Hela细胞培养

Hela细胞（人宫颈癌细胞）实验准备工作1、Hela细胞（人宫颈癌细胞）2、细胞培养试剂：DMEM培养基，胎牛血清，青霉素，链霉素，0.25%胰蛋白酶（含0.02%的EDTA），PBS等3、培养器具：培养瓶、烧杯、镊子、酒精棉、离心管、改良吸管、胶头吸管、细胞计数板、毛细管等。4、实验设备:二氧化碳培养箱、光学显微镜、无菌操作台、恒温水浴锅、酒精灯。5、细胞冻存和复苏的方法冻存液：含10%血清的完全培养基和5％-10%DMSO取对数生长期细胞，精胰酶消化后加入适量冻存液，用吸管吹打制成细胞悬液（1×106~5×106细胞/ml），加入1ml细胞于冻存管中，密封后标记细胞名称和冷冻日期。复苏细胞是从零下80℃冰箱或液氮罐中取出冻存管，迅速投入37℃水浴中，使其融化（1分钟左右），用培养集缓慢稀释至原体积的10倍以上，大部分细胞完全贴壁后（4~6小时），吸取含有冻存液的培养基，并换成完全培养基。细胞复苏实验步骤1.从零下80℃冰箱或者液氮罐中取出冷冻管，迅速投入37℃水浴中，使其融化（1分钟左右）。2．培养基缓慢稀释至原体积的10倍以上。3.1低速离心10分钟，吸去上清，加入新鲜的培养基培养刚复苏的细胞。3.2六个小时细胞完全贴壁后吸去含有冻存液的培养基并换成完全培养基。6、细胞传代实验步骤取密度80％左右的Hela细胞，吸去旧的培养基，用PBS或者Trypsin消化液润洗细胞以减少残留的血清对Trypsin的抑制作用。吸去PBS或者Trypsin，加入Trypsin消化液，于37℃消化2～4分钟，于倒置显微镜下观察，当细胞之间出现间时或者变圆时，吸掉Trypsin消化液。(也可以直接加入适量含血清的新鲜培养基终止Trypsin的消化作用并进行吹打分离细胞，消化细胞时应静置以避免漂浮的细胞滚动成团)加入适量新鲜培养基，用移液器上下吹打数次打散细胞团块以尽可能形成单细胞悬液，吹打均匀后，按照稀释比例转移至新的培养瓶中，补充完全培养基并以正常培养条件培养。