Rosetta(DE3)大肠杆菌表达菌株使用说明

Rosetta(DE3)大肠杆菌表达菌株  编号  名称  北京华越洋生物NRR00880  Rosetta(DE3)大肠杆菌表达菌株  基本信息：                  名称：Rosetta(DE3)大肠杆菌表达菌株                    规格：300ul甘油菌    储存温度：-­‐80℃  基因组：                  F–  ompThsdSB(rB-­‐    mB-­‐)  gal  dcm  (DE3)pRARE2(CamR)  简介：                  Rosetta系列菌株来源于BL21系列宿主菌，该系列菌株含有原本在大肠杆菌中稀少的真核细胞密码子，增加了真核细胞的蛋白表达水平。Rosetta(DE3)菌株含有pRARE质粒，能够提供AUA,  AGG,  AGA,  CUA,  CCC,  和GGA稀有密码子的tRNA，该质粒具有氯霉素抗性。Rosetta(DE3)通过提供稀有密码子，使得该宿主菌相对于其他大肠杆菌，能够提供更加“通用”的蛋白质表达，从而提升目的蛋白表达水平。DE3是溶源性的  λDE3,  所以带有T7  RNA聚合酶的染色体拷贝。该菌株适用于pET系列载体，及其他T7启动子系列载体。    操作说明：    1，本品包含一份甘油菌，使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。  2，为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽量先划平板，然后再挑单克隆菌落进行后续操作。    冷冻管开封：  用浸过75%酒精的脱脂棉严格消毒冷冻管盖。    菌株复溶：  无菌环境中旋开装有复溶液的滴瓶盖，吸取1ml  左右复溶液，加入到冷冻管中。轻轻振荡，使冻干菌株溶解呈悬浮状。  菌株复壮：  用无菌吸管吸取菌悬液，转移到复溶液滴瓶中。做好标识，在适宜温度下培养。细菌在30-­‐35℃培养箱中培养24-­‐48h，真菌在23-­‐28℃培养箱中培养24-­‐72h（必要时，可适当延长培养时间）。    菌株传代：  将得到的菌株的新鲜培养物转接到适宜的固体培养基及液体培养基中（尽量增大接种量：如用无菌吸管吸取≥50μl  新鲜培养物至固体培养基，边移动边缓慢释放），适宜温度下培养，用以菌株的保藏、传代及制备工作菌株。    注意事项：  1、菌种活化前，将冷冻管保存在低温、清洁、干燥的环境中，长时间室温下放置会导致菌种衰退；  2、冷冻管开封、冻干粉复溶、菌株恢复培养等操作应在无菌条件下进行；  3、一些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，部分需连续两次继代培养才能正常生长；  4、苛养菌的培养需采用含特定营养成分的培养基，敬请正确选择，不清楚时来电询问；  5、某些厌氧菌的培养，自开封到接种完成，均需以无氧气体充填，以保持厌氧状态；培养过程中亦要保持厌氧状态；  6、某些菌种，如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌等需要5-­‐10%CO2  促进生长；  7、如发现冷冻管盖松动、复溶液浑浊等异常情况，应停止使用对应产品。  8、部分菌种有致病性、扩散性，请专业人员在专业环境下有保护性操作。    保藏条件：  -­‐20℃保存（复溶液于2-­‐8℃保存）    保藏时间：  2-­‐10  年，应根据菌种状况及时转接