安农大《基因工程原理》试卷

12003-2004学年第二学期01级生物技术《基因工程原理》试卷（A卷）一、填空题（20分）1.基因工程的四大要素是、、和。2.可用T4DNA聚合酶进行平末端的DNA标记，因为这种酶具有和的活性。3.乙醇沉淀DNA的原理是。4.受体细胞的感受态是。5.在DNA分离过程中造成DNA分子断裂的因素主要有、和。6.通常可在三种温度下保存DNA：4～5℃、-20℃、-70℃，其中以最好。7.Ⅱ类限制性内切核酸酶既具有的专一性，又具有的专一性。切割后产生末端的DNA片段和末端的DNA片段，作用时需要作辅助因子。8.Klenow大片段是用切割DNA聚合酶Ⅰ得到的，它具有和两种活性。二、单项选择题（20分）1.1953年Watson和Crick提出：（）（a）多核苷酸DNA链通过氢键连接成一个双螺旋（b）三个连续的核苷酸代表一个遗传密码（c）遗传物质通常是DNA而非RNA（d）分离到回复突变体证明这一突变并非是一个缺失突变2.在原核生物DNA复制中，以下哪种酶除去RNA引发体并加入脱氧核糖核苷酸（）（a）DNA聚合酶Ⅲ（b）DNA聚合酶Ⅱ（c）DNA聚合酶Ⅰ（d）DNA连接酶3.关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有（）不太恰当。（a）由作用于同一DNA序列的两种酶构成（b）这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶（c）这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰（d）不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统4.Ⅱ型限制性内切核酸酶（）（a）有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列（b）仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供（c）有外切核酸酶和甲基化酶活性（d）仅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供5.T4DNA连接酶是从T4噬菌体感染的E.coli中分离的，这种连接酶（）（a）催化连接反应时既能以ATP又能以NAD作为能量来源（b）既能催化平末端连接又能催化黏性末端连接（c）是一种单肽酶，分子量为74kDa（d）既能催化单链DNA连接又能催化双链DNA连接6.从E.coli中分离的连接酶：（）（a）需要ATP作辅助因子（b）需要NAD作辅助因子（c）用于进行平末端的连接（d）作用时不需要模板7.DNA连接酶的主要作用是在DNA复制、修复中封闭缺口，（）（a）将双链DNA中的5′-P同3′-OH末端重新形成磷酸二脂键（b）作用时不消耗能量2（c）需要Mn2+等二价辅助离子（d）也可以连接RNA分子8.松弛型质粒pUC载体系列不必进行氯霉素扩增，因为它们的拷贝数很高达到（）（a）30-50（b）100-200（c）300-400（d）500-7009.第一个作为重组DNA载体的质粒是（）（a）pBR322（b）ColE1（c）pSC101（d）EcoB10.关于碱解法分离质粒DNA，下面哪一种说法不正确？（）（a）溶液Ⅰ的作用是悬浮菌体（b）溶液Ⅱ的作用是使DNA变性（c）溶液Ⅲ的作用是使DNA复性（d）质粒DNA分子小，所以没有变性，染色体变性后不能复性11.Southern印迹的DNA探针（）杂交（a）只与完全相同的片段（b）可与任何含有相同序列的DNA片段（c）可与任何含有互补序列的DNA片段（d）可与用某些限制酶切成的DNA片段12.下列关于建立cDNA文库的叙述中，哪一项是错误的？（）（a）特定组织或细胞中提取DNA或RNA（b）用反转录酶合成mRNA的对应单链DNA（c）以新合成的单链DNA为模板合成双链DNA（d）用S1核酸酶去除双链的发夹结构13.黏性末端连接法，不仅操作方便，而且（）（a）产生新切点（b）易于回收外源片段（c）载体不易环化（d）影响外源基因的表达14.关于噬菌斑筛选法的原理，下面哪一种说法不正确？（）（a）噬菌斑颜色的变化（b）cI基因失活造成的噬菌斑的变化（c）对IPTG的分解能力（d）对Xgal的分解与否15.下列哪一种酶作用时需要引物？（）（a）限制酶（b）碱性磷酸酶（c）反转录酶（d）DNA连接酶16.关于穿梭质粒载体，下面哪一种说法最正确？（）（a）在不同的宿主中具有不同的复制机制（b）在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点（c）在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶（d）在不同的宿主细胞中具有不同的复制速度17.下面关于多克隆位点（MCS）的描述，不正确的一句是（）（a）仅位于质粒载体中（b）具有多种酶的识别序列（c）不同酶的识别序列可以有重叠（d）一般是人工合成后添加到载体中18.cDNA文库包括该种生物的（）（a）某些蛋白质的结构基因（b）所有蛋白质的结构基因（c）所有结构基因（d）内含子和调控区19.同一种质粒DNA，电泳时，三种不同形式的迁移速度是（）（a）SCDNA＞LDNA＞OCDNA（b）SCDNA＞OCDNA＞LDNA（c）OCDNA＞SCDNA＞LDNA（d）LDNA＞SCDNA＞OCDNA320.ColE1是用作基因工程载体的自然质粒，它不具有下列哪个性质（）（a）是松弛复制型（b）具有四环素抗性（c）能被氯霉素扩增（d）产生大肠杆菌素三、判断题（15分）1.同一种限制性内切核酸酶切割靶DNA，得到的片段的两个末端都是相同的。2.迄今发现的质粒DNA都是环状的。3.外源基因（或DNA片段）插入到某一基因内的位点后，这个基因不再有任何功能。4.核酸杂交探针就是带有放射性标记的DNA分子。5.通过原位菌落杂交得到的阳性克隆即是重组体，但不能判断插入的外源基因是否进行了表达。6.基因克隆中，低拷贝数的质粒载体是没有用的。7.用不同的产生粘性末端的限制性内切核酸酶分别切割载体和外源DNA片段，得到的粘性末端是不能通过末端互补而连接的。8.用免疫化学方法筛选的重组体不需要外源基因的表达。9.甘油会使许多限制性内切酶的特异性发生改变，是导致一些酶星活性的主要原因之一，防止的办法是酶切反应体系中，将甘油的浓度控制在5%以下。10.不匹配的黏性末端可以通过部分填补后进行连接。11.DNA聚合酶Ⅰ有三种酶活性，其中3’→5’外切核酸酶的活性在较多的dNTPs存在下，常被5’→3’合成酶的活性所掩盖。12.基因组DNA文库是含有某一生物中全部DNA序列随机克隆的克隆群，而cDNA文库是含有某一生物中所有表达基因随机克隆的克隆群。13.同聚物接尾法构建重组体，不仅连接效率高，而且也很容易回收插入的片段。14.简并引物是根据已知DNA的序列设计的引物群。15.一般情况下，质粒既可以整合到染色体上，也可以独立存在。四、简答题（第1题3分，2～4题各4分）1.连接酶将Sau3AI（GATC）切割的DNA与经BamHI（GGATCC）切割的DNA连接起来后，能够被BamHI切割的机率有多大（百分比表示）？2.下面几种序列中你认为哪一个（哪些）最有可能是Ⅱ类酶的识别序列，为什么？GAATTC，AAGCTT，GAATCG，ACGGCA，CTGCAG。3.你打算扩增下图所示的两段序列之间的DNA，请从所列出的的引物中选出合适的一对。5’-GACCTGTGGAAGC-------CATACGGGATTG-3’3’-CTGGACACCTTCG-------GTATGCCCTAAC-5’引物1：（1）5’-GACCTGTGGAAGC（2）5’-CTGGACACCTTCG（3）5’-CGAAGGTGTCCAG（4）5’-GCTTCCACAGGTC引物2：（1）5’-CATACGGGATTG（2）5’-GTATGCCCTAAC（3）5’-GTTAGGGCATAC（4）5’-CAATCCCGTATG4.原核生物中有哪两种不同的转录终止机制？五、问答题（30分）1.PCR扩增的基本原理是什么？用PCR扩增某一基因，必须预先得到什么样信息？2.黏性末端连接法是最常用的连接方法，具有许多优点，但是也有一些不足，请指出这些不足处。3.在DNA分离过程中，为何常常酚∶氯仿联用？4.2003-2004学年第二学期01级生物技术《基因工程原理》试卷（B卷）一、填空题（20分）41.基因工程的四大要素是、、和。2.可用T4DNA聚合酶进行平末端的DNA标记，因为这种酶具有和的活性。3.乙醇沉淀DNA的原理是。4.受体细胞的感受态是。5.在DNA分离过程中造成DNA分子断裂的因素主要有、和。6.通常可在三种温度下保存DNA：4～5℃、-20℃、-70℃，其中以最好。7.为了防止DNA的自身环化，可用脱去双链DNA。8.Klenow大片段是用切割DNA聚合酶Ⅰ得到的，它具有和两种活性。9.放射免疫筛选的原理基于以下三点：、和。二、单项选择题（20分）1.1953年Watson和Crick提出：（）（a）多核苷酸DNA链通过氢键连接成一个双螺旋（b）三个连续的核苷酸代表一个遗传密码（c）遗传物质通常是DNA而非RNA（d）分离到回复突变体证明这一突变并非是一个缺失突变2.在原核生物DNA复制中，以下哪种酶除去RNA引发体并加入脱氧核糖核苷酸（）（a）DNA聚合酶Ⅲ（b）DNA聚合酶Ⅱ（c）DNA聚合酶Ⅰ（d）DNA连接酶3.关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有（）不太恰当。（a）由作用于同一DNA序列的两种酶构成（b）这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶（c）这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰（d）不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统4.Ⅱ型限制性内切核酸酶（）（a）有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列（b）仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供（c）有外切核酸酶和甲基化酶活性（d）仅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供5.T4DNA连接酶是从T4噬菌体感染的E.coli中分离的，这种连接酶（）（a）催化连接反应时既能以ATP又能以NAD作为能量来源（b）既能催化平末端连接又能催化黏性末端连接（c）是一种单肽酶，分子量为74kDa（d）既能催化单链DNA连接又能催化双链DNA连接6.从E.coli中分离的连接酶：（）（a）需要ATP作辅助因子（b）需要NAD作辅助因子（c）用于进行平末端的连接（d）作用时不需要模板7.DNA连接酶的主要作用是在DNA复制、修复中封闭缺口，（）（a）将双链DNA中的5′-P同3′-OH末端重新形成磷酸二脂键（b）作用时不消耗能量（c）需要Mn2+等二价辅助离子5（d）也可以连接RNA分子8.松弛型质粒pUC载体系列不必进行氯霉素扩增，因为它们的拷贝数很高达到（）（a）30-50（b）100-200（c）300-400（d）500-7009.第一个作为重组DNA载体的质粒是（）（a）pBR322（b）ColE1（c）pSC101（d）EcoB10.Southern印迹的DNA探针（）杂交（a）只与完全相同的片段（b）可与任何含有相同序列的DNA片段（c）可与任何含有互补序列的DNA片段（d）可与用某些限制酶切成的DNA片段11.用碱法分离质粒DNA时，因为（）所以可以被除去（a）染色体DNA断成了碎片（b）染色体DNA分子量大，而不能释放（c）染色体DNA变性后来不及复性（d）染色体末同蛋白质分开而沉淀12.黏性末端连接法，不仅操作方便，而且（）（a）产生新切点（b）易于回收外源片段（c）载体不易环化（d）影响外源基因的表达13.关于cDNA的最正确的提法是：（）（a）同mRNA互补的单链DN（b）同mRNA互补的双链DNA（c）以mRNA为模板合成的双链DNA（d）以上都正确14.关于噬菌斑筛选法的原理，下面哪一种说法不正确？（）（a）噬菌斑颜色的变化（b）cI基因失活造成的噬菌斑的变化（c）对IPTG的分解能力（d）对Xgal的分解与否15.下列哪一种酶作用时需要引物？（）（a）限制酶（b）碱性磷酸酶（c）反转录酶（d）DNA连接酶16.关于穿梭质粒载体，下面哪一种说法最正确？（）（a）在不同的宿主中具有不同的复制机制（b）在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点（c）在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶（d）在不同的宿主细胞中具有不同的复制速度17.下面关于多克隆位点（MCS）的描述，不正确的