新版GMP法规下的洁净室环境监控(何方明)

新版GMP法规下的洁净室环境监控何芳明内容•法规要求•案例研究•如何监控•风险整合•系统验证法规要求–1、法规对洁净度的规定–2、法规对环境监控的要求法规要求–SFDA关于洁净度的规定2010版附件1不作规定不作规定290003520000D2900035200002900352000C2900352000293520B203520203520A5um0.5um5um0.5um动态静态Grade法规要求–欧盟关于洁净度的规定2008附件1不作规定不作规定290003520000D2900035200002900352000C2900352000293520B203520203520A5um0.5um5um0.5um动态静态Grade法规要求–ISO14644-1关于洁净度的规定不作规定不作规定290003520000D2900035200002900352000C2900352000293520B203520203520A5um0.5um5um0.5um动态静态Grade法规要求－1•SFDAcGMP（2010）–第十条应当按以下要求对洁净区的悬浮粒子进行动态监测：•（一）根据洁净度级别和空气净化系统确认的结果及风险评估，确定取样点的位置并进行日常动态监控。•（二）在关键操作的全过程中，包括设备组装操作，应当对A级洁净区进行悬浮粒子监测。A级洁净区监测的频率及取样量，应能及时发现所有人为干预、偶发事件及任何系统的损坏。法规要求－2•SFDAcGMP（2010）–第十一条应当对微生物进行动态监测，评估无菌生产的微生物状况。监测方法有沉降菌法、定量空气浮游菌采样法和表面取样法（如棉签擦拭法和接触碟法）等。动态取样应当避免对洁净区造成不良影响。成品批记录的审核应当包括环境监测的结果。–对表面和操作人员的监测，应当在关键操作完成后进行。法规要求－3•SFDAcGMP（2010）–第三十四条应设送风机组故障的报警系统。–附录1•第十二条应当制定适当的悬浮粒子和微生物监测警戒限度和纠偏限度。操作规程中应当详细说明结果超标时需采取的纠偏措施。法规要求－4•SFDAcGMP（2010）附录一：第11条洁净区微生物动态监测标准注：•（1）表中各数值均为平均值。•（2）单个沉降碟的暴露时间可以少于4小时，同一位置可使用多个沉降碟连续进行监测并累积计数。--50100200D--2550100C55510B1111A5指手套cfu/手套接触（φ55mm）cfu/碟表面微生物沉降菌（φ90mm）cfu/4小时(2)浮游菌cfu/m3洁净度级别FDA、EU等法规要求FDA、EU等要求FDA、EU等要求FDA483案例研究•“Monitoringisnotconductedroutinelynorconcurrentlywithmanufacturing...samplingshouldbedonedailyduringbothshifts,bothinsideandoutsideoftheLAF(laminarairflow)areas,andsampletimesshouldbevariedtocoverallpartsoftheproductionperiod.”•“Samplingfrequenciesandlocationsmustbedefined.”•“Lessthan10%ofthemicrobialairsampleswerecollectedafternoon,althoughproductionroutinelycontinuesuntil3:00PM”•“RoomairmicrobialsamplesarecollectedwiththeRCS(rotarycentrifugalsampler)onatripodataheightoffivefeet,whichdoesnotrepresentworkinglevelintheserooms.Thereisnotrendingofdata.FDA483案例研究•“TherehasbeennodailymonitoringofasepticareasandLAFmodulesfornonviableparticulatesonadayofproductionbasis.”•“Someofthevalidationsofairqualityinroomsweredoneonlyunderstaticconditionswithoutpersonnel.AlsonosmokepatternstudiesontheLAFhavebeenperformedtoshoweffectsofcurtainmovementsonlaminarairflows.”•“Thefirmhasnotsetalertandactionlimitsformostenvironmentalsamples...firmneedstoidentifyallorganismsisolatedfromasepticareauntiladatabaseisestablishedfornormalflorafoundintheproductionenvironment(withfrequencydistribution)foruseinevaluatingsterilitytestresults.”FDA483案例研究•“Failtoeliminateobjectionableorganismsfrominteriorsurfacesoftransfercartsinwhichsterilizedunsealedcontainersofdrugproductareexposed.”•“Novalidationstudieshavebeenconductedtoassurethemicrobialsettleplatesarecapableofsupportingmicrobialgrowthafterthestatedthree-hourexposuretimeinClass100rooms.”•“Class10,000areashaveaviablelimitof1.4CFU(colonyformingunits).”•“Microbialairsamplesunderlaminarflowmodulesarecollectedonlyunderstaticconditions.”•“Thequalitycontrolunitdidnotassurethatadequatesystemsandcontrolswereinplacetomonitorthefunctioningof,andtodetectmalfunctionsof,theairhandlingsystemsusedtocontrolandassureasepticconditionsinasepticmanufacturingareas.”FDA483案例研究环境监控的目的•提供工艺环境的质量信息•防止微生物污染•防止交叉污染•评估清洁和消毒的程序•识别和消除风险•保证产品制造过程的质量内容•法规要求•案例研究•如何监控•风险整合•系统验证如何监控•监控对象(WHO)•如何监控（HOW）•监控点与监控频次(WHERE/WHEN)•监控数据的收集与评价常规监控要素•监控对象（人、机、料、法、环）•监控要素–尘埃粒子–微生物（浮游菌、表面微生物）–压差–风速–温湿度监控方法•空气悬浮粒子监测设备监控方法•空气悬浮粒子监测确定采样点位置•按公式（B.1）求出最少的采样点数目：•NL＝式中NL—最少采样点数（四舍五入为整数）。•A—洁净室或洁净区的面积，以㎡计。•注:在水平单向层流时，面积A可以看作是与气流方向呈垂直流动的空气的截面积。监控方法监控方法•空气悬浮粒子监测每个采样点的每次采样量VS用下式确定：20VS＝——×1000Cn·mVS—每个采样点每次最少采样量，用升表示Cn·m—为相关等级规定最大被考虑粒径之等级限值（pc/m3空气）。20—粒子浓度处于该等级限值时，可被检测到粒子数微生物监控–表面微生物–空气微生物微生物监控微生物监控•空气微生物监测方法–沉降菌法（被动法）•沉降碟在空气中的暴露时间4小时•监控整个灌装过程•只能给出定性和半定量的数据•应结合空气浮游菌的数据，对沉降碟的结果进行评价–定量空气浮游菌取样法（主动法）•撞击式，离心式和膜过滤（明胶）取样仪•应取一定体积的空气（取样体积应有代表性）•仪器应经过校验监控方法•微生物检测设备微生物监控微生物监控•表面微生物监测方法–擦拭法和接触碟法均可使用–接触碟–用于平整表面»取样面积25cm2»培养基要凸起，高于碟子边缘»培养基中含有中和剂–表面擦试法-用于非规则表面»擦拭面积大约为25cm2»定性或定量–表面取样应在无菌操作结束时进行（以最大限度地降低无菌制造过程中关键表面污染的风险）–应当对接触产品的表面、地面、墙以及设备定期进行监测微生物监控•微生物监控的程序（位置与频次）–同生产工艺密切相关如：•操作步骤•操作方式，开放式与封闭式•单产品与多产品–微生物鉴别微生物监控微生物监控取样位置的选择：•哪些部位的微生物污染最可能对产品质量造成不良影响？•在生产过程中，什么地点最容易长菌？•取样点的选择需要统计学设计或根据网格法来确定？在常规监测中，有一些点需要周转取样吗？•哪些地方是清洁、消毒或灭菌时最难覆盖/接触或最难凑效的部位？•什么活动会导致污染的扩散？•在某一部位的取样操作，足以导致测试数据的差错或污染产品？取样只应在生产结尾换班时进行吗？微生物监控微生物监控取样位置的选择：系统取样点洁净区域空气（灌装线）接近敞开和/或者已灌装的容器洁净区域空气最接近工作区域表面（厂房）地面、门把手、墙、帘子表面（设备）灌装线、控制面板、供胶塞的料斗灌装线操作人员至少要检手指印单向流（例如，单向流罩）靠近活动最多的区域取样点举例微生物监控微生物监控取样位置的选择：无菌灌装线–应以微生物污染的风险为基础来考虑–取样点应在产品或组件暴露的区域周围取样，如：•在灌装针头处•将产品装载入冻干腔室处•胶塞供料桶•无菌部件进行连接操作的部位•不影响生产过程的操作人员频繁活动处•靠近产品，但不接触产品的位置微生物监控微生物监控取样频率•批生产动态监测•日常监测•轮转监测选择取样频率的关键点是尽可能鉴别出系统潜在的缺陷。微生物监控取样频次微生物监控微生物监控取样频率:USP1116洁净区取样频率100级或更高级别每班一次100级区毗连的支持性区域(如：10,000级)每班一次其它支持性区域(100,000级)每周二次可能与产品/容器相接触的区域每周二次无菌生产区的其它支持性区域（不与产品相接触，通常为100,000级或更低）每周一次•压差、风速、温湿度监控数据的收集与处理数据的收集与管理•监测日期•取样地点•取样方法•微生物菌落数或微粒数，•鉴别结果•产品批号•目前的报警和行动限度监控数据的收集与处理报警和行动限度•行动限度：–相关GMP和药典的法规要求，–连续三次超过下列报警限度视为超过一次纠偏限度•报警限度：–根据验证数据–历史的运行监测结果基于统计学制定的•通常：•报警限度以95%水平确定（1.645Sigma）•行动限度以99%水平确定（2.326Sigma）监控数据的收集与处理监控数据的收集与处理数据管理：趋势分析•分析的目标•用警戒/纠偏值来确定•“纠偏措施”•确定现行的警戒/纠偏限度•标准是否恰当•用定期报告来更新管理。•年度报告中包括数据的总结和对纠偏限度的回顾监控数据的收集与处理细菌鉴定:•BioMerieuxVitek,Inc.(Vitek)•BiologPEAppliedBiosystems•Qualicon™,aDuPontSubsidiary•API(AnalyticalProfileIndex)•革兰氏染色法风险评估•建立环境监控体系的方法风险评估流程RiskRe