HPV基因诊断试剂盒

子宫颈癌与人乳头瘤病毒（HPV）的研究进展一、宫颈癌的概述及其病因学研究进展二、HPV的生物学研究三、宫颈癌的早期筛查四、宫颈病变的治疗一、宫颈癌的概述及其病因学研究进展宫颈癌－－最常见的妇科恶性肿瘤据世界范围内统计，每年大约有50万左右的宫颈癌新发病例，占所有癌症新发病例的5%，其中80%的病例发生在发展中国家。我国每年宫颈癌新发病例约13.15万，占世界宫颈癌新发病例总数的28.8%，发病率仅次于乳腺癌位居第二。随着筛查制度的建立，世界宫颈癌的发病率和死亡率已经大幅下降。我国由70年代的10.28/10万下降到90年代的3.25/10万，但在高发病区，死亡率仍高居不下。地区死亡率(/10万）世界8.00中国3.25北京2.54上海3.8山西阳城36.00患病年龄更趋于年轻化（发病年龄提前到45岁），发病史缩短。如吉林省在80年代统计宫颈癌患者中小于35岁的妇女占4.8％，而2000年已经占到34.1％子宫颈癌的危险因素：行为危险因素：如性生活过早、多个性伴侣、多孕多产、社会经济地位低下、营养不良及性混乱等；生物学因素：如细菌、病毒和衣原体等各种微生物的感染。目前仅有少量研究表明宫颈癌可能存在着家族聚集现象。宫颈癌的生物学病因研究进展：*早在十九世纪四十年代，一位意大利医生RegoniStern最早提出结婚与否与宫颈癌的发生可能有关；*60－70年代，人们的主要研究对象是HSV,HCMV等病原体；*1974年zurHausen首次提出HPV感染与宫颈肿瘤有密切关系；*1977年Laverty在电镜中观察到宫颈癌活检组织中存在人乳头状瘤病毒（Humanpapillomavirus，HPV）颗粒；*1995年IARC专题讨论会：高危型HPV持续感染是宫颈癌的主要病因。---99.7％的宫颈癌患者都能发现高危型HPV感染。二、HPV的生物学研究人乳头瘤病毒（HumanPapillomaviruses,HPV）双链DNA无包膜病毒环状DNA，约8Kb；病毒颗粒直径为50～55nm；依靠宿主细胞进行复制、转录和翻译。HPV病毒电镜图型别：已发现100多种不同的亚型（如果DNA序列同源性小于90％，则定为新的亚型）。其中超过35种可以感染人类的生殖器官，约30种与肿瘤有关。1）低危型：宫颈上皮内低度病变，引起外生殖器湿疣等良性性病（HPV6、11、42）；2）高危型：宫颈上皮内高度病变，与宫颈癌的发生有关（HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66及68）；分布：有些亚型和地区、宫颈癌的病理类型有关。HPV45在非洲西部很常见，HPV39和59在美洲中部和南部常见，HPV52，58在中国常见。在宫颈鳞状上皮细胞癌中以HPV16（占51％），在腺癌和腺鳞癌中HPV18分别占56％和39％。型别与分布表HPV型别与宫颈病变常见HPV型别宫颈病变6，11湿疣，CINI16CIN,18CIN30，40，58，69CIN31，33，35，39CIN45，51，52，56CINI42，43，44CINI53正常宫颈上皮54尖锐湿疣55鲍温样丘疹病59VIN61，62，64，67VaIN66鳞癌70外阴乳头状瘤HPV在欧洲的常见分型和感染率最常见的低危型（HPV6、11）最常见的高危型（HPV16、18、31、33、45、58）53%15%9%6%3%14%HPV16HPV18HPV45HPV31HPV33Other宫颈癌患者中高危型HPV感染率(欧州2000年资料)深圳不同HPV亚型的检出频率统计（WHO项目）注：1.本表统计样本数为1153例，其中阳性样本数为119例；由于检测样本中存在复合感染，故亚型的检出频率＝（该亚型的检出次数/所有亚型的检出次数）×100％，所有亚型检出次数为226。2.本表统计数据由WHO深圳项目提供，HPV分型基因检测试剂由亚能生物技术（深圳）有限公司提供。浙江12000例HPV检测初步结果分型情况：16型占26%左右，其他依次为58、33、52、45、18。与其他地区的统计有明显差异。高危人群阳性率在30%左右，普通人群在11%左右。温州地区丽水地区阳性率明显高于省内其他地区。进一步的研究正在进行中。HPV基因结构按功能可分为早期区(E区)、晚期区(L区)和非编码区（LCR）三个区域。E区分为E1～E7开放阅读框架，主要编码与病毒复制、转录、调控和细胞转化有关的蛋白（HPV无E3）。L区分L1和L2，分别编码主要衣壳蛋白和次要衣壳蛋白。LCR是E区与L区间-6.4～1.0Kb的DNA片段，可负责转录和复制的调控HPV的致癌机理HPV以游离态感染上皮细胞后，可以持续存在于染色体外，不引起任何病变，或引起良性病变和低度病变，如尖锐湿疣或轻度不典型增生等。而癌变则与病毒DNA整合入宿主染色体密切相关。高危型HPVDNA链通常在E1或E2的开放读码框内断裂，使HPVDNA整合入染色体脆弱区。E6和E7具有促进和维持整合状态的功能。HPVE6蛋白间接抑制p53活性，阻碍细胞对DNA损伤的反应。（负向调节细胞的生长和分化）HPVE7蛋白与pRb结合后使其功能失活，改变细胞周期的正常调控。国内对不同亚型感染致病性研究近况北京大学第一临床医院赵健等对1715例患者研究表明：在高危型中，致癌性最强的是16型，其次是33和31型。（十五攻关资助项目）。在北京中日友好医院进行的591例研究中，发现多重感染患者发生宫颈癌的危险性明显高于单一感染者，对放疗敏感性差，无进展生存期和带瘤生存期比单一感染者明显缩短。HPV感染途径及危险因素感染途径：•主要为性传播和直接皮肤接触•特别案例：母亲分娩过程中传播至婴儿的口腔危险因素：1、年龄因素：30岁以后HPV感染率下降，但危险性提高。2、性行为的影响：初次性交年龄越小，性伴侣数量越多，感染率越高；3、避孕方法：尚无一致意见；4、免疫抑制状态使HPV感染的危险性增加：如HIV感染后、肾移植等。三、宫颈癌的早期筛查未见上皮内病变－－鳞状上皮细胞异常－－腺上皮细胞异常ASC（AtypicalSquamousCells)：非典型鳞状上皮细胞ASC-US（ASCofUndeterminedSignification）:意义不明确的非典型鳞状上皮细胞ASC-H（ASCcannotexcludeHSIL）：意义不明确的非典型鳞状上皮细胞不除外高度鳞状上皮内病变L-SIL（Low－gradeSquamousIntraepithelialLesion）：低度鳞状上皮内病变－－－HPV感染、CINIH-SIL（High－gradeSIL）：高度鳞状上皮内病变－－－与CINII、CINIII或原位癌含义一致SCC（SquamousCellCarcinoma）：鳞状细胞癌AGC（AtypicalGlandularCells)：非典型腺上皮细胞AIS（AdenocarcinomaInSitu)：腺原位癌ACA（Adenocarcinoma）：腺癌组织学检查的分类：CIN（CervicalIntraepithelialNeoplasm)：宫颈上皮内瘤变CINI：轻度不典型增生CINII：中度不典型增生CINIII：重度不典型增生、原位癌2001年版TBS（TheBethesdaSystem)报告分类中常见的细胞学诊断宫颈癌前病变的几个术语解释：正常妇女HPV暴露主要是性传播感染几率：40％HPV年龄30岁一过性，80％平均8个月年龄30岁平均8~24个月CINI（组织学）CINII/III（组织学）无细胞学改变/HPV消除子宫颈浸润癌机体免疫机制辅助致癌因素图HPV感染与宫颈病变的自然过程潜伏感染期亚临床感染期临床症状期HPV相关肿瘤期8－10年临床提示，从HPV的持续感染到一般的宫颈癌前病变并最终发展为宫颈癌大约需要8-10年。因此，必须采取适当的预防和筛查措施，才能够阻止宫颈癌的发生并有望最终消灭宫颈癌。在现代医学技术的支持下，妇科医生应该大有作为。筛查是早诊早治关键筛查间隔时间（年）1233～55～1010阳性病变风险系数122.5349备注：1～3年筛查间隔比较安全，随着筛查间隔的增加，风险大幅度增加。表：筛查间隔时间与阳性病变风险系数表表：不同的筛查频率，可以降低的宫颈癌的累积发病率筛查频率累积发病率的降低（％）每年筛查一次90-93每两年筛查一次86-91每三年筛查一次75-88一生筛查5次61-74一生筛查3次35-55一生筛查2次29-42一生筛查一次17-32摘自：GoldieSJ,etal.2001.13；筛查策略所应用方法包括：1-VIA检查，2-HPV检测，3-巴氏涂片。筛查对象：三年以上性行为或21岁以上有性行为的妇女。起始年龄：经济发达地区：25～30岁，经济欠发达地区：35～40岁，高危人群起始年龄应相应提前。终止年龄：65岁以上危险性极低。筛查间隔：每年一次，若连续两次HPV和细胞学筛查均为正常，可延长筛查间隔时间至5～8年。发达国家：16—68岁，HPV+TCT，间隔3—5年。中国癌症研究基金会（CCRF）宫颈癌筛查及早诊早治指南中国癌症研究基金会（CCRF）宫颈癌筛查及早诊早治指南筛查方案：基本方案：肉眼观察＋冰醋酸试验（碘液试验）（农村普查）一般方案：HPV+papsmear检测（二级及以上医院）最佳方案：HPV+TCT检测（发达地区）检查后随访对象：细胞学低度病变、CINI以上者、“特殊职业”妇女人群、年龄30岁以上的高危HPV感染者，每年定期随访检查。注意事项：1、月经来潮后10～18天为最佳检查时间2、检查前48h内不要做阴道冲洗，不用使用阴道内用药物3、检查前48h内不要行性生活宫颈癌的常规临床检测方法临床检查：如肉眼观察、阴道镜等操作简便，但准确率和特异性有待提高（50-70％）细胞学检测：观察宫颈上皮细胞的变异，常见方法有：巴氏涂片、LCT、TCT等（70%以上）1）长期宫颈糜烂可导致宫颈上皮细胞形态变异，但非HPV引起的细胞形态异常与宫颈癌病变没有直接联系。2）在感染早期，细胞往往不会出现形态变化，但此时HPV对细胞内遗传物质的损伤可能已经产生。病毒学检测：HPVDNA检测（PCR方法），常见方法有：基因芯片分型检测、HC-2、荧光PCR等特异性强、灵敏度高，操作简便快捷(98%)宫颈分泌物HPV结果HPV检测例数阳性例数阳性率（%）HC2113715914亚能11371119.8凯谱2509839.2注：亚能和凯普均以13种高危型别统计若以23种型别计算，亚能HPV阳性129例，阳性率为11.3％。共剔除18例13种型别以外的型别HPV基因分型快速诊断试剂应用膜杂交技术建立的敏感、特异、简便的检测方法，可同时对23种HPV亚型(18种高危型及5种低危型)进行检测。基因芯片（GeneChip）就是将大量不同序列的探针分子固定于支持物的不同位置上，然后与已做标记的样本进行杂交，通过检测杂交信号的强度和分布来进行分析。高度的灵敏性和准确性快速简便同时检测多种疾病HPV基因分型快速诊断试剂操作流程采集样本提取DNAPCR扩增杂交显色结果判断检测结果：HPV16、HPV43检测结果：HPV33、HPV35（一）宫颈病变的筛查1、HPV检测的最大优势之一在于发现高危型HPV阳性而细胞学涂片正常的妇女，因为这一人群中10％会在四年内发展成CINⅢ。2、筛查并浓缩高风险人群，便于进行有效监控，早期发现宫颈癌。3、HPV检测的阴性预测值为99％，可将筛查间隔延长至3年一次，大大地降低了检查成本。敏感性：88－100％特异性：98％阴性预测值：几乎100％HPV检测的临床意义图：德、法、英三个国家研究数据总概HPV（＋）是宫颈病变的重要依据，持续的HPV感染是CINII/CINIII的重要条件，相对于TCT检测，HPV检测敏感度更高，更有临床意义，在欧洲已经作为首选筛查方法。GC-HPV与TCT的差异GC-HPVTCT两种检测的差异病原学检测细胞学检测两种检测对宫颈癌筛查的提示全程提示即时提示临床意