第九章-凝集反应

第九章凝集反应学习目标1.解释凝集反应的概念。2.解释直接凝集反应、间接凝集反应、协同凝集反应的原理。3.说出抗人球蛋白试验的应用。4.了解自身红细胞凝集。凝集反应细菌、螺旋体、红细胞或细胞性抗原等颗粒性抗原，或可溶性抗原（或抗体）与载体颗粒结合成致敏颗粒后，它们与相应抗体（或抗原）发生特异性反应，在适当电解质存在下，形成肉眼可见的凝集现象。抗原抗原排斥抗原抗体凝集反应抗原抗原抗原•凝集原：凝集反应中的抗原。•凝集素：凝集参与反应的抗体反应阶段：抗原抗体的特异性结合出现肉眼可见的凝集现象反应特点：IgM的作用比IgG大数百倍IgG与抗原结合后，常不出现凝集反应，称不完全抗体凝集反应可见反应形成第一节直接凝集反应直接凝集反应：颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。+方法评价：简便和快速、敏感度低，用于定性试验临床应用：菌种鉴定、血清学分型、血型鉴定及抗体效价测定。第一节直接凝集反应一、玻片凝集试验+方法评价:定性试验简便和快速敏感度低临床应用:菌种鉴定血清学分型血型鉴定一、玻片凝集试验在试管内颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。二、试管凝集试验0.50.50.50.50.5弃掉0.5试管凝集试验原理结果1234567菌液试管凝集试验结果+很小的凝集颗粒混浊-无凝集现象与对照相同++小、部分凝集块中等混浊+++大多凝集管底轻度混浊++++大的凝集块清亮凝集程度沉淀上清管底沉淀凝集程度最高稀释比例待测血清的滴度方法评价：半定量试验简便、快速敏感度低可有假阳性临床应用：WidalreactionWeil-felixreactionWrighttest:布鲁菌病交叉配血试验二、试管凝集试验一、玻片凝集反应:未知抗原+已知抗体凝集团块混浊?二、试管凝集反应：定量抗原+系列稀释抗体不同程度的凝集反应YESNO确定抗体的滴度1.O凝集、H凝集与Vi凝集2.交叉反应与凝集吸收试验三、与凝集反应有关的概念1、O凝集、H凝集与Vi凝集交叉凝集反应ABAC乙菌甲菌2、交叉凝集反应有凝集吸收试验共同抗原与交叉反应抗原1抗原2++抗血清交叉反应2、交叉凝集反应有凝集吸收试验2、交叉凝集反应有凝集吸收试验凝集吸收试验:用一种过量的细菌抗原与发生交叉凝集反应的抗血清相结合。可将其共同抗体吸去，剩下抗体只能与特异性抗原起反应，这种试验即称凝集吸收试验。第二节间接凝集反应间接凝集反应:将可溶性抗原或抗体吸附于颗粒性载体表面，然后与相应的抗体或抗原反应，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象载体可溶性抗原致敏致敏颗粒NS凝集颗粒载体种类及其处理方法红细胞：新鲜红细胞吸附蛋白质的能力差。一般先醛化后应用。聚苯乙烯胶乳颗粒：可物理吸附蛋白质；常制备带有化学活性基团的颗粒•正向间接凝集试验•反向间接凝集试验•间接凝集抑制试验间接凝集反应的类型用抗原致敏载体--检测抗体一、正向间接凝集试验二、反向间接凝集试验用抗体致敏载体----检测抗原三、间接凝集抑制试验用抗原致敏载体--检测抗原间接凝集抑制试验待测抗原已知抗体特异结合抗原抗体复合物NS＋致敏颗粒无凝集颗粒阳性间接凝集抑制试验待测抗原已知抗体无结合抗原抗体分散NS＋致敏颗粒有凝集颗粒阴性SPA:SPA-IgGFc;SPA抗体致敏------测抗原一、协同凝集试验原理图IgGSPASPA-IgG待测抗原SPA-IgG-待测抗原凝集颗粒混合抗球蛋白试验又称Coombs试验二、抗人球蛋白凝集试验•1945年由Coombs建立的一种抗球蛋白参与的间接血凝试验，检测抗红细胞不完全抗体的一种非常经典的方法。二、抗人球蛋白凝集试验1、直接Coombs试验不完全抗体检测红细胞上抗体2、间接Coombs试验检测血清中的抗红细胞抗体临床应用：在输血上的应用血型抗原抗体的检查对新生儿溶血性贫血性疾病的诊断对溶血性贫血的研究对细菌或立克次体的不完全抗体检查抗人球蛋白凝集试验自身红细胞凝集试验未经致敏的受检者新鲜红细胞试剂：抗人O型红细胞的单克隆抗体临床应用：HIV检测、HBV检测自身红细胞凝集试验胶乳凝集试验明胶凝集试验将病毒抗原或重组抗原吸附于粉红色明胶颗粒上，当致敏颗粒与样品血清作用时，若血清含有抗病毒抗体则可形成肉眼可见的粉红色凝集间接凝集反应的应用抗原的检测反向间接凝集试验可用于检测病原体的可溶性抗原，也可用于检测各种蛋白质成分。抗体的检测检测细菌、病毒、寄生虫等感染后产生的抗体。小结凝集反应是指细菌和红细胞等颗粒性抗原或表面包被抗原的颗粒性载体与相应抗体结合后，可出现肉眼可见的凝集现象。可以分为直接凝集反应和间接凝集反应。在临床检验中最常用的为间接血凝试验、胶乳凝集试验和明胶试验。抗球蛋白试验又称为Coombs试验，是检测抗红细胞不完全抗体的一种很有用的方法。直接Coombs试验用于病人红细胞上不完全抗体检测；间接Coombs试验用于检测游离的血清中的不完全抗体。