好氧反硝化细菌培养基配制

好氧反硝化细菌培养基配制以及实验方法一、好氧反硝化培养基（液体）醋酸钠/0.5g;KNO3/0.1g;K2HPO4/0.01g;MgCl2/0.02g;CaCl2/0.01g;H2O/1000ml;pH7～7.5.好氧反硝化培养基（固体）醋酸钠/0.5g;KNO3/0.05g;Na2HPO4.7H2O/0.5g;NaNO2/0.01g;MgSO4·7H2O/0.1g;琼脂18g;pH7～7.5.富集分离：取样品泥样置于上述液体培养基中，经过每天24小时曝气富集10天。之后，取1毫升底泥与10毫升去离子水混合，之后进行107倍稀释，在上述固体培养基上进行平板划线分离。细菌初筛：将分离得到的细菌接种到上述液体培养基中，然后在30摄氏度环境下进行24小时的摇瓶培养，用紫外分光光度法检测硝态氮含量，重复2次，取降低最多的样品继续进行平板划线，再重复上述操作，得到单一菌落。（验证所得菌落是否单一：将所得菌落接种在牛肉膏蛋白胨培养基上，进行无菌培养，检测菌落是否单一。）细菌复筛：将初筛得到的单一菌落，进行实际污水测试，测试其实际降解硝态氮的能力。二、BTB初筛培养基：琼脂20g、KNO31g、KH2PO41g、FeCl2·6H2O0.5g、CaCl2·7H2O0.2g、MgSO4·7H2O1g、琥珀酸钠8.5g、溴百里酚蓝(BTB)(1%乙醇溶液)1mL，用1mol/L的NaOH调节pH至7.0～7.3，121℃灭菌20minLB液体培养基(/L)：KNO31g、KH2PO41g、FeCl2·6H2O0.05g、CaCl2·7H2O0.02g、MgSO4·7H2O1g、琥珀酸钠8.5g，121℃灭菌20minDM反硝化培养基(/L)：KNO30.72g、KH2PO41g、MgSO4·7H2O1g、琥珀酸钠2.8g，121℃灭菌20min采用梯度稀释法将污泥样品稀释至适当浓度，取0.1mL均匀涂布于BTB培养基表面，置入恒温培养箱，30℃下培养2～3d后，用接种环挑取使周围培养基出现蓝色晕圈的单菌落，进行分离纯化即为初筛菌株。接种初筛菌株至LB培养基，在30℃、160r/min条件下进行液体培养24h后，以10%的接种量接种到反硝化培养基(DM培养基)中，30℃、160r/min条件下进行摇瓶发酵，间隔一定时间取样。测定发酵液中硝基氮浓度(NO-3-N)和亚硝基氮浓度(NO-2-N)，通过分析其NO3--N和TIN(NO--N+NO-2-N)去除率，考察所筛菌株的反硝化性能。NO-3-N：用紫外分光光度法测定；NO-2-N：用N-(1-萘基)-乙二胺分光光度法测定[4]。菌体量：光密度法，用721型分光光度计在600nm处测定吸光度值。微量元素溶液:EDTA(乙二胺四乙酸)50.0g,ZnSO42.2g,CaCl25.5g,MnCl2·4H2O5.06g,FeSO4·7H2O5.0g,CuSO4·5H2O1.57g,CoCl2·6H2O1.61g,溶解后用蒸馏水定容至1L,pH7.0.