenplasma,FFP)制备工艺：新鲜液体血浆立即放入-50℃的速冻箱，在最短的时间内迅速冷冻血浆，经完成速冻的血浆再放入-20℃以下的冰箱保存。从采血到冰冻过程应在8-24小时之内完成。)新鲜冷冻血浆适应证:•单纯凝血因子缺乏、口服抗凝剂过量引起的出血•肝病患者获得性凝血障碍•大量输血伴发的凝血障碍•抗凝血酶III（ATIII）缺乏•免疫缺陷综合征•血栓性血小板减少性紫癜(TTP)禁忌证:同普通冰冻血浆3）普通冷冻血浆FP①制备工艺：普通液体血浆立即放入-20℃以下的冰箱内冷冻保存新鲜冰冻血浆保存一年后，可改为普通冰冻血浆；制备冷沉淀后所得的血浆在-20℃以下冰箱冰冻并保存，也可作普通血浆之用。②适应证：严重肝脏疾病、凝血因子缺乏香豆素类药物作用的逆转、心脏直视手术、大量输血、弥散性血管内凝血（DIC）烧伤，抗凝血酶III（ATIII）缺乏症、血栓性血小板减少性紫癜（TTP）、血浆置换禁忌证：对血浆蛋白有过敏者，血容量正常的老、幼患者，心功能不全者。、血浆蛋白制品血浆蛋白制品：人血浆中分离制备的有明确临床疗效和应用意义的蛋白总称。近年来已知的血浆蛋白质有二百多种，有些蛋白质的功能尚未阐明。将其中主要的血浆蛋白质含量及功能归纳如表10-1。（1）白蛋白白蛋白（又称清蛋白，albumin,Alb）：由肝实质细胞合成，在血浆中的半寿期约为15-19天，是血浆中含量最多的蛋白质，占血浆总蛋白的40%-60%。白蛋白制剂的种类：①人血白蛋白②血浆蛋白成分两者的区别主要在于含白蛋白的纯度不同，前者为96%以上，后者为83%以上。制备工艺：①用乙型肝炎疫苗免疫的健康人血浆，经低温乙醇蛋白分离法提取，并经病毒灭活处理制成。②用重组DNA技术制备重组血浆蛋白制剂。：8%，PH：7.2，T：-3℃，r/2：0.14，PC：5.1%上清Ⅰ沉淀ⅠEOH：25%，PH：6.9，T：-5℃，r/2：0.09，PC：3.0%上清Ⅱ+Ⅲ沉淀Ⅱ+Ⅲ（供分离Ig用）EOH：18%，PH：5.2，T：-5℃，r/2：0.09，PC：1.6%上清Ⅳ-1沉淀Ⅳ-1Cohn6法工艺流程上清Ⅳ-4沉淀Ⅳ-4EOH：40%，PH：4.8，T：-5℃，r/2：0.11，PC：0.8%上清液Ⅴ沉淀ⅤEOH：40%，PH：4.5，T：-3℃，PC：3%上清液不纯物质EOH：40%，PH：5.0，T：-5℃，r/2：0.09，PC：10%Cohn6法工艺流程EOH：40%，PH：5.2，T：-5℃，r/2：0.01，PC：2.5%上清液白蛋白Cohn6法工艺流程问：低温乙醇法中影响蛋白质沉淀反应的因素？应用：①维持和调节血液渗透压白蛋白产生的渗透压大而粘度低，是最有效的血容扩张剂。②为组织提供营养白蛋白能结合阳离子，也能结合阴离子，故能输送性质不同的物质，如脂肪酸、激素、金属离子、酶和药物③运输和解毒结合有毒物质运送至解毒器官，然后排出体外；A、pH当pH位于等电点时，蛋白质的溶解度最小，所以最易沉淀以根据蛋白质的等电点不同顺序沉淀出不同的血浆蛋白。通常低温乙醇法是在pH4.4-7.4之间进行分离.B、温度温度低，蛋白质的溶解度低。溶液中加入乙醇，因乙醇的水合作用，会产生放热现象，而温度升高可能造成蛋白质的变性，所以在低温乙醇工艺中，整个过程均应控制在0～-8℃。如温度控制不当，轻则会影响蛋白质的得率，重则引起蛋白质变性。C、蛋白质浓度如果溶液的蛋白质浓度较大，容易引起多种蛋白共同沉淀，所以在分离过程中，可将蛋白质溶液作适当的稀释，以减少蛋白质之间的相互作