血型正反定型不一致处理技巧

血型正反定型不一致处理技巧2016年11月15日马春娅ABO血型系统抗原抗体简介血型鉴定方法血型鉴定强度判定标准血型正反定型不一致原因分析案例介绍主要内容血型红细胞上抗原血清中的抗体基因型A型B型AB型O型ABABH抗-B抗-A无抗-ABA/A或A/OB/B或B/OA/BO/OABO血型发现者：KarlLandsteiner，1900年ABO血型系统抗原抗体简介H基因：遗传产生α２-L-岩藻糖基转移酶，将岩藻糖基转移到支链末端的半乳糖上形成H抗原ABO血型系统抗原抗体简介A基因产物：N-乙酰氨基半乳糖转移酶功能：从尿苷二磷酸（UDP）-N-乙酰氨基半乳糖转移一个N-乙酰氨基半乳糖到H物质的岩藻糖化半乳糖基上B基因产物：α1，3-D半乳糖基转移酶功能：从UDP-半乳糖转移一个D-半乳糖到H物质的岩藻糖化半乳糖基上ABO血型系统抗原抗体简介血型（表现型）基因型ABABOAA,AOBB,BOABOA和B基因是显性基因O型基因是隐性基因基因型相同血型一定相同血型相同基因型不一定相同ABO血型系统抗原抗体简介A1与A2量的差异A1：8-12×105A2：1-4×105A1B：5-9×105A2B：1×105A1和A2质的差异约有2%A2个体产生抗A1约有25%A2B个体产生抗A1ABO血型系统抗原抗体简介ABO血型系统抗原抗体简介A1和A2抗血清试剂红细胞唾液（分泌型）-A-B-AB-A1-HA1A2BOA14+04+2+W/0004+0A/HA24+04+03+0/W04+0A/HABO血型系统抗原抗体简介抗血清试剂红细胞唾液（分泌型）-A-B-AB-A1-HA1A2BOA3mf0mf03+0/w04+0A/HAendmf0mf04+0/w04+0H出现双群时，要结合临床，由简至难排查：如白血病、骨髓移植、不同型输血等A3凝集细胞占多数，游离细胞占少数；Aend凝集细胞占少量，需多次离心才能被发现；ABO血型系统抗原抗体简介抗血清试剂红细胞唾液（分泌型）-A-B-AB-A1-HA1A2BOAxw01+-3+04+w0/w4+0Aw/HAel00004+w0/w4+0HAm+/w0+/w04+004+0A/HAy表现型与Am相似与同样的血清孵育时，Ay上放散下来的抗A较Am少Ay比Am分泌型唾液中A物质含量更少ABO血型系统抗原抗体简介B亚型血清学特征抗血清试剂红细胞唾液（分泌型）-A-B-AB-HA1A2BOB30mfmf4+4+3+0/w0B/HBend0mf04+4+4+0/w0HBx0w1-3+4+4+3+w0HBel0004+4+4+0/w0HBm0-/w-/w4+4+3+00B/HABO血型系统抗原抗体简介A2B、A3B、AxB、AmB、AelB、AendB、AB3、ABx、ABm、ABel、Abend…同A亚型和B亚型的血清学特点不同之处：与抗H的凝集强度弱，呈w/0，同A1BABO血型系统抗原抗体简介ABO血型系统抗原抗体简介B（A）或A（B）表型B型糖基转移酶在某些条件下可以合成A物质A1型糖基转移酶也能合成B物质A型和B型糖基转移酶的叠盖功能cisAB两条染色体相邻的基因交换，产生两种转移酶A和B基因的一个基因突变，只能产生一种酶，同时催化A和B抗原的产生ABO血型系统抗原抗体简介cisAB和B（A）cisAB的A抗原接近正常，B抗原较正常弱很多；B(A)的B抗原接近正常，A抗原弱很多。cisAB或B（A）血清中存在针对弱抗原产生的不规则抗体cisAB与抗H反应强度仅次于甚至接近与O细胞。带有cisAB或B(A)等位基因的个体，若与O型血的人（基因型O/O）生育，子女的血型可能表现为AB型或O型，而不像通常AB型血与O型血的父母只能生出A或B型血的子女。血清学方法判断为AB亚型，需分子生物学验证ABO血型系统抗原抗体简介获得性B表现在A型红细胞上可能减弱A抗原的抗原性获得性B消失后，红细胞A抗原性增强唾液中只含有A和H抗原PH≤6时，凝集消失ABO血型系统抗原抗体简介孟买型和类孟买型抗血清试剂红细胞唾液（分泌型）-A-B-AB-A1-HA1A2BOOh00004+4+4+3+-Omh00004+4+4+wHAmhw0w00w04+wA/HBmh0ww004+3+wwB/HABO血型系统抗原抗体简介存在方式颗粒性抗原（膜抗原）：存在于红细胞膜上可溶性抗原（型物质）：存在于分泌型人群的体液中（如唾液）形成时间胚胎期抗原产生出生时已经存在，但较成人弱出生三月时与成人基本相同以后逐步增强到成人水平ABO血型系统抗原抗体简介ABO血型系统抗原存在形式A型与B型人以IgM为主，IgG很少O型人含有抗A、抗B和抗AB，以IgG为主，IgM很少AB型人既无抗A也无抗B产生时间新生儿出生时理论上无ABO抗体3至6月后开始产生抗体5～10岁时抗体水平达到高峰，并延续多年老年后，随年龄增大而降低ABO血型系统抗体ABO血型系统抗原抗体简介正定型用抗-A和抗-B检测红细胞上是否存在A和/或B抗原反定型用已知的A1和B型红细胞检测血清或血浆中的抗A和或B抗体准确定型必须进行正反定型并且正反定型的结果必须相互对应一致，符合Landsteiner规则血型鉴定方法ABO血型鉴定单独的正定型或反定型都不能准确鉴定血型正定型（检测抗原）反定型（检测抗体）血型红细胞悬液+标准血清患者血清+标准反定红细胞抗A抗BA细胞B细胞--++O++--AB+--+A-++-B血型鉴定方法玻片法/纸板法/瓷板法优点操作简单费用低廉缺点反应不充分易污染边缘易干涸，造成假阳性试管法优点反应充分快速、准确结果可靠适用于所有血型血清学试验对于有疑问的血型均需转入试管法处理缺点不适用于批量检测血型鉴定方法柱凝集法ABO/RhD卡的微管中装填有葡聚糖凝胶（或玻璃微珠）颗粒和抗A、抗B、抗D标准血清如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应凝胶（或玻璃微珠）颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶（或玻璃珠）颗粒，使其悬浮在凝胶（或玻璃珠）颗粒中未凝集的红细胞则可以通过凝胶（或玻璃微珠）颗粒间的微小空隙到达微管底部反定型将患者血清与标准红细胞分别加入微柱孔内，其反应原理同正定型血型鉴定方法柱凝集法优点标准化程度高重复性强试验结果准确可靠标本用量少仪器检测可拍照存档便于查找结果，提供法律证据缺点抗蛋白干扰能力较差对细胞浓度要求较高血型鉴定方法微孔板法聚氯乙烯（PVC）或聚苯乙烯（PS）制成的U型底微板在其孔中添加受检者红细胞悬液和标准血清（或受检者血浆和反定红细胞）经室温孵育后，振荡、离心平铺于微孔底部为阳性者；在微孔底部聚集成纽扣状为阴性优缺点适用于批量检测需要专用的仪器设备血型鉴定方法试管法血型操作技巧红细胞浓度约为3%-5%(1ml生理盐水+1d压积红细胞）正定型：1d标准血清+1d患者红细胞（3%-5%）反定型：1d试剂红细胞+2d患者血清离心力：1000g,15s结果判读：用液体轻轻冲刷细胞扣边缘，仔细观察细胞扣的变化边缘齐整脱落，为阴性边缘呈不规则形状脱落，如月牙边，锯齿等，为阳性强度判断：离心完后立即看结果，以细胞扣刚刚脱落完时状态，判断强度血型鉴定方法何谓有疑问的血型？？正定型与反定型结果不一致正定型凝集强度3+质控孔阳性反定型凝集强度2+不该凝集的一端出现任意凝集强度O型反定强度不平行血型鉴定判断标准4+红细胞凝集成一大块，液体背景透明，无游离红细胞3+一个大凝块，周围有少量小凝块或数个大凝集块，液体背景透明，无游离红细胞血型鉴定判断标准2+有很多小凝集块，液体背景透明，无游离红细胞1+有许多很小的凝集块，肉眼可见，液体背景不透明，有游离红细胞1+2+3+血型鉴定判断标准双群游离红细胞与凝集红细胞同时存在，试管法呈“油煎蛋样”；镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍呈分散分布溶血红细胞崩解呈红色透明外观血型鉴定判断标准镜下红细胞凝集状态阴性缗钱状凝集真凝集血型鉴定判断标准反应强度具体描述4+红细胞凝集成一大块，液体背景透明，无游离红细胞3+数个大凝集块，液体背景透明，无游离红细胞2+有很多小凝集块，液体背景透明，无游离红细胞1+有许多很小的凝集块，肉眼可见，液体背景不透明，有游离红细胞±微小的凝集块，肉眼很难看清，需要用显微镜观察；镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞混合外观游离红细胞与凝集红细胞同时存在，试管法呈“油煎蛋样”；镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍呈分散分布溶血红细胞崩解，呈红色透明外观阴性无凝集，无溶血，完全都是游离红细胞玻片法/纸板法/试管法凝集强度判断血型鉴定判断标准4+红细胞全部凝集在微柱顶部3+凝块绝大部分在微柱顶部，微柱的上1/2处有少量凝集红细胞存在2+凝块大部分在微柱的中部，少部分在微柱中下部1+凝块大部分在微柱底部，少部分在微柱下1/2处+/-凝块绝大部分在微柱底部，在微柱下1/3处有极少数散在红细胞凝块-凝块清楚的沉淀在微柱底部，微柱内无任何凝块溶血微柱内无游离或凝集的红细胞，呈清澈透明红色双群凝集红细胞位于微柱顶部和未凝集红细胞位于微柱底部血型鉴定判断标准漏加试剂耗材效期离心力污染记录错误检查标本质量检查操作程序查阅相关信息试管法复查溶血乳糜凝块黄疸蛋白析出血液稀释诊断输血史妊娠史移植史初检血型细胞浓度手法轻柔镜检正反定型不一致原因分析正定型凝集强度较弱（3+）新生儿检查正定型由于新生儿红细胞上针对糖苷转移酶的底物少，只有约成人的1/4，造成ABO血型抗原较成人弱新生儿出生时，一般没有抗-A、抗-B不断地接受外来抗原免疫，逐渐产生抗-A、-B和抗-A、B新生儿IgMABO抗体出生3—6个月才合成血液病患者急性白血病患者会导致部分血型抗原表达不全血浆中含高浓度A或B物质中和抗体试剂洗涤患者红细胞后复查正反定型不一致原因分析正定型凝集强度较弱（双群）输注不同型红细胞到达输入红细胞存活期后消失查询既往检查结果验证异基因移植后患者处于血型转换期一般至患者自身红细胞生成结束后消失，也可能持续存在参照病历检查记录，明确供受者血型A3或B3亚型嵌合体正反定型不一致原因分析正定型凝集强度较弱（3+或dp）ABO亚型血清学检测–应用人源血清–更换单克隆试剂血清–加做抗A1，抗H，抗AB，A2细胞，O细胞–抗H反应强度：OA2A2BBA1A1B–4℃加强，需做对照吸收放散–人源血清–不是所有单克隆血清都适宜做吸收放散唾液型物质试验–分泌型人群正反定型不一致原因分析正定型凝集强度过强（不该凝集的出现凝集）冷抗体温盐水洗涤置于37℃水浴反应包被抗体2-MeDTT二磷酸氯喹45℃热放散56℃热放散正反定型不一致原因分析反定型凝集强度偏弱（2+）抗体减弱:新生儿、老年人、肿瘤、免疫低下、免疫缺陷、应用免疫抑制药物的患者增强实验–室温孵育–增大血浆比例（6d加强）–4℃加强（必须加对照）血液病患者低球蛋白的淋巴瘤病人（恶性）异基因移植患者前带现象稀释血清正反定型不一致原因分析反定型不该凝集出现凝集蛋白干扰（缗钱状凝集）生理盐水稀释3倍盐水替代实验自身抗体明确抗体类型IgM类抗体用2-Me或DTT处理冷抗体干扰置于37℃水浴反应Oc吸收正反定型不一致原因分析反定型不该凝集出现凝集同种抗体干扰明确抗体特异性选相应抗原阴性红细胞为反定细胞加以验证亚型吸收放散实验唾液型物质试验加做A2细胞正反定型不一致原因分析试剂红细胞ABO反定型细胞主要包括A1、A2、B、Ｏ型试剂红细胞标准血清正反定型不一致原因分析其他试剂抗A1：区分A1(A和A1抗原)和A2（A抗原）抗AB：Ax