维生素B12注射液的定性分析与定量分析.doc

渤海大学实验报告用纸（第页共页）渤海大学学生实验报告课程名称：仪器分析实验任课教师：实验室名称：理工二房间号207实验时间：2013年4月3日学院化学化工与食品安全学院专业班级姓名学号同组人实验项目维生素B12注射液的定性分析与定量分析组别实验成绩一、实验目的和要求1.掌握紫外可见分光光度计的结构及基本操作；2.掌握吸收曲线的绘制；3.掌握利用分光光度法进行定性鉴别及定量检测的方法。二、实验原理物质的紫外吸收光谱是物质分子中生色团和助色团的特征表现，例如具有共轭双键化合物、芳香烃化合物在紫外区都有强烈吸收。维生素B12是含有Co2+的有机化合物，分子量为1355.38.分子式：C63H88CoO14N14P.维生素B12注射液为粉红色至红色的澄明液体。维生素B12在可见光550处有吸收，VB12中苯环等含有共轭双键，具有吸收紫外光的性质，在278nm和361nm处也有最大吸收。1.定性分析（1）样品与标准比较，吸收峰位置不超过+/-2nm。（2）最大吸收峰与相邻吸收峰的比值是否在一定范围内。维生素B12有3个吸收峰，分别位于278nm、361nm、550nm。(A1%cm361nm)/(A1%cm278nm)=1.70-1.88(A1%cm316nm)/(A1%cm550nm)=2.82-3.452.定量分析（1）标准比较法：根据朗伯-比尔定律：A=Kbc当c=1g/100ml,b=1cm时，A=Ebc,E单位：100ml/(g*cm)国家药典中规定：A标=E1%1cm入361nm用标准比较法计算：A标/A样=c标/c样c样=c标*（A样/A标）式中，c标=1g/100ml;A标=207;A样:通过测试得到；样品标示量（样品）=c样*稀释倍数=对照样品标示量%=样品标示量（样品）/样品标示量（标准）*100%式中，样品标示量（标准）=500ug/ml,对照样品标示量%=90%-110%,合格。（3）标准曲线法在测定样品中的组分含量时，要用与绘制标准曲线完全相同的色谱条件作出色谱图，测量色谱峰面积或峰高，然后根据峰面积和峰高在标准曲线上直接查出注入色谱柱中样品组分的浓度渤海大学实验报告用纸（第页共页）三、实验仪器与药品1．实验仪器UV-1600型紫外-可见分光光度计一台;容量瓶（10ml）一只吸量管（5.00ml、1.00ml）一只；烧杯一个；滴管一个；洗耳球一个；2.实验药品维生素B12注射液（样品）：500ug/ml(医用)；维生素B12注射液（标准溶液）：50ug/ml；四、实验步骤1、溶液配制用加样器移取维生素B12注射液500μl，转移至10ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。2.VB12标准系列溶液的配制：用吸量管移取50ug/ml维生素B12标准溶液1.00ml、2.00ml、3.00ml、4.00ml、5.00ml、6.00ml放在10ml编号为2、3、4、5、6、7的10ml容量瓶中，然后用去离子水定容。注意事项与上个步骤所注意的相同3.仪器的使用：（１）安装好打印机和UV-1600型紫外-可见分光光度计然后打开两个的开关，UV-1600型紫外-可见分光光度计进入自检菜单，8秒钟后按任意键开始自检（但不能按红色的键），“ＯＫ”表示仪器正常，可以工作。“ＥＲＲ”表示有故障，待排除故障后方可使用。（２）按任意键进入主菜单，按数字键选定功能操作。进入功能操作后，请按照屏幕提示操作，切勿无目的地接触键盘，以免误操作。（3）各操作按键功能如下：“RESET”为红色键，用于重新开启仪器；“GOTO”为蓝色键，继续操作，如图谱缩放、入波长界面、键入标准样浓度、查看修改等。“CE”清除，否定。渤海大学实验报告用纸（第页共页）“ENTER”返回，返回主菜单操作界面。“F1”进入参数设定。“F2”测定。“F3”测量后的处理。“F4”打印（预先开启打印机，安装打印纸）。“——”图谱切换，A——T转换，数据查询等。“。”游标。“1-9”数字键。输入数据，确定菜单。“上下箭头”选项光标，下箭头还用于多数据切换屏幕。“左右箭头”游标微调。（4）操作中屏幕出现“E”表示测量时间也取样间隔不匹配，需重新设定。（5）参比溶液放在参比池中，其余样池按号放置。（6）断电或关机后，测量数据将丢失，请及时打印数据和图谱。（7）操作完毕后，返回主菜单关闭打印机，关闭仪器。（8）清洗比色皿，按编号顺序，透光面朝上放置好。操作流程：开机——自检（OK）——按“5”(系统设置：氘灯和钨灯都开)——RETURN——按“1”（波长扫描）——F1（参数设定：测量速度（快）取样间隔（1.0）样品位置（1）波长范围（200.0-600.0））——按“F2”(测量：第一测量作为参比)——“F4”打印（图）——按“F3”（处理）——RETURN——按“F4”（打印）——RETURN——光度测量——“F1”（样池数为1，波参数为3）——“GOTO”——RETURN——按“F2”——“F4”（打印）——F1（参数设定：输入三个波长）——“GOTO”（选定输入浓度）——按“F2”——按“F4”（打印）——RETURN——按“3”——按“F2”——RETURN——按“4”——选中1号池——按“F2”——“F4”打印注意事项：（1）在使用紫外－可见分光光度计前，应熟悉本仪器的结构、功能和操作注意事项。（2）吸收池的光学面，必须清洁干净，不准用手触摸，只可用擦镜纸擦拭，并只能顺着一个方向擦.五、实验数据的记录与处理1.数据的记录光度测量标准法no.波长AT%no.cAT%1279.00.24357.2150.07484.3361.00.49532.02100.16967.7549.00.15270.53150.27353.44200.33146.75250.44835.66300.54428.6峰谷检测波长谷波长峰波长谷波长峰1200.01.267203.01.3106317.00.110323.00.1172204.01.292208.01.3367330.00.101361.00.4973210.01.290211.01.2978400.00.034412.00.0424266.00.189279.00.2399435.00.038520.00.1345299.00.136306.00.14010530.00.133549.00.152渤海大学实验报告用纸（第页共页）标准法K1=0.000K2=0.018B=-0.000R=-0.998no.cAT%128.5040.49532实验用图:00.20.40.60.811.21.41.6200300400500600入/nmA渤海大学实验报告用纸（第页共页）2.数据的处理维生素B12医用注射液的定性分析；（1）峰位置的确定。（在波长为279nm、361nm、549nm处有强烈的吸收）（2）A1%cm比值的确定。(A1%cm361nm)/(A1%cm279nm)=0.495/0.243=2.037(A1%cm316nm)/(A1%cm550nm)=0.495/0.152=3.25由以上定性分析结果，得出结论：该物质是：维生素B12。维生素B12医用注射液的定量分析c样=28.504ug/ml样品标示量（样品）=c样*稀释倍数=28.504ug/ml*20=570.08对照样品标示量%=样品标示量（样品）/样品标示量（标准）*100%对照样品标示量%=(570.08/500)*100%=114%式中，样品标示量（标准）=500ug/ml,对照样品标示量%=90%-110%,合格。以上定量分析结果，得出结论：该样品不合格。六、结果讨论1.实验得到的数据偏小，可能是实验过程中存在着误差。误差可能存在于读数、维生素B12溶液移取过程、比色皿上有污渍水迹及其润洗、分光光度计的操作中。而多次重复，在同一波长所得吸光度值也不一样，与波长的调节有关。2.在实验中，第一次检测波长在548nm~552nm之间的吸光度值变化微小，数据不理想，当把调到380nm~1000nm后，第二次试验结果明显比第一好。在实验过程中，我们除了把实验操作规范化和熟练实验步骤外，还应细心观察，对我们所用的仪器要有相当的认知。3.使用分光光度计之前，需要预热30分钟左右，而未放入比色皿时，必须将样品室仓盖打开，以免影响分光光度计的使用期限和灵敏度。七、思考题1.在紫外-可见分光光度计法中可否用去离子水作参比？答：可以，因为在测量时溶液中只有去离子水和维生素B12并没有其他物质。2.紫外-可见分光光度计法适用于什么样品的分析？答：此物质在紫外、可见光区中其分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后，发生了电子能级跃迁后能得到其吸收光谱曲线的。教师评语：渤海大学实验报告用纸（第页共页）