QIAGEN-DNeasy-Blood-&-Tissue-试剂盒说明书(翻译版)

使用前注意事项：所有离心操作在室温（15℃-25℃）下进行沉渣用BufferAL和BufferATL重溶在浓缩的BufferAW1和BufferAW2中加入乙醇冰冻组织和细胞球在室温下平衡在56℃孵育箱中预处理固定组织、昆虫、细菌或其他材料的预处理请参见使用手册1a.组织：将组织切碎成小块（脾脏≤10mg，其他组织≤25mg），装入1.5ml离心管中，鼠尾则取1cm（大鼠）或2cm（小鼠）。加入180μlBufferATL。加入20μl蛋白激酶K，振荡混匀，56℃孵育至组织完全裂解，孵育过程中间断振荡。进入步骤2前振荡15秒。1b.无核血液：将20μl蛋白激酶K移至1.5ml或2ml离心管，加入50-100μl抗凝处理过的血液。用PBS调整体积至220μl，进入步骤2。1c.有核血液：将20μl蛋白激酶K移至1.5ml或2ml离心管，加入5-10μl抗凝处理过的血液。用PBS调整体积至220μl，进入步骤2。1d.培养细胞：最多可用5×106个细胞，300×g（190rpm）离心5min。用200μl重悬，加入20μl蛋白激酶K进入步骤22.加入200μlBufferAL，振荡混匀，血标本需在56℃下孵育10min。3.加入200μl乙醇，振荡混匀。4.将上述混合物用移液枪移至2ml离心管中的DNeasyMini滤柱中，6000×g（8000rpm）离心1min，弃去滤出液及离心管。5.将滤柱放入新的2ml收集管中，加入500μlBufferAW1，≥6000×g离心1min，弃去滤出液及收集管。6.将滤柱放入新的2ml收集管中，加入500μlBufferAW2，20000×g（14000rpm）离心3min，弃去滤出液及收集管。7.将滤柱移至新的1.5ml或2ml离心管。8.将200μlBufferAE加至滤柱膜中央以洗提DNA，室温（15℃-25℃）下孵育1分钟。≥6000×g离心1分钟9.优化：重复步骤8以增加DNA产量