拟南芥叶片DNA提取方法

拟南芥叶片DNA提取方法提取液配方:Edward´sbuffer:主要成分是：NaCl，Tris-HCl（PH=7.5），EDTA（PH=8），SDS。NaCl，Tris-HCl主要是调节溶液的PH，维持一定的离子浓度,提供一个缓冲液的环境，防止核酸被破坏；EDTA主要是二价金属离子的螯合剂，使影响DNA的DNA酶中的钙离子，锰离子，镁离子等和EDTA结合，使酶失去活性，有利于提取完整DNA；SDS主要是和蛋白质结合，使其变形沉淀，从而利于DNA的提取，减少和清除蛋白质杂质，裂解细胞。配方：每升中加入EDTA9.3g，SDS5g，NaCl14.6g，Tris24.2g相当于Tris200mMPH=7.5EDTA25mMPH=8注意：Tris与EDTA应当分别配好调PH值器材：灭菌的研磨棒，离心管，配好的DNA提取液，1000μl的移液枪，预冷的异丙醇，离心机，70％的乙醇，灭菌水拟南芥DNA粗提步骤：１．选取两片适当大小的叶片放入1.5ml离心管（已标记）中，研磨至匀浆状；２．加入DNA提取液200μl溶解，同时再次磨样，使之彻底为匀浆，摇匀；３．在13400rpm条件下，离心10min，取上清至另一新离心管（同标记）中，弃去沉淀，（切记：宁少勿沉淀）；４．加入150μl异丙醇（-20℃预冷）至管中，摇晃混匀，室温放置5min，析出DNA；５．在13400rpm下，离心5min，弃上清，留沉淀；６．向沉淀中加入300μl、70%的乙醇，进行洗涤，然后在13400rpm下，离心5min，重复一次；７．倒出乙醇，在超净工作台上吹干，加入70μl灭菌水溶解，13400rpm下，离心5min，吸取上清液，转至另一新管中备用。